甘蓝显性雄性不育基因的延长随机引物扩增DNA(ERPAD)标记

获得了一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的延长随机引物扩增ＤＮＡ（ＥｘｔｅｎｄｅｄＲａｎｄｏｍＰｒｉｍｅｒＡｍｐｌｉｆｉｅｄＤＮＡ，ＥＲＰＡＤ）标记ＥＰＴ１１９００。ＥＰＴ１１９００是在与甘蓝显性雄性不育基因连锁的ＲＡＰＤ标记ＯＴ１１９００的基础上，通过逐步筛选３’端延长的随机引物的方法转化而成的稳定性和特异性都得到增强的新标记。这种标记的稳定性和特异性接近ＳＣＡＲ标记，但不需要克隆和测序。该方法首先根据ＯＰＴ１１的序列合成３’端添加Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ４种碱基的４个引物，组成１０个引物对。以不育池为模板筛选出ＯＴ１１Ｃ＋ＯＴ１１Ｇ为唯一能够扩增长度与ＯＴ１１９００相同的一个片段的引物对。在此引物对基础上，又添加４种碱基得到８个新的引物，相互组合成１６个引物对。进一步以不育池为模板筛选出ＯＴ１１ＣＴ＋ＯＴ１１ＧＡ，在严格条件下，它可特异扩增长度与ＯＴ１１９００相同的一个片段ＥＰＴ１１９００。通过分离群体分析证实这一片段与ＯＴ１１９００处于同一位点。

红檵木的3′端延长随机引物扩增DNA(3′-ERPAD)标记

为了对 1 1 6个 1 0 -mer随机引物的RAPD分子标记进行深入了解 ,探讨分子标记与园艺性状的关系 ,筛选出多态性明显、重复性好、亮度大、分子量也较大 ( 1 0 31bp以上 )的 1 0 -mer随机引物 ,在其 3’端添加一任意碱基 ,对 1 4个红木材料和 2个来源不同的生态型木材料进行 3’ -ERPAD标记分析。发现在S2和S35的延伸引物中能够得到最佳扩增结果的引物对是S2 -G +S2-C和S35-A +S35-C ,它们的扩增结果都含有与各自基本引物相同的差异扩增带 ,这些差异带分别是S2 15 0 0 、S2 10 31和S3530 0 0 、S3590 0 、S355 6 0 。通过与园艺性状比较 ,发现S2 15 0 0

芥蓝×甘蓝F_2群体的2个RAPD标记转化为ERPAD标记的研究

在对芥蓝C100-12×甘蓝秋50-Y7杂交组合构建F2作图群体进行RAPD检测的基础上,分别对4个O12,R13,Q14,P17进行了延长1个碱基的研究,其中O12和P17能将部分特异RAPD标记转化为稳定性更强的ER-PAD标记,但对R13和Q14随机引物未找到相应的ERPAD标记。

利用分子标记EPT11_(900)辅助甘蓝显性雄性不育基因转育

利用与甘蓝显性雄性不育基因（Ｍｓ）连锁的延长随机引物扩增ＤＮＡ（ＥＲＰＡＤ）标记ＥＰＴ１１９００对３３个甘蓝自交系的多态性进行了分析。ＥＰＴ１１９００主要分布在各种早熟甘蓝中，很少存在于鸡心类型或晚熟扁圆类型甘蓝中。该结果表明：它可用于辅助大多数鸡心型或晚熟扁圆类型甘蓝的Ｍｓ基因转育；ＥＰＴ１１９００在辅助两个甘蓝自交系回交三代及两个青花菜自交系回交一代的Ｍｓ基因转育中，预测的准确性超过９０％。