基于AMPK/mTOR/ERRα信号通路探讨慈菇消脂方影响非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝细胞自噬作用机制

目的基于AMPK/mTOR/ERRα信号通路探讨慈菇消脂方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝细胞自噬的调控机制。方法小鼠随机分为空白组、模型组、慈菇消脂方组和抑制剂组,每组10只。采用蛋氨酸胆碱缺乏饲料喂养构建NASH小鼠模型,造模成功后给药组予相应药物干预,连续4周。HE染色观察小鼠肝组织形态并进行非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)活动度评分,电镜观察肝细胞超微结构,免疫组化检测肝组织Beclin1、LC3、p62蛋白表达,Western blot检测肝组织p-AMPK、p-mTOR、雌激素相关受体α(ERRα)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠肝组织出现明显脂肪变性并可见大量炎性细胞浸润,肝细胞可见大量形态较规则的单层膜脂质结构,NAFLD活动度评分升高(P<0.01),肝组织Beclin1、LC3、p-AMPK蛋白表达降低(P<0.01),p62、p-mTOR、ERRα蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠肝组织脂肪变性减少,炎性细胞浸润改善,可见少量自噬体,NAFLD活动度评分降低,肝组织Beclin1、LC3、p-AMPK蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05),p62、p-mTOR、ERRα蛋白表达降低(P<0.01)。结论慈菇消脂方可能通过调控AMPK/mTOR/ERRα信号通路相关蛋白表达介导自噬,延缓NASH进展。

结直肠癌根治性手术联合免疫治疗的效果及ERRα和ERRβ蛋白水平变化观察

目的探讨结直肠癌根治性手术联合免疫治疗的效果及ERRα、ERRβ蛋白水平变化。方法将500例结直肠癌患者随机分为观察组与对照组,每组250例患者。给予对照患者结直肠癌根治手术与常规放化疗,给予观察组患者结直肠癌根治性手术、化疗和免疫治疗。对比2组患者的治疗效果,ERRα、ERRβ蛋白水平。结果观察组患者的治疗总有效率为90.4%,对照组患者的治疗总有效率为74.8%,观察组显著高于对照组(P<0.05)。2组患者治疗后的癌组织和癌旁组织中的ERRα、ERRβ蛋白水平明显比治疗前降低了(P<0.05),且观察组治疗后癌组织和癌旁组织中的ERRα、ERRβ蛋白水平明显低于对照组(P<0.05)。对照组患者不良反应的总发生率为49.6%,观察组患者不良反应的总发生率为14.0%,观察组显著低于对照组(P<0.05)。观察组患者的1年生存率为94.8%、3年生存率为84.4%,对照组患者1年生存率为78.4%、3年生存率为60.8%,观察组患者的1年生存率和3年生存率明显高于对照组(P<0.05)。结论结直肠癌根治性手术与免疫治疗后能够提升患者的治疗有效率、减少患者的不良反应,降低ERRα、ERRβ蛋白水平,提高患者远期生存率,值得临床应用推广。

雌激素相关受体α(ERRα)与肿瘤疾病的研究进展

核受体超家族中的雌激素相关受体(estrogen-related receptor,ERR)是一类无需与配体结合即可产生生物学功能的孤儿受体。近年来研究发现,EER不仅参与雌激素信号转导体系,而且与乳腺癌、前列腺癌等肿瘤疾病有密切关系。ERR主要有3种亚型,ERRα、ERRβ和ERRγ,其中ERRα最受关注。ERRα的表达与雌激素依赖性肿瘤(如乳腺癌、子宫内膜癌)及非雌激素依赖性肿瘤(如胃腺癌,结直肠癌)均密切相关。本文将介绍ERRα与肿瘤疾病相关性的研究进展。

耐力训练对不同AMPKα2基因状态小鼠骨骼肌细胞核蛋白PGC-1α、ERRα表达及PGC-1α/ERRα结合量的影响

目的:探讨耐力训练对不同AMPKα2基因状态小鼠骨骼肌细胞核蛋白PGC-1α、ERRα表达和PGC-1α/ERRα结合量的影响。方法:C57BL/6J野生鼠(WT鼠)、AMPKα2转基因鼠(TG鼠)和AMPKα2基因敲除鼠(KO鼠)各20只,分别分为安静对照组(C组)和耐力训练组(T组)。耐力训练组小鼠进行持续4周、每周一至周六、每天1小时的跑台训练,跑台坡度为0,速度12米/分钟。安静对照组小鼠饲养环境与耐力训练组相同,但不参与训练。完成训练16小时后取鼠小腿三头肌,采用蛋白印迹法测定核内ERRα和PGC-1α蛋白表达量,免疫共沉淀法测定核内PGC-1α/ERRα结合量。结果:1.耐力训练组所有小鼠骨骼肌核蛋白ERRα表达量均高于相应的安静对照组,而不同AMPKα2基因状态组间核蛋白ERRα表达量无明显差异。2.耐力训练组所有小鼠骨骼肌细胞核蛋白PGC-1α表达量均高于相应的安静对照组。TG鼠安静时和运动训练后核蛋白PGC-1α表达与WT鼠相比显著增加。3.与安静组相比,三种基因状态小鼠运动后骨骼肌细胞核内PGC-1α/ERRα蛋白结合量显著提高。与WT鼠相比,TG鼠安静时和运动训练后核内PGC-1α/ERRα结合量显著增加。结论:1.耐力训练显著增加AMPKα2三种基因状态小鼠骨骼肌细胞核内ERRα蛋白表达、PGC-1α蛋白表达和PGC-1α/ERRα结合量。2.与野生鼠相比,AMPKα2转基因鼠安静时和耐力训练后骨骼肌细胞核内PGC-1α蛋白表达和PGC-1α/ERRα结合量显著提高,可能与AMPKα2转基因鼠骨骼肌中AMPKα2蛋白表达量显著增加有关,核蛋白PGC-1α表达量对PGC-1α/ERRα结合量有重要影响。3.与野生鼠相比,安静时和耐力训练后AMPKα2敲除鼠骨骼肌细胞核内ERRα蛋白表达、PGC-1α蛋白表达和PGC-1α/ERRα结合量均无显著差异,提示AMPKα2基因敲除鼠体内可能存在除AMPKα2外的其他信号通路,可代偿AMPKα2缺失的影响。

PGC-1α和ERRγ在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子1α(PGC-1α)及雌激素受体相关受体γ(ERRγ)在子宫内膜组织中的表达和临床意义及两者的相关性。方法:采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术(streptavidin biotin-peroxidase complex method,SABC)检测子宫内膜癌组织80例、正常子宫内膜组织15例、子宫内膜增生症25例中的PGC-1α和ERRγ的表达情况,分析其与临床病理参数的关系。结果:子宫内膜癌组织中,PGC-1α的阳性表达率为53.75%,ERRγ的阳性表达率为56.25%,显著高于正常子宫内膜组织及子宫内膜增生症,差异有统计学意义(P<0.05)。在子宫内膜癌组织中,PGC-1α和ERRγ的阳性表达率III+IV期组高于I+II期组、肌层浸润深度≥1/2组高于<1/2组,差异有统计学意义(P<0.05),ERRγ的阳性表达率在ER(+)组高于ER(-)组,差异有统计学意义(P=0.043)。在子宫内膜癌组织中PGC-1α和ERRγ表达呈正相关(rs=0.243,P<0.05)。结论:PGC-1α和ERRγ在子宫内膜癌中常呈阳性表达,且与恶性程度相关,二者表达具有相关性,PGC-1α和ERRγ有望成为预测子宫内膜癌恶性程度的潜在生物学指标。

ERRα/γ的能量代谢调节作用及其与HIF、运动关系研究进展

雌激素相关受体(ERRs)家族的两个成员ERRα和ERRγ与机体能量代谢关系密切。近年来研究发现,ERRs与肥胖、2型糖尿病等代谢性疾病密切相关,ERRs对葡萄糖和脂肪酸有氧氧化以及线粒体能量代谢的调节作用引起了人们的关注。运动有利于改善肥胖、2型糖尿病和心血管疾病等代谢性疾病的临床症状。低氧运动渐受推崇,而低氧诱导因子(HIF)在细胞的低氧应答中起关键调节作用。本综述以ERRα/γ为切入点,对ERRα/γ在糖代谢、脂肪酸氧化和线粒体生物合成等方面的作用,以及ERRα/γ与HIF、运动之间关系的相关研究进展进行概述和归纳,为运动训练、运动对代谢性疾病的防治等相关领域的研究提供理论参考。

雌激素相关受体ERR的功能及其调控

雌激素相关受体(estrogen-relatedreceptor,ERR)属于核受体超家族,是第一个发现的孤儿核受体,包括ERRα,ERRβ和ERRγ.ERR的生物学功能主要体现在以不同的方式参与雌激素信号途径,ERR与雌激素受体(estrogenreceptor,ER)在骨骼组织和乳腺组织中拥有共同的靶基因,其中ERRα和ERRγ的表达状况还可作为乳腺癌诊断标志.另外,ERR还在代谢调控中起重要作用.由于至今未在体内找到ERR的小分子配体,因而找到ERR活性调节因子对理解与雌激素相关的疾病如骨质疏松症、乳腺癌和糖尿病等将是非常有用的.

花绒寄甲ERR和bHLH基因筛选与序列分析

采用Blast X比对、ORFfinder查询开放阅读框、MEGA建立Neighbour-Joining系统发育树、EXPASY分析序列组成及ProtScale和HNN预测氨基酸序列的基本性质及二级结构等生物信息学手段,对花绒寄甲的ERR和bHLH基因研究,共得到具有完整开放阅读框的ERR序列1条和bHLH序列5条,其氨基酸序列二级结构均由α-螺旋、延伸链、无规则卷曲组成,并确定花绒寄甲bHLH转录因子基序长度为52-55aa。花绒寄甲ERR和bHLH基因在转录组中得到确定,它们在进化关系中与鞘翅目模式昆虫赤拟谷盗更为接近,花绒寄甲的bHLH转录因子基序长度与家蚕和果蝇一致。

脱垂子宫主骶韧带ERRα表达及17-β雌二醇对其成纤维细胞周期影响的研究

目的:探讨ERRα在脱垂子宫主骶韧带的表达及17-β雌二醇(17-βE2)对其成纤维细胞周期影响。方法:取10例未脱垂子宫主骶韧带组织和10例脱垂子宫主骶韧带组织,使用流式细胞仪定量检测ERRα表达情况。对10例脱垂子宫主骶韧带组织进行原代细胞培养,传代细胞分别用浓度0.1、1.0、10.0、100.0nmol/L17-βE2作用48h,流式细胞仪术分析刺激后细胞的细胞周期,采用增殖指数(PI)进行比较。结果:ERRα在子宫主骶韧带有表达,且未脱垂子宫主骶韧带ERRα表达量高于脱垂子宫主骶韧带的表达量(P<0.05)。10.0nmol/L的17-βE2作用组的PI高于对照组(P<0.05)。而100.0nmol/L的17-βE2作用组的PI低于对照组(P<0.05)。结论:脱垂子宫主骶韧带ERRα表达量降低。10.0nmol/L17-βE2能促进韧带成纤维细胞生长,100.0nmol/L17-βE2能抑制韧带成纤维细胞生长。

肌钙蛋白I2的原核表达及与ERRα1的体外相互作用

孤儿受体雌激素受体相关受体α1(ERRα1)与乳腺癌有密切的关系.酵母双杂交筛选发现乳腺组织中肌钙蛋白I2(TNNI2)与其有明显的相互作用.为进一步研究TNNI2与ERRα1的相互作用,融合表达了GST-TNNI2原核蛋白,并体外翻译了35S标记的ERRα1蛋白,将二者共同温育进行GST捕获实验.放射自显影结果显示,TNNI2能够捕获35S标记的ERRα1,证明TNNI2与ERRα1存在体外直接的相互结合,提示了肌钙蛋白I2在ERRα1参与的生理过程中可能有重要的作用.

NET-1、ERRα在胃癌中的相关性及意义

目的研究胃癌组织中NET-1和雌激素受体相关受体(ERRα)表达相关性及意义。方法应用免疫组化法检测72例胃癌组织中NET-1和ERRα的表达,对两指标均阳性病例行免疫组化双标双染,原位检测两指标的表达特点和比邻关系。结果胃癌组织中NET-1和ERRα两指标阳性表达呈正相关;两指标高表达分别与癌分化呈负相关、与癌临床分期呈正相关;NET-1表达与癌淋巴结转移呈正相关;ERRα与患者生存率呈负相关。结论NET-1、ERRα是判断胃癌预后的有价值的标记物。

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞孤儿受体ERRα的调控作用

目的:探讨孤儿受体ERRα与雌激素(E)、孕激素(P)之间的相互关系及其在子宫内膜癌发病中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法,检测不同浓度(10-10, 10-8, 10-6 mol/L)17β雌二醇(17βE2 )作用于Ishikawa细胞系不同时间(0min, 15min, 30min和24h)后ERRαmRNA的变化,并应用ER拮抗剂ICI182780同时作用细胞,观察是否可阻断E2 对ERRα的调控作用;检测不同浓度孕酮( 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 mol/L)作用于Ishikawa细胞系24h后ERRαmRNA的变化。结果: 10-10 mol/L17βE2 作用于Ishikawa细胞系15min, 30min及24h后ERRαmRNA水平与未加E2 相比均稍有增加,而10-8, 10-6 mol/L17βE2 作用于细胞系15min, 30min及24h后ERRαmRNA明显减小,以10-8 mol/L作用后减少最明显。同时加入E2 和ICI182780作用于细胞系后,E2对ERRαmRNA的减小作用被阻断。10-8mol/L孕酮作用于细胞系24h后,ERRαmRNA与对照组相比无明显变化,但加入10-7, 10-6和10-5 mol/L孕酮后,ERRαmRNA表达均出现明显增加。结论: 17βE2 可减少子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞ERRαmRNA的表达,此减少作用是通过ER介导完成的。孕酮可增加ERRαmRNA的表达。

结肠癌组织中ERRα和ERRβ的表达水平及其临床意义

目的检测结肠癌组织中雌激素相关受体α(ERRα)和ERRβ的表达水平,分析其与结肠癌临床病理特征的关系,并探讨其临床意义。方法选取手术切除的结肠癌组织及其癌旁正常结肠组织标本各63例,采用免疫组织化学法检测ERRα和ERRβ蛋白阳性表达,观察其与结肠癌临床病理特征的关系,探讨两者相关性。结果 ERRα和ERRβ蛋白表达于结肠癌及癌旁组织细胞核,在癌组织中高表达,癌旁组织中弱表达,结肠癌组织中ERRα和ERRβ蛋白的阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。ERRα和ERRβ蛋白的阳性表达与肿瘤浸润深度、远处转移、血管浸润、TNM分期及肿瘤分化程度有关(P<0.05)。Spearman rank相关分析结果显示,结肠癌组织中ERRα与ERRβ蛋白的阳性表达率呈正相关(P<0.05)。结论 ERRα和ERRβ在结肠癌组织中高表达,与结肠癌不良预后临床病理特征具有相关性,两者可能共同调控结肠癌的恶性行为。

试谈ERR对于双语教学改革的辅助作用

双语教学是目前实施素质教育的有益尝试。阐述了素质教育的内涵和双语教学的概念,探讨了高校实施双语教学的方法,重点分析了图书馆电子阅览室(Electronic ReadingRoom)辅助双语教学改革的主要方式。

肌钙蛋白I2与“孤儿”核受体ERRα1相互作用位点的鉴定

为深入研究肌钙蛋白I2（TNNI2）作为核受体相互作用蛋白参与核受体基因表达调控的分子机制，采用缺失突变联合酵母双杂交技术证明了TNNI2与ERRα1的相互作用位于TNNI2的1～128位氨基酸残基区域．该区域包括TNNI2蛋白的N末端、抑制肽段（96～116位氨基酸残基）和一个核受体结合位点LXXLL模序（即NR盒）．哺乳细胞瞬时共转染实验证实，TNNI21-128缺失突变体不具备辅助活化功能，并能作为负显性突变体完全抑制野生型TNNI2的辅活化作用．研究充分证明TNNI2与核受体的相互作用定位于TNNI2蛋白1～128氨基酸残基，并从侧面进一步证实了TNNI2能辅助核受体反式激活作用的功能．

ERRα mRNA及蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究雌激素受体相关受体α(estrogen receptor-related receptorα,ERRα)mRNA和蛋白在乳腺癌组织及乳腺癌旁组织的表达及意义,进一步探讨ERRα与乳腺癌临床病理指标[雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、人表皮生长因子受体-2(human epidemic growth factor receptor-2,Her-2)、P53],以及与乳腺癌分级、分期的相关性。方法:收集乳腺癌及对应乳腺癌旁组织标本87例,分别采用免疫组织化学染色,RT-PCR,Western blot检测ERRαmRNA和蛋白的表达情况,进一步分析ERRα的表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果:本研究中ERRαmRNA和蛋白在乳腺癌组织中的表达均高于在乳腺癌旁组织中的表达(P<0.05),且ERRα的表达与乳腺癌病理指标Her-2、ER以及肿瘤的病理分级,肿瘤大小,淋巴结转移相关,而与患者的年龄、PR、P53等无明显相关。结论:ERRα在乳腺癌中的高表达,可能作为乳腺癌一个预后不良的新的分子标记物,为乳腺癌的诊治提供新的思路。

宫颈癌组织中ERRα和ERRβ的表达及意义

目的:检测宫颈癌组织中ERRα和ERRβ的表达水平,并分析其临床意义。方法:收集2015年3月-12月我院宫颈癌手术切除的肿瘤标本47例,同期收集子宫全切宫颈无病变患者正常子宫颈组织30例为对照组,采用免疫组化法检测所有组织样本中ERRα和ERRβ表达水平,同时分析二者与宫颈癌临床病理特征、预后的相关性,并研究二者之间存在的关系。结果:宫颈癌组织ERRα、ERRβ蛋白阳性表达率(70.21%,74.47%)均明显高于正常宫颈组织ERRα、ERRβ蛋白阳性表达率(29.79%,31.91%),差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组织中ERRα和ERRβ蛋白阳性表达与患者年龄、淋巴结转移及病理类型均无关(P>0.05),与临床分期(FIGO,2019年)、肿瘤分化程度、浸润深度均有关(P<0.05);ERRα和ERRβ蛋白阳性表达患者总生存期明显短于ERRα和ERRβ蛋白阴性表达患者(t=5.325,P=0.024);经Logistic单变量回归分析发现,患者年龄、淋巴结转移、FIGO分期、肿瘤分化程度、病理类型、浸润深度、ERRα及ERRβ蛋白阳性表达均与患者预后有关(P<0.05);多因素分析发现,FIGO分期、淋巴结转移、ERRα和ERRβ蛋白阳性表达为患者预后的独立预测指标。结论:ERRα和ERRβ在宫颈癌组织中高表达,与宫颈癌患者临床病理特征及不良预后存在一定相关性,二者联合检测对宫颈癌患者预后有一定预测作用。

ERR对象与Visual Basic中的错误处理

本文介绍了VisualBasic中的错误处理机制及公用对象ERR ;在此基础上举例说明了利用错误处理实现VisualBasic未提供的功能 ,以及将错误迁入调用堆栈而后进行处理等错误处理中较为深入的问题。

补肾健脾活血中药干预膝骨关节炎模型大鼠软骨细胞IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路的变化

背景:膝骨关节炎是最常见的退行性关节疾病,其发病率和致残率高,已严重影响患者的生活质量。研究发现,补肾健脾活血中药能够改善膝骨关节炎临床症状,但其具体机制仍未阐明。目的:通过膝骨关节炎去势大鼠模型研究补肾健脾活血中药调节IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路治疗大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法:6月龄SD雌性大鼠,随机分为空白对照组、模型组、实验组和阳性对照组,模型组、实验组和阳性对照组摘除卵巢及切除交叉韧带和内侧半月板制作去势大鼠膝骨关节炎模型,术后2周实验组采用补肾健脾活血中药灌胃,阳性对照组采用塞来昔布胶囊灌胃,空白对照组和模型组以生理盐水灌胃。连续灌胃6周后取血清及膝关节软骨组织,采用ELISA检测血清雌二醇含量,分别采用荧光定量PCR和Western blot检测关节软骨组织中IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路表达水平。结果与结论:与空白对照组比较,模型组白细胞介素1β表达量明显升高,雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显降低(P<0.05);与模型组比较,实验组白细胞介素1β表达量明显降低(P<0.05),雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P<0.05);与阳性对照组比较,实验组白细胞介素1β、雌激素受体相关受体α及Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P<0.05),SRY相关蛋白9表达量明显降低(P<0.05)。实验结果表明,IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路参与膝骨关节炎软骨病变,补肾健脾活血中药可通过该机制发挥治疗作用。

BPH-1通过分泌PGE2上调前列腺间质细胞ERRα的表达

雌激素受体相关受体α(estrogen receptor-related receptorα,ERRα)是一类可以直接或间接参与雌激素应答反应的孤儿核受体,它与雌激素受体(estrogen receptor,ER)在结构上有很强的同源性.雌激素效应在良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasis,BPH)的发生和发展中起着重要的作用.通常,孤儿核受体的转录活性多受一些非经典激素如维生素A衍生物、前列腺素类、固醇的调控.本文研究前列腺上皮细胞分泌的活性因子对间质细胞ERRα表达调控的分子机制.收集前列腺增生上皮细胞系BPH-1和前列腺癌上皮细胞系DU-145的条件培养液(condition medium,CM)培养间质细胞,采用实时定量RT-PCR和Western印迹法检测前列腺间质细胞(prostatic stromal cells,PrSC)中ERRα的表达,筛选CM中影响ERRα表达的活性因子.研究结果显示,BPH-1的CM可以上调ERRα的表达,而DU-145的CM对ERRα的表达没有影响;BPH-1中合成前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的限速酶———环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)的mRNA表达水平和PGE2的分泌水平明显高于DU-145中COX-2表达水平和PGE2分泌水平;用经添加COX-2抑制剂NS-398的培养液处理BPH-1,其CM中PGE2的浓度明显下降,并失去了对ERRα表达的上调作用;添加PGE2可上调间质细胞中ERRα的表达.结果表明,BPH-1通过分泌PGE2促进间质细胞ERRα的表达,提示:在良性前列腺增生的发生和发展中,上皮细胞的旁分泌作用可促进间质细胞由ERRα介导的雌激素效应.