基于AMPK/mTOR/ERRα信号通路探讨慈菇消脂方影响非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝细胞自噬作用机制

目的基于AMPK/mTOR/ERRα信号通路探讨慈菇消脂方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝细胞自噬的调控机制。方法小鼠随机分为空白组、模型组、慈菇消脂方组和抑制剂组,每组10只。采用蛋氨酸胆碱缺乏饲料喂养构建NASH小鼠模型,造模成功后给药组予相应药物干预,连续4周。HE染色观察小鼠肝组织形态并进行非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)活动度评分,电镜观察肝细胞超微结构,免疫组化检测肝组织Beclin1、LC3、p62蛋白表达,Western blot检测肝组织p-AMPK、p-mTOR、雌激素相关受体α(ERRα)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠肝组织出现明显脂肪变性并可见大量炎性细胞浸润,肝细胞可见大量形态较规则的单层膜脂质结构,NAFLD活动度评分升高(P<0.01),肝组织Beclin1、LC3、p-AMPK蛋白表达降低(P<0.01),p62、p-mTOR、ERRα蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠肝组织脂肪变性减少,炎性细胞浸润改善,可见少量自噬体,NAFLD活动度评分降低,肝组织Beclin1、LC3、p-AMPK蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05),p62、p-mTOR、ERRα蛋白表达降低(P<0.01)。结论慈菇消脂方可能通过调控AMPK/mTOR/ERRα信号通路相关蛋白表达介导自噬,延缓NASH进展。

雌激素相关受体α(ERRα)与肿瘤疾病的研究进展

核受体超家族中的雌激素相关受体(estrogen-related receptor,ERR)是一类无需与配体结合即可产生生物学功能的孤儿受体。近年来研究发现,EER不仅参与雌激素信号转导体系,而且与乳腺癌、前列腺癌等肿瘤疾病有密切关系。ERR主要有3种亚型,ERRα、ERRβ和ERRγ,其中ERRα最受关注。ERRα的表达与雌激素依赖性肿瘤(如乳腺癌、子宫内膜癌)及非雌激素依赖性肿瘤(如胃腺癌,结直肠癌)均密切相关。本文将介绍ERRα与肿瘤疾病相关性的研究进展。

耐力训练对不同AMPKα2基因状态小鼠骨骼肌细胞核蛋白PGC-1α、ERRα表达及PGC-1α/ERRα结合量的影响

目的:探讨耐力训练对不同AMPKα2基因状态小鼠骨骼肌细胞核蛋白PGC-1α、ERRα表达和PGC-1α/ERRα结合量的影响。方法:C57BL/6J野生鼠(WT鼠)、AMPKα2转基因鼠(TG鼠)和AMPKα2基因敲除鼠(KO鼠)各20只,分别分为安静对照组(C组)和耐力训练组(T组)。耐力训练组小鼠进行持续4周、每周一至周六、每天1小时的跑台训练,跑台坡度为0,速度12米/分钟。安静对照组小鼠饲养环境与耐力训练组相同,但不参与训练。完成训练16小时后取鼠小腿三头肌,采用蛋白印迹法测定核内ERRα和PGC-1α蛋白表达量,免疫共沉淀法测定核内PGC-1α/ERRα结合量。结果:1.耐力训练组所有小鼠骨骼肌核蛋白ERRα表达量均高于相应的安静对照组,而不同AMPKα2基因状态组间核蛋白ERRα表达量无明显差异。2.耐力训练组所有小鼠骨骼肌细胞核蛋白PGC-1α表达量均高于相应的安静对照组。TG鼠安静时和运动训练后核蛋白PGC-1α表达与WT鼠相比显著增加。3.与安静组相比,三种基因状态小鼠运动后骨骼肌细胞核内PGC-1α/ERRα蛋白结合量显著提高。与WT鼠相比,TG鼠安静时和运动训练后核内PGC-1α/ERRα结合量显著增加。结论:1.耐力训练显著增加AMPKα2三种基因状态小鼠骨骼肌细胞核内ERRα蛋白表达、PGC-1α蛋白表达和PGC-1α/ERRα结合量。2.与野生鼠相比,AMPKα2转基因鼠安静时和耐力训练后骨骼肌细胞核内PGC-1α蛋白表达和PGC-1α/ERRα结合量显著提高,可能与AMPKα2转基因鼠骨骼肌中AMPKα2蛋白表达量显著增加有关,核蛋白PGC-1α表达量对PGC-1α/ERRα结合量有重要影响。3.与野生鼠相比,安静时和耐力训练后AMPKα2敲除鼠骨骼肌细胞核内ERRα蛋白表达、PGC-1α蛋白表达和PGC-1α/ERRα结合量均无显著差异,提示AMPKα2基因敲除鼠体内可能存在除AMPKα2外的其他信号通路,可代偿AMPKα2缺失的影响。

肌钙蛋白I2的原核表达及与ERRα1的体外相互作用

孤儿受体雌激素受体相关受体α1(ERRα1)与乳腺癌有密切的关系.酵母双杂交筛选发现乳腺组织中肌钙蛋白I2(TNNI2)与其有明显的相互作用.为进一步研究TNNI2与ERRα1的相互作用,融合表达了GST-TNNI2原核蛋白,并体外翻译了35S标记的ERRα1蛋白,将二者共同温育进行GST捕获实验.放射自显影结果显示,TNNI2能够捕获35S标记的ERRα1,证明TNNI2与ERRα1存在体外直接的相互结合,提示了肌钙蛋白I2在ERRα1参与的生理过程中可能有重要的作用.

脱垂子宫主骶韧带ERRα表达及17-β雌二醇对其成纤维细胞周期影响的研究

目的:探讨ERRα在脱垂子宫主骶韧带的表达及17-β雌二醇(17-βE2)对其成纤维细胞周期影响。方法:取10例未脱垂子宫主骶韧带组织和10例脱垂子宫主骶韧带组织,使用流式细胞仪定量检测ERRα表达情况。对10例脱垂子宫主骶韧带组织进行原代细胞培养,传代细胞分别用浓度0.1、1.0、10.0、100.0nmol/L17-βE2作用48h,流式细胞仪术分析刺激后细胞的细胞周期,采用增殖指数(PI)进行比较。结果:ERRα在子宫主骶韧带有表达,且未脱垂子宫主骶韧带ERRα表达量高于脱垂子宫主骶韧带的表达量(P<0.05)。10.0nmol/L的17-βE2作用组的PI高于对照组(P<0.05)。而100.0nmol/L的17-βE2作用组的PI低于对照组(P<0.05)。结论:脱垂子宫主骶韧带ERRα表达量降低。10.0nmol/L17-βE2能促进韧带成纤维细胞生长,100.0nmol/L17-βE2能抑制韧带成纤维细胞生长。

NET-1、ERRα在胃癌中的相关性及意义

目的研究胃癌组织中NET-1和雌激素受体相关受体(ERRα)表达相关性及意义。方法应用免疫组化法检测72例胃癌组织中NET-1和ERRα的表达,对两指标均阳性病例行免疫组化双标双染,原位检测两指标的表达特点和比邻关系。结果胃癌组织中NET-1和ERRα两指标阳性表达呈正相关;两指标高表达分别与癌分化呈负相关、与癌临床分期呈正相关;NET-1表达与癌淋巴结转移呈正相关;ERRα与患者生存率呈负相关。结论NET-1、ERRα是判断胃癌预后的有价值的标记物。

结直肠癌根治性手术联合免疫治疗的效果及ERRα和ERRβ蛋白水平变化观察

目的探讨结直肠癌根治性手术联合免疫治疗的效果及ERRα、ERRβ蛋白水平变化。方法将500例结直肠癌患者随机分为观察组与对照组,每组250例患者。给予对照患者结直肠癌根治手术与常规放化疗,给予观察组患者结直肠癌根治性手术、化疗和免疫治疗。对比2组患者的治疗效果,ERRα、ERRβ蛋白水平。结果观察组患者的治疗总有效率为90.4%,对照组患者的治疗总有效率为74.8%,观察组显著高于对照组(P<0.05)。2组患者治疗后的癌组织和癌旁组织中的ERRα、ERRβ蛋白水平明显比治疗前降低了(P<0.05),且观察组治疗后癌组织和癌旁组织中的ERRα、ERRβ蛋白水平明显低于对照组(P<0.05)。对照组患者不良反应的总发生率为49.6%,观察组患者不良反应的总发生率为14.0%,观察组显著低于对照组(P<0.05)。观察组患者的1年生存率为94.8%、3年生存率为84.4%,对照组患者1年生存率为78.4%、3年生存率为60.8%,观察组患者的1年生存率和3年生存率明显高于对照组(P<0.05)。结论结直肠癌根治性手术与免疫治疗后能够提升患者的治疗有效率、减少患者的不良反应,降低ERRα、ERRβ蛋白水平,提高患者远期生存率,值得临床应用推广。

肌钙蛋白I2与“孤儿”核受体ERRα1相互作用位点的鉴定

为深入研究肌钙蛋白I2（TNNI2）作为核受体相互作用蛋白参与核受体基因表达调控的分子机制，采用缺失突变联合酵母双杂交技术证明了TNNI2与ERRα1的相互作用位于TNNI2的1～128位氨基酸残基区域．该区域包括TNNI2蛋白的N末端、抑制肽段（96～116位氨基酸残基）和一个核受体结合位点LXXLL模序（即NR盒）．哺乳细胞瞬时共转染实验证实，TNNI21-128缺失突变体不具备辅助活化功能，并能作为负显性突变体完全抑制野生型TNNI2的辅活化作用．研究充分证明TNNI2与核受体的相互作用定位于TNNI2蛋白1～128氨基酸残基，并从侧面进一步证实了TNNI2能辅助核受体反式激活作用的功能．

ERRα mRNA及蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究雌激素受体相关受体α(estrogen receptor-related receptorα,ERRα)mRNA和蛋白在乳腺癌组织及乳腺癌旁组织的表达及意义,进一步探讨ERRα与乳腺癌临床病理指标[雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、人表皮生长因子受体-2(human epidemic growth factor receptor-2,Her-2)、P53],以及与乳腺癌分级、分期的相关性。方法:收集乳腺癌及对应乳腺癌旁组织标本87例,分别采用免疫组织化学染色,RT-PCR,Western blot检测ERRαmRNA和蛋白的表达情况,进一步分析ERRα的表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果:本研究中ERRαmRNA和蛋白在乳腺癌组织中的表达均高于在乳腺癌旁组织中的表达(P<0.05),且ERRα的表达与乳腺癌病理指标Her-2、ER以及肿瘤的病理分级,肿瘤大小,淋巴结转移相关,而与患者的年龄、PR、P53等无明显相关。结论:ERRα在乳腺癌中的高表达,可能作为乳腺癌一个预后不良的新的分子标记物,为乳腺癌的诊治提供新的思路。

补肾健脾活血中药干预膝骨关节炎模型大鼠软骨细胞IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路的变化

背景:膝骨关节炎是最常见的退行性关节疾病,其发病率和致残率高,已严重影响患者的生活质量。研究发现,补肾健脾活血中药能够改善膝骨关节炎临床症状,但其具体机制仍未阐明。目的:通过膝骨关节炎去势大鼠模型研究补肾健脾活血中药调节IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路治疗大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法:6月龄SD雌性大鼠,随机分为空白对照组、模型组、实验组和阳性对照组,模型组、实验组和阳性对照组摘除卵巢及切除交叉韧带和内侧半月板制作去势大鼠膝骨关节炎模型,术后2周实验组采用补肾健脾活血中药灌胃,阳性对照组采用塞来昔布胶囊灌胃,空白对照组和模型组以生理盐水灌胃。连续灌胃6周后取血清及膝关节软骨组织,采用ELISA检测血清雌二醇含量,分别采用荧光定量PCR和Western blot检测关节软骨组织中IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路表达水平。结果与结论:与空白对照组比较,模型组白细胞介素1β表达量明显升高,雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显降低(P<0.05);与模型组比较,实验组白细胞介素1β表达量明显降低(P<0.05),雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P<0.05);与阳性对照组比较,实验组白细胞介素1β、雌激素受体相关受体α及Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P<0.05),SRY相关蛋白9表达量明显降低(P<0.05)。实验结果表明,IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路参与膝骨关节炎软骨病变,补肾健脾活血中药可通过该机制发挥治疗作用。

BPH-1通过分泌PGE2上调前列腺间质细胞ERRα的表达

雌激素受体相关受体α(estrogen receptor-related receptorα,ERRα)是一类可以直接或间接参与雌激素应答反应的孤儿核受体,它与雌激素受体(estrogen receptor,ER)在结构上有很强的同源性.雌激素效应在良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasis,BPH)的发生和发展中起着重要的作用.通常,孤儿核受体的转录活性多受一些非经典激素如维生素A衍生物、前列腺素类、固醇的调控.本文研究前列腺上皮细胞分泌的活性因子对间质细胞ERRα表达调控的分子机制.收集前列腺增生上皮细胞系BPH-1和前列腺癌上皮细胞系DU-145的条件培养液(condition medium,CM)培养间质细胞,采用实时定量RT-PCR和Western印迹法检测前列腺间质细胞(prostatic stromal cells,PrSC)中ERRα的表达,筛选CM中影响ERRα表达的活性因子.研究结果显示,BPH-1的CM可以上调ERRα的表达,而DU-145的CM对ERRα的表达没有影响;BPH-1中合成前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的限速酶———环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)的mRNA表达水平和PGE2的分泌水平明显高于DU-145中COX-2表达水平和PGE2分泌水平;用经添加COX-2抑制剂NS-398的培养液处理BPH-1,其CM中PGE2的浓度明显下降,并失去了对ERRα表达的上调作用;添加PGE2可上调间质细胞中ERRα的表达.结果表明,BPH-1通过分泌PGE2促进间质细胞ERRα的表达,提示:在良性前列腺增生的发生和发展中,上皮细胞的旁分泌作用可促进间质细胞由ERRα介导的雌激素效应.

ERRα/γ的能量代谢调节作用及其与HIF、运动关系研究进展

雌激素相关受体(ERRs)家族的两个成员ERRα和ERRγ与机体能量代谢关系密切。近年来研究发现,ERRs与肥胖、2型糖尿病等代谢性疾病密切相关,ERRs对葡萄糖和脂肪酸有氧氧化以及线粒体能量代谢的调节作用引起了人们的关注。运动有利于改善肥胖、2型糖尿病和心血管疾病等代谢性疾病的临床症状。低氧运动渐受推崇,而低氧诱导因子(HIF)在细胞的低氧应答中起关键调节作用。本综述以ERRα/γ为切入点,对ERRα/γ在糖代谢、脂肪酸氧化和线粒体生物合成等方面的作用,以及ERRα/γ与HIF、运动之间关系的相关研究进展进行概述和归纳,为运动训练、运动对代谢性疾病的防治等相关领域的研究提供理论参考。

补肾健脾化瘀方对去势大鼠股骨骨髓ERRα和PGC-1α mRNA表达的影响

目的探讨补肾健脾化瘀方对去势大鼠股骨骨髓组织中雌激素相关受体α(ERRα)和过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子-1α(PGC-1α)mRNA表达的影响。方法 40只7月龄SD雌性大鼠随机分成假手术组、模型组、中药组(补肾健脾化瘀方)、阿伦膦酸钠组。治疗12w后,小动物双能X线检测左侧股骨骨密度,HE染色观察胫骨近端骨形态,QPCR检测骨髓组织中ERRα、PGC-1αmRNA表达水平检测。结果模型组骨密度低于假手术组(P<0.05);中药组与阿伦膦酸钠组骨密度高于模型组(P<0.05),而假手术组、中药组与阿伦膦酸钠组之间无统计学差异。与假手术组相比,模型组骨髓组织中ERRαmRNA表达水平上升(P<0.05),PGC-1αmRNA表达水平下降(P<0.05)。予以药物干预后,与模型组相比,中药组骨髓组织中ERRαmRNA表达水平下降(P<0.05),PGC-1αmRNA表达水平上升(P<0.05);而阿伦膦酸钠组骨髓组织中ERRαmRNA表达水平下降(P<0.01),PGC-1αmRNA表达水平虽呈现增高的趋势,但无统计学差异(P>0.05)。结论补肾健脾化瘀方可能是通过提高骨髓组织中PGC-1αmRNA表达水平,降低ERRαmRNA表达水平,从而提高去势大鼠骨密度。

黄酮对运动大鼠脂肪代谢酶与ERRα表达的影响

为探讨耐力训练对大鼠脂肪代谢酶、雌激素受体关联受体α(ERRα)mRNA及蛋白表达与补充甘草黄酮的干预作用,选用SD雄性大鼠50只,每组10只,随机分为安静对照组(NC)、运动对照组(NE)、运动+补充甘草黄酮低(GFML,4g·kg^(-1)·d^(-1))、中(GFME,8g·kg^(-1)·d^(-1))、高(GFMH,12g·kg^(-1)·d^(-1))剂量组。对照组灌胃等量生理盐水,6周的力竭训练后,宰杀大鼠。根据试剂盒的方法测定大鼠血清肝脂酶(HL)、脂蛋白酯酶(LPL)、载脂蛋白CⅡ(ApoCⅡ)和载脂蛋白CⅢ(ApoCⅢ)含量和骨骼肌ERRαmRNA及蛋白表达水平,结果发现:运动对照组HL含量低于安静对照组(P<0.05),GFM各组HL含量高于运动对照组(P<0.05或P<0.01)。LPL含量在NE组高于NC组(P<0.05),GFM各组LPL含量高于安静对照组和运动组。ApoCⅡ含量在运动对照组高于安静对照组(P<0.05),GFM各组ApoCⅡ含量与安静对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。运动对照组ApoCⅢ含量低于安静对照组(P<0.05),GFME组和GFMH组ApoCⅢ含量与安静对照组比较有显著性差异(P<0.05)。NE组大鼠脂肪组织ERRαmRNA及蛋白表达水平高于NC组(P<0.05),在GFML、GFME和GFMH各组大鼠脂肪组织ERRαmRNA及蛋白表达都高于NC和NE组(P<0.05或P<0.01)。综上可见,补充甘草黄酮能够改善血脂代谢和调控酶水平在机体内的相对稳定性,从而防止脂代谢紊乱。

青鳉鱼ERRα的克隆、序列分析、组织表达及其对不同EDCs暴露的响应

内分泌干扰物质（EDCs）可以通过多种通道影响鱼类的生长、发育和繁殖,而雌激素相关受体（ERR）是一类目前没有引起足够重视的潜在致毒信号通道.本研究克隆了青鳉鱼（Oryzias latipes）ERRαmRNA全序列,并通过实时定量RT-PCR方法对其在不同组织中的表达和不同EDCs暴露下的响应进行了分析.发现青鳉鱼ERRα与其它脊椎动物ERRα氨基酸序列有较高的同源性,特别是DNA结合结构域（DBD）在从鱼类到哺乳类动物的进化过程中高度保守,配体结合结构域（LBD）序列与哺乳动物的LBD有66.4%-67.0%的序列相同.青鳉鱼ERRα与青鳉鱼雌激素受体ERα、ERβ和雄激素受体ARα、ARβ的DBD氨基酸数相同,且有较高序列相似性,但LBD的长度和序列差异较大.青鳉鱼ERRα基因有5个外显子组成,位于第14号染色体.青鳉鱼ERRα基因在各组织中广泛表达,其中在性腺、脑、脾脏、眼和肠中表达较高,且在雌雄性腺中差异表达,表明其在雌雄性别分化和性腺发育中发挥调控作用.暴露200 ng/L炔雌醇（EE2）、200 ng/L雌酮（E1）、200 ng/L己烯雌酚（DES）、100μg/L阿特拉津（AT）和200 ng/L雌二醇（E2）后,青鳉鱼精巢中ERRαmRNA水平分别显著下降至对照组的0.54、0.56、0.61、0.63和0.65倍（p〈0.05）,但暴露1μg/L三丁基锡和1μg/L三苯基锡后上升至对照组的1.34和1.35倍（p〉0.05）,表明ERRα可能参与外源EDCs影响鱼类性别分化和性腺发育的过程.此外,在青鳉鱼ERRα基因上游没有发现类似哺乳动物ERRα基因上游的类固醇激素反应元件半位点,说明鱼类ERRα基因的调控模式与哺乳类存在差异.

毒杀芬对孤儿受体雌激素相关受体1(ERRα-1)的拮抗作用

目的 研究毒杀芬 (Toxaphene)对孤儿受体雌激素相关受体 1 (Estrogen relatedreceptor,ERRα 1 )活性的影响。方法 细胞瞬时和稳定转染及氯霉素酰基转移酶和芳香族化酶活性测定。结果 毒杀芬抑制了由ERRα 1所介导的氯霉素酰基转移酶的转录表达和辅活化子 (Coactivator)GRIP1诱导的ERRα 1的活性。在构建的稳定高表达ERRα 1的HepG2肝癌细胞株中 ,ERRα 1增加了芳香族化酶的转录表达 ,ERRα 1高表达细胞株与 1 0 μmol/L浓度的毒杀芬温育 2 4h后 ,芳香族化酶活性降低到非ERRα 1转染的HepG2细胞中芳香族化酶活性的水平。结论 毒杀芬是ERRα 1的拮抗剂 ,它拮抗了ERRα 1调节芳香族化酶转录的作用 ,从而使该酶的表达量降低。

绝经后妇女不同中医证型膝骨关节炎关节软骨ERRα/SOX9信号通路表达分析

目的:探讨ERRα/SOX9信号通路在绝经后妇女不同证型膝骨关节炎(KOA)关节软骨中的作用。方法:选取2018年6月至2019年4月广州中医药大学第三附属医院收治的绝经后KOA患者,根据中医证型标准分为风寒湿痹证、风湿热痹证、瘀血闭阻证和肝肾亏虚证4组,采用RT-PCR和Western Blot检测ERRα/SOX9信号通路表达情况。结果:各组间膝关节软骨组织ERRα、SOX9和Col2α1表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。与风寒湿痹组比较,风湿热痹组ERRα、SOX9和Col2α1表达量之间差异无统计学意义(P>0.05);瘀血痹阻组ERRα表达量升高,SOX9、Col2α1表达量降低(P<0.05);肝肾亏虚组ERRα、Col2α1表达量降低(P<0.05),SOX9表达量升高(P<0.05)。与风湿热痹组比较,瘀血痹阻组ERRα表达量升高,SOX9、Col2α1表达量降低(P<0.05);肝肾亏虚组ERRα、Col2α1表达量降低(P<0.05),SOX9表达量升高(P<0.05)。与瘀血痹阻组比较,肝肾亏虚组ERRα、Col2α1表达量降低(P<0.05);SOX9表达量升高(P<0.05)。结论:绝经后妇女不同中医证型KOA患者关节软骨组织ERRα/SOX9信号通路存在差异,揭示不同证型ERRα/SOX9信号通路的差异将为中医药辨证施治绝经后KOA提供理论基础。

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞孤儿受体ERRα的调控作用

目的:探讨孤儿受体ERRα与雌激素(E)、孕激素(P)之间的相互关系及其在子宫内膜癌发病中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法,检测不同浓度(10-10, 10-8, 10-6 mol/L)17β雌二醇(17βE2 )作用于Ishikawa细胞系不同时间(0min, 15min, 30min和24h)后ERRαmRNA的变化,并应用ER拮抗剂ICI182780同时作用细胞,观察是否可阻断E2 对ERRα的调控作用;检测不同浓度孕酮( 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 mol/L)作用于Ishikawa细胞系24h后ERRαmRNA的变化。结果: 10-10 mol/L17βE2 作用于Ishikawa细胞系15min, 30min及24h后ERRαmRNA水平与未加E2 相比均稍有增加,而10-8, 10-6 mol/L17βE2 作用于细胞系15min, 30min及24h后ERRαmRNA明显减小,以10-8 mol/L作用后减少最明显。同时加入E2 和ICI182780作用于细胞系后,E2对ERRαmRNA的减小作用被阻断。10-8mol/L孕酮作用于细胞系24h后,ERRαmRNA与对照组相比无明显变化,但加入10-7, 10-6和10-5 mol/L孕酮后,ERRαmRNA表达均出现明显增加。结论: 17βE2 可减少子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞ERRαmRNA的表达,此减少作用是通过ER介导完成的。孕酮可增加ERRαmRNA的表达。

PGC-1α协同ERRα在人肝癌细胞中调节小鼠SHP转录

目的检测PGC-1α和ERRα在人肝癌细胞(HepG2)中对小鼠SHP转录的影响,鉴定ERRα调节SHP启动子利用的顺式元件。方法在HepG2细胞和人胚肾细胞(293A)中瞬时转染ERRα和/或PGC-1α,双荧光酶报告基因实验检测小鼠SHP启动子的活性。构建5′删切和顺式元件突变的启动子报告基因,结合HepG2细胞中的双荧光酶报告基因实验,检测ERRα作用的结合位点。结果在HepG2和293A细胞中,共表达ERRα和PGC-1α能促进SHP转录。分析SHP启动子序列发现5个潜在的ERRα结合位点。通过删切启动子5′端,筛选出其中3个元件参与SHP的转录调节。进一步突变以上3个结合元件,鉴定到其中2个位点参与PGC-1α协同ERRα调节SHP转录的过程,另一个位点参与了SHP基本水平的转录。结论在HepG2细胞中,除核受体FXR、ERRγ之外,发现ERRα可以作为调节SHP基因转录的新途径,但需共激活因子PGC-1α同时存在。

ERRα通过AKT/SGK1通路抑制盐敏感性高血压大鼠的盐敏感性

目的探讨雌激素相关受体α(ERRα)对盐敏感性高血压大鼠盐敏感性的影响及分子机制。方法 6周龄雄性ERRα过表达及其对照Dahl盐敏感性大鼠分为四组,分别为正常盐对照组、正常盐ERRα过表达组、高盐对照组和高盐ERRα过表达组。正常盐对照组和正常盐ERRα过表达组大鼠每天给予正常盐(含氯化钠0. 5%)饲料喂养,高盐对照组和高盐ERRα过表达组大鼠每天给予高盐(含氯化钠8%)饲料喂养,大鼠被喂养3周,然后检测大鼠血压以及血液SOD和MDA水平;通过实时荧光定量PCR和Western blot检测盐敏感性高血压大鼠胸主动脉ERRα的m RNA表达以及AKT和SGK1磷酸化水平。结果荧光定量PCR结果显示,与正常盐对照组相比,高盐对照组大鼠中ERRα相对表达量显著降低(P <0. 01)。与高盐对照组比较,高盐ERRα过表达组大鼠血压显著降低,血液SOD活性显著升高,MDA含量显著降低(均P <0. 01)。Western blot结果显示,高盐ERRα过表达组大鼠p-AKT和p-SGK1蛋白表达显著高于高盐对照组,差异具有统计学意义(均P <0. 01)。结论 ERRα通过AKT/SGK1通路抑制盐敏感性高血压大鼠氧化应激,降低大鼠盐敏感性。