肌钙蛋白I2的原核表达及与ERRα1的体外相互作用

孤儿受体雌激素受体相关受体α1(ERRα1)与乳腺癌有密切的关系.酵母双杂交筛选发现乳腺组织中肌钙蛋白I2(TNNI2)与其有明显的相互作用.为进一步研究TNNI2与ERRα1的相互作用,融合表达了GST-TNNI2原核蛋白,并体外翻译了35S标记的ERRα1蛋白,将二者共同温育进行GST捕获实验.放射自显影结果显示,TNNI2能够捕获35S标记的ERRα1,证明TNNI2与ERRα1存在体外直接的相互结合,提示了肌钙蛋白I2在ERRα1参与的生理过程中可能有重要的作用.

肌钙蛋白I2辅助活化多种核受体的反式作用

为深入研究乳腺癌中孤儿受体ERRα1参与基因表达调控的详细机理,特别是核受体辅激活蛋白在其中的作用,以ERRα1的LBD为诱饵,用酵母双杂交系统筛选人乳腺组织cDNA文库得到了与其有明显相互作用的快速骨骼肌型肌钙蛋白I(TNNI2).应用酵母双杂交技术研究表明,TNNI2与多种核受体存在相互作用,且这种作用依赖于功能性的核受体AF2结构域.在哺乳细胞瞬时共转染实验中,TNNI2显示了对多种核受体反式激活功能的辅助活化作用.研究证明,TNNI2与许多辅激活蛋白类似,以配体依赖(对类固醇激素受体而言)或非依赖(对孤儿受体而言)的方式与核受体功能性AF2结构域相互作用,并增强多种核受体介导的反式作用.

肌钙蛋白I2与“孤儿”核受体ERRα1相互作用位点的鉴定

为深入研究肌钙蛋白I2（TNNI2）作为核受体相互作用蛋白参与核受体基因表达调控的分子机制，采用缺失突变联合酵母双杂交技术证明了TNNI2与ERRα1的相互作用位于TNNI2的1～128位氨基酸残基区域．该区域包括TNNI2蛋白的N末端、抑制肽段（96～116位氨基酸残基）和一个核受体结合位点LXXLL模序（即NR盒）．哺乳细胞瞬时共转染实验证实，TNNI21-128缺失突变体不具备辅助活化功能，并能作为负显性突变体完全抑制野生型TNNI2的辅活化作用．研究充分证明TNNI2与核受体的相互作用定位于TNNI2蛋白1～128氨基酸残基，并从侧面进一步证实了TNNI2能辅助核受体反式激活作用的功能．

万东F52-8C X线机特殊故障维修

本文介绍了万东F52-8C的原理,特点及遇见故障时的分析思路和维修方法,并在最后进行了总结。

补肾健脾活血中药干预膝骨关节炎模型大鼠软骨细胞IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路的变化

背景:膝骨关节炎是最常见的退行性关节疾病,其发病率和致残率高,已严重影响患者的生活质量。研究发现,补肾健脾活血中药能够改善膝骨关节炎临床症状,但其具体机制仍未阐明。目的:通过膝骨关节炎去势大鼠模型研究补肾健脾活血中药调节IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路治疗大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法:6月龄SD雌性大鼠,随机分为空白对照组、模型组、实验组和阳性对照组,模型组、实验组和阳性对照组摘除卵巢及切除交叉韧带和内侧半月板制作去势大鼠膝骨关节炎模型,术后2周实验组采用补肾健脾活血中药灌胃,阳性对照组采用塞来昔布胶囊灌胃,空白对照组和模型组以生理盐水灌胃。连续灌胃6周后取血清及膝关节软骨组织,采用ELISA检测血清雌二醇含量,分别采用荧光定量PCR和Western blot检测关节软骨组织中IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路表达水平。结果与结论:与空白对照组比较,模型组白细胞介素1β表达量明显升高,雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显降低(P<0.05);与模型组比较,实验组白细胞介素1β表达量明显降低(P<0.05),雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P<0.05);与阳性对照组比较,实验组白细胞介素1β、雌激素受体相关受体α及Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P<0.05),SRY相关蛋白9表达量明显降低(P<0.05)。实验结果表明,IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路参与膝骨关节炎软骨病变,补肾健脾活血中药可通过该机制发挥治疗作用。

基于Sirt1通路探讨栝楼桂枝汤对缺血性卒中后神经元损伤的保护作用

目的 探讨栝楼桂枝汤(GLGZD)通过Sirt1/PGC-1α/雌激素相关受体(ERRα)信号通路调控氧化应激稳态对脑缺血性卒中后神经损伤的保护作用及机制。方法 60只SD大鼠,将构建大脑中动脉闭塞模型成功的40只大鼠随机分为模型组(MCAO组)和栝楼桂枝汤组(GLGZD组),每组20只;其余20只大鼠设为假手术组(Sham组)。Sham组与MCAO组给予生理盐水灌胃,GLGZD组给予GLGZD水提液灌胃。干预结束后采用神经功能缺陷评分(Longa)检测神经功能缺损状态;生化方法检测大鼠血清中氧化应激相关指标丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和Western blot实验检测Sirt1、PGC-1α、ERRα的核糖核酸(mRNA)及蛋白的表达水平;TUNEL法检测神经细胞凋亡情况。结果 干预后,GLGZD组Longa评分低于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.01)。干预后,GLGZD组MDA低于MCAO组、GSH-Px高于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预后,GLGZD组Sirt1、PGC-1α、ERRα的mRNA及蛋白表达水平均高于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05)。干预后,GLGZD组缺血侧脑组织神经细胞凋亡率低于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GLGZD可能通过调控Sirt1/PGC-1α/ERRα信号通路来抑制脑缺血后的氧化应激水平,抑制神经细胞的凋亡,减轻损伤。