结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38kD-ESAT6-CFP10的构建与抗原性初步检测

目的为了提高结核病诊断试剂的特异性和敏感性,构建了结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38 kD-ESAT6-CFP10,并且采用双抗原夹心ELISA方法初步分析了该融合抗原的抗原性。方法运用生物学软件分析抗原优势肽段并模拟其串联后的三维结构,以确保串联后仍保持良好的抗原性。通过PCR方法分别扩增38 kD、ESAT-6和CFP10抗原优势肽段基因并将其进行连接,然后将融合基因分别连接入pBVIL1和pGEX-4T-2表达载体,在大肠杆菌菌株DH5α中进行表达。将两种不同载体表达的38 kD-ESAT6-CFP10融合抗原分别作为包被抗原和标记抗原,以双抗原夹心ELISA方法初步评价其抗原性。结果获得了38 kD、ESAT-6和CFP10的抗原优势肽段融合抗原38 kD-ESAT6-CFP10,并在大肠杆菌中进行了高效表达,初步验证所获得的抗原具有良好的抗原性。结论该种抗原优势肽段融合抗原有望成为结核病血清学诊断的重要候选抗原,并且双抗原夹心ELISA方法有助于提高检测的特异性和敏感性。

γ干扰素释放试验用于结核病诊断的临床应用价值

目的探讨γ干扰素释放试验(TB-IGRA)对肺内肺外结核病的诊断价值。方法选择肺内结核70例,肺外结核33例及正常对照组30例,分别采用ESAT-6和CFP-10肽段库为刺激原,全血培养1 d,应用EL-ISPOT检测培养上清液γ干扰素释放特异T细胞,诊断结核分枝杆菌感染,并与结核菌素皮肤试验(TST)进行比较。结果ESAT-6刺激斑点形成T细胞中位数肺内结核组为442/106,肺外结核组为196/106;正常对照组为22/106;CFP-10刺激斑点形成T细胞中位数肺内结核组为619/106,肺外结核组为274/106,正常对照组为24/106。不受机体免疫及卡介苗接种的影响,TB-IGRA检测敏感性肺内结核组为97.14%,肺外结核组为93.94%,正常对照组为90.00%(阴性率)。TST(PPD)皮肤试验敏感性肺内结核组约为64%,肺外结核组约为48%,正常对照组约为56%(阴性率)。结论TB-IGRA对肺内肺外结核分枝杆菌感染(结核病)诊断均具有较高的敏感性。

评价γ干扰素释放分析T-SPOT.TB在肺外结核病诊断中的敏感性

目的评价γ干扰素释放分析T-SPOT.TB检测在肺外结核病诊断中的敏感性。方法对北京协和医院根据细菌学或/和组织学诊断的肺外结核患者31例,应用酶联免疫斑点技术检测6kD早期分泌靶向抗原和10kD培养滤过蛋白肽段库刺激后外周血中释放γ-干扰素的特异性T细胞。结果31例肺外结核患者中29例T-SPOT.TB检测阳性,敏感性为93.5%(95%CI84.8%～100%),6kD早期分泌靶向抗原肽段库刺激后斑点形成细胞数中位数为196/106PB-MCs(4分位间距72～532/106PBMCs),10kD培养滤过蛋白肽段库刺激后斑点形成细胞数中位数为276/106PBMCs(4分位间距72～568/106PBMCs),对两个肽段库总的斑点形成细胞中位数为612/106PBMCs(4分位间距192～1152/106PBMCs)。结论T-SPOT.TB检测对肺外结核诊断具有较高的敏感性。