烟草肠杆菌(Enterobacter tabaci)β7发酵优化及菌剂制备

从云南文山筛选出一株高产吲哚乙酸(indole-3-acetic acid,IAA)的烟草肠杆菌(Enterobacter tabaci)β7,在摇瓶水平上对碳源种类、氮源种类、接种量、IAA前体物质色氨酸等发酵工艺参数进行单因素实验和响应面优化,确定了最佳发酵培养基组成为:碳源半乳糖6 g/L,氮源酵母粉2 g/L,色氨酸500 mg/L。接种量5%发酵16 h条件下,发酵液中IAA质量浓度最高达到276.96 mg/L,较优化前提高了13.53%。研究了不同添加剂,包括抑菌剂、保护剂和乳化剂等对菌剂保藏条件下活菌率和IAA保留率的影响,确定最适添加剂为抑菌剂山梨酸钾、保护剂甘油、乳化剂吐温-60,在此基础上,制备菌剂在避光4℃保藏24 d后,活菌率达到91.10%,IAA保留率达到88.77%。

Identification of blaIMI-mediated carbapenem-resistant Enterobacter from a duck farm in China

Carbapenem-and colistin-resistant Enterobacter has been a clinical and therapy problem in recent years.Here,we report the carbapenem-and colistin-resistant Enterobacter harboring bla_(IMI) isolated from intestinal samples and the environment of a duck farm in China.Four bla_(IMI)-positive Enterobacter isolates were resistant to carbapenem and colistin.Three bla_(IMI) subtypes were detected in different molecular categories of Enterobacter.The detection of the various IMI producers highlights the diversity of carbapenemases in a duck farm.Whole-genome sequencing demonstrated the bla_(IMI) genes were present in chromosomes or plasmids in these strains.The conjugation experiment demonstrated the ability of bla_(IMI)-carrying plasmid to transmit horizontally.The molecular evolution characteristics were examined through comparative genetic analysis.The study demonstrated the presence of chromosomal and plasmid bla_(IMI) and the bla_(IMI)-carrying plasmid exhibits a horizontal transmission between Enterobacter and Escherichia coli C600.The similar genetic content was discovered between two bla_(IMI-16)-positive Enterobacter asburiae.In addition,a bla_(IMI-16)-carrying plasmid is an IncFII(Yp)plasmid,and a substantial amount of mobile genetic elements were identified around bla_(IMI-16).The IS-like elements and IncFII(Yp)plasmid are significant in the propagation of bla_(IMI).Our study provides evidence for the transmission of diverse bla_(IMI) genes in China and supplies additional reference data for bla_(IMI)-positive antimicrobialresistant Enterobacter.Routine surveys of bla_(IMI)-positive Enterobacter from animal-raising environments must be given more focus.

细菌Enterobacter dissolvens的直流电解刺激过程

以葡萄糖为唯一碳源,研究了细菌Enterobacterdissolvens在直流电条件下的生长和代谢过程.实验结果表明,当使用盐桥屏蔽电极反应时,细胞生长曲线和葡萄糖代谢速率基本不受电流强度的影响,而当采用铂丝电极时,反应体系中发生水解反应,采用10mA电流通电12h后,菌液中细胞的脱氢酶比活力和葡萄糖降解率分别为对照的1.98倍和1.48倍,细胞生长亦有所加快,但在其活力下降时出现大量死亡.扫描电镜照片显示细胞结构受到明显破坏,并发生细胞膜穿孔现象,这表明可能受到了过氧化氢等阳极水解中间产物的刺激作用.

Enterobacter cloacae Z0206细菌胞外多糖的体外抗氧化活性研究

本实验旨在对Enterobacter cloacae Z0206菌进行发酵培养,以制备胞外多糖,并对其体外抗氧化活性进行初步研究。通过产多糖菌E.cloacaeZ0206的深层发酵制备细菌胞外多糖,在此基础上对其清除DPPH自由基、超氧阴离子、抑制羟自由基的能力以及还原力等四个方面进行实验,评价其抗氧化活性。结果表明,深层发酵制备的E.cloacaeZ0206胞外多糖产量为6.62g/L,其在5mg/mL时对DPPH自由基和羟自由基的清除率分别达到61.57%和40.08%。提示E.cloacaeZ0206细菌胞外多糖具有显著的抗氧化能力,具有开发为抗氧化类食品或药品的潜力。

Enterobacter sp.CV-v对甲基橙的脱色特性与条件优化

从浙江温州分离筛选到1株甲基橙高效脱色菌株CV-v,经16S rRNA基因序列分析表明,该菌株属于Enterobacter sp.属.单因素实验结果表明：当pH值在5.0~9.0之间时,培养48h以后,该菌株对甲基橙的脱色率均在80%以上；脱色的最适温度范围为30~40℃之间；所测碳源中的葡萄糖和麦芽糖、氮源中的牛肉膏和酵母粉对脱色的促进效果最为显著,且Ca2＋和Mg2＋也对脱色有显著的促进效应；此外,当接种量达到7%（V：V）以后,48h 的脱色率即可达近100%.响应面设计实验结果显示,该菌株对甲基橙脱色的最优操作条件为：pH 8.0,葡萄糖1.7g/L,酵母粉3.0g/L,氯化镁3.0mmol/L及培养温度35.9℃.验证实验结果表明在最优条件下,该菌株在10h内对甲基橙的脱色率可达88.0%.总体而言,该菌株在偶氮染料脱色中的应用潜能较大.

Enterobacter sp.SYA2乳糖酶酶学性质研究

采用硫酸铵盐析法对Enterobacter sp.SYA2乳糖酶进行分级沉淀,研究了该酶的最适作用温度、热稳定性、最适作用pH、pH稳定性及金属离子的影响。结果表明:选取硫酸铵的饱和度30%～85%进行分级沉淀,分级沉淀后得到乳糖酶的比活为45.85U/mg;该酶最适作用温度为40℃～45℃,在35℃和40℃处理时酶活损失不大,在45℃和50℃处理时酶活损失较大,最适作用pH为6.5,pH在6.0～8.5酶活最为稳定,Mg2+、Mn2+、Na+对该酶有一定激活作用,Zn2+、Cu2、Fe2+对该酶有不同程度的抑制作用,当酶添加量为1U/mL,乳清水解率3h达50%;而添加量为2U/mL时乳清水解率1h达50%。

Enterobacter Cloacae Z0206细菌胞外富硒多糖的抗氧化活性

利用产多糖菌Enterobacter cloacae Z0206(E.cloacaeZ0206)的深层发酵法制备了E.cloacae Z0206细菌富硒多糖;测定了其还原能力和清除1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)自由基、超氧阴离子及羟自由基的能力.结果表明,通过深层富硒发酵、醇沉离心等制备富硒多糖SEPS的产量为9.28g/L,富硒量为2.314mg/g;E.cloacae Z0206富硒多糖对DPPH自由基和羟自由基具有较好的清除作用,在浓度为5g/L时对DPPH自由基和羟自由基的清除率分别为80.35%和84.26%,并具有较强的还原能力,但其对超氧阴离子自由基的清除能力较差.

Enterobacter cloacae B5产转糖基β-半乳糖苷酶发酵条件优化

β-半乳糖苷酶是一类非常重要的糖苷水解酶,已被广泛应用于食品工业降低乳制品中的乳糖含量.某些种类的β-半乳糖苷酶还具有转糖基活性,近年来被应用于合成低聚半乳糖和半乳糖苷化合物.通过单因子试验和正交试验,对肠杆菌Enterobacter cloacae B5产生转糖基β-半乳糖苷酶的培养基组成及发酵条件进行了优化.结果表明,以无机盐溶液I(CaCl20.011%、MnSO40.0001%、MgSO4.7H2O0.03%、KH2PO40.005%、FeSO4.7H2O0.003%)、乳糖1.5%、酵母粉2%、蛋白胨0.5%、起始pH8.5的培养基在25℃培养E.cloacaeB5菌株38h,产酶量达到最高值4.663UmL-1,大约是未优化时的3倍.通过优化产酶条件提高了全细胞酶源的酶活量,不仅为功能性低聚半乳糖的生产降低了成本,同时也为商业化β-半乳糖苷酶的大量提纯降低了成本.

Enterobacter hormaechei Wu-15解盐促生相关基因的筛选

筛选优良根际促生菌株,定位其关键功能基因,对菌株的改造及实际应用具有重要意义。本文以解盐促生菌Enterobacter hormaechei Wu-15为材料,采用第二代和第三代测序技术对该菌株进行全基因组测序,并对其解盐促生相关的基因进行解析。结果表明,植物根际促生菌Wu-15基因组全长为4614006 bp,GC含量55.80%,含有4240个蛋白编码基因;GO、COG和KEGG数据库注释结果表明基因组中含有多种解盐促生相关基因;通过比对分析,筛选出与解盐促生功能相关的基因(溶磷相关基因7个、渗透调节物质相关基因14个、逆向转运蛋白相关基因6个、IAA合成相关基因ipdC、ACC脱氨酶相关基因dcyD)。本研究通过基因筛选及分析,从分子水平证明该菌株解盐促生的能力,为菌株的进一步优化改良提供指导,为该菌株在农业生产中的应用奠定基础。

聚丙烯酰胺降解菌株Enterobacter cloacae的分离鉴定

应用厌氧Hungate技术,从大庆油田聚合物配注站的熟化罐水溶液中分离到一株聚丙烯酰胺降解菌株.对该菌株进行形态、生理生化、分子生物学鉴定结果表明,菌株为G-,短杆状,无芽孢,最佳pH值为8.0,最适生长温度为40℃,具有硫酸盐还原功能,产H2S,严格厌氧,通过16S rDNA和16S^23S rDNA间隔区序列鉴定,菌株与Enterobacter cloacae有极高的相似性.初步鉴定为Enterobact-er中的新种,暂时命名为Enterobacter cloacae.红外光谱分析结果表明,菌株以聚丙烯酰胺为惟一碳源,菌株作用前后表面结构发生变化,分子链上的酰胺基水解成羧基,降解侧链,部分官能团发生改变,溶液黏度下降效果显著;GC-MS初步分析聚合物发生断链,低分子质量化合物除含双键、环氧和羰基的聚丙烯酰胺碎片外,大多属于一般丙烯酰胺低聚体的衍生物.

阴沟肠杆菌(Enterobacter closcae)对乐果降解特性的研究

从福建省福农生化有限公司排污口的土壤中筛选到一株对乐果有较好降解效果的菌株阴沟肠杆菌,为了使该菌能更好的应用于乐果残留污染的治理当中,采用室内培养方法,对该菌降解乐果的作用因素进行研究。结果表明,菌降解乐果的最佳温度为35℃、pH为8.0、装液量50mL.250mL-1、摇床振数180r.min-1、C源为果糖、N源为酵母浸膏、接种量OD265为0.065、底物浓度为200mg.L-1,对应的降解率在28.84%～61.19%之间,采用L1(82×37)正交法及DPS数理统计得出Cu2+、Fe2+对菌降解乐果有显著的促进效果,Cd2+、Zn2+则在溶液中含量低水平时促进降解,高水平时抑制降解;Mg2+、Ba2+、Mn2+、Pb2+等离子对菌降解乐果无促进作用。

转糖基β-半乳糖苷酶产生菌Enterobacter agglomerans B1:筛选鉴定、发酵产酶及其合成低聚半乳糖的研究

从土壤中筛选获得一株具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶产生菌,综合其形态学特征、生理生化特征及16SrDNA序列同源分析结果,将其鉴定为成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)B1。通过单因子试验和正交试验,对B1菌株产转糖基β-半乳糖苷酶的培养条件进行了优化。最佳培养基主要组份为:乳糖1%,酵母粉1%,蛋白胨0.5%;发酵条件为:初始pH7.5,发酵温度25℃,发酵时间26h。在该培养条件下产酶量为9.7U/mL。利用薄层层析技术研究了pH、温度、底物浓度和反应时间对该菌株全细胞以乳糖为底物生成低聚半乳糖的影响,确定最适反应条件为:pH7.5缓冲液配制的30%乳糖溶液;50℃反应12h。最优化反应的转糖基产物经HPLC、TLC和MS分析,确定低聚半乳糖产量为40.7%,组分为转移二糖、三糖和四糖。

凤眼莲根分泌物对Enterobacter sp.nov.苯酚代谢的影响

本文利用从含酚废水中筛选出新的高效降酚菌株(Enterobacter sp.nov.)和凤眼莲根分泌物来探讨风眼莲与细菌之间松散的、非特异性的降酚机理。研究了风眼莲分泌物及其不同的组分对Enterobacter sp.nov.生长、降酚酶活性和降酚效率的影响。结果表明,低浓度的根分泌物(≤1％V/V)促进细菌生长,提高降酚效率,而高浓度的根分泌物(≥10％V/V)虽能促进细菌生长,但会抑制细菌降酚酶的诱导,降低降酚效率。凤眼莲根分泌物各组分中还原糖是影响Enterobacter sp.nov.降酚的关键因子。提出了人工组建凤眼莲和Enterobacter sp.nov.系统,提高降酚效率的可能性。

固定化Enterobacter agglomerans脂肪酶生产菜籽油生物柴油的研究

用硅藻土对实验室筛选得到的成团肠杆菌脂肪酶干燥酶粉进行固定化,固定化酶在有机溶剂体系下催化生产生物柴油。在最佳反应条件,即菜籽油15.47 mL,固定化脂肪酶用量1 000 U,甲醇为酰基受体(7.15 mL,3次等量加入),5 mL正己烷,振荡速度180 r/min,35℃反应48 h时,转化率达91.03%。实验结果表明,油酸含量高有利于生产生物柴油,而芥酸有不利影响。固定化酶稳定性好,重复使用8次,转化率仍大于50%,同时还具有一定的适应性,可催化大豆油和葵花籽油生产生物柴油。研究表明,固定化酶可用于催化生产生物柴油,并有效降低酶催化法的生产成本。

降解菌Enterobacter sp.对二甲四氯污染土壤中水稻生长的影响

[目的]探讨二甲四氯高效降解菌Enterobacter sp.对污染土壤的修复使用。[方法]研究了高效降解菌Enterobacter sp.对二甲四氯污染土壤中水稻出苗率、株高抑制率和含水量的影响。[结果]与二甲四氯污染组相比,施用了Enterobacter sp.的处理组水稻出苗率提高了29.00%、28.00%和24.00%,株高抑制率分别降低了19.80%、14.20%和8.90%,与含水量无明显关系。[结论]Enterobacter sp.能在一定程度上缓解二甲四氯对水稻的药害。

联合固氮菌Enterobacter gergoviae57-7泌铵突变株的分离和特性

经 Tn5转座子诱变从野生型菌株 ( Enterobacter gergoviae 5 7- 7)筛选到抗甲胺 ( 0 .3mol/L )的泌铵突变株 MG61 ,该突变株在固氮生长时能分泌铵 2 .0 mmol/L。由于泌铵 MG61的生长比野生型菌株慢 ,在培养基中含铵 ( 5 mmol/L或 30 mmol/L)条件下 ,MG61的生长速率与对照相同 ,而远比野生型菌株慢 ,表明 MG 61不能很好地利用铵。在含 2 0 mmol/L铵的培养基中 MG 61仍表达 86%的固氮活性 ,而野生型菌株完全丧失了固氮活性。在谷氨酸存在下 MG61的生长速率及固氮酶活性都比对照高。在硝酸盐存在下 MG61的生长速率与对照相同 ,但泌铵量达 7.8mmol/L。

细菌Enterobacter dissolvens的电解刺激效应研究

以葡萄糖为惟一碳源,研究了细菌Enterobacter dissolvens在直流电条件下的生长和代谢过程。结果,在直流电刺激过程中,反应体系中发生水解反应。当屏蔽阴极电极时,阳极产生的氧气使细胞生长曲线和葡萄糖代谢速率急剧下降,菌液葡萄糖的降解率和脱氢酶活性分别为对照参比的0.45倍和0.06倍,细胞浓度明显的下降;而屏蔽阳极电极时,阴极产生的氢气通过改变环境而使得细胞生长曲线和葡萄糖代谢急速上升,菌液葡萄糖的降解率和脱氢酶活性分别为对照参比的3倍和4.5倍,细胞浓度呈现明显的增长。分析原因可能是电极反应导致菌液的物化性质改变所致。

细菌Enterobacter dissolvens的电解刺激连续培养过程研究

以葡萄糖为唯一碳源,研究了细菌Enterobacter dissolvens 在直流电条件下的连续培养过程。实验表明在电解刺激下的连续培养,细胞生长曲线和葡萄糖代谢速率均显著提高。当采用10mA电流通电10h后,茵液中细胞的比脱氢酶活[总显色度(OD490)/细胞量(OD600)]约为参比样的2倍,而葡萄糖降解率也为参比测量值的1.8倍,细胞生长亦有所加快。由于培养基的流加,使得过氧化氢等中间产物得到稀释,从而避免了细胞生长的衰减。

响应面法优化Enterobacter sp.SYA2乳糖酶发酵工艺

采用单因素实验对Enterobacter sp.SYA2产乳糖酶条件进行优化,优化后的发酵条件为:培养温度37℃、装液量50mL/250mL、摇床转速175r/min、接种量5%(V/V)、种龄8h,此条件下酶活为9.02U/mL;通过Plackett-Burman设计和Box-Behnken设计对菌株发酵培养基进行了优化,得到的最佳发酵培养基配方为:乳糖31.1g/L、蛋白胨26.0g/L、酵母膏5.0g/L、K2HPO43.0g/L、NaCl6.0g/L、MnCl20.5g/L、pH6.5,优化后的酶活为15.95U/mL。

拮抗细菌Enterobacter cloaeae B8的一株抗菌素抗性突变体(英文)

为了研究拮抗细菌Enterobacter cloacae B8在野外水稻叶面上的定殖情况及拮抗作用,由自然选择和Tn5诱变从B8产生了一株抗菌素抗性突变体BX8.BX8能在含利福平达400μg/ml或卡那霉素达300μg/ml的LB培养基中生长.实验表明该抗菌素抗性的产生没有降低BX8的拮抗活性.该抗性比较稳定,在无抗菌素培养基中培养.BX8至少分裂生长60代内抗性不变.