重组人附睾特异表达蛋白ESC42及其生物学鉴定

目的:利用基因工程技术合成出人附睾特异表达基因ESC42重组蛋白,为其功能研究提供材料。 方法: 从人附睾cDNA文库扩增出ESC42基因片段,构建原核表达载体,进行克隆、表达、蛋白质纯化及单克隆抗体制备; Western印迹鉴定纯化产物及其单克隆抗体的特异性;基质辅助激光解吸电离 飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴 定ESC42蛋白相对分子质量(Mr)和肽质量指纹,用MS Fit软件查询NCBI数据库。 结果:获得rhESC42融合蛋 白纯度为99%;Mr为11978.12,制备出抗rhESC42单克隆抗体;质谱分析的数据覆盖了所预测氨基酸序列的48%, 且符合率为100%。在Expasy数据库中进行结构域扫描,发现ESC42属于β defensin家族,具有抗菌活性。 结 论:获得了高纯度且具有生物效应的rhESC42重组蛋白质,并从蛋白质水平对预测氨基酸序列进行了证实,为以后 的功能研究奠定基础。

基因重组人附睾特异蛋白ESC42的抗菌谱研究

目的 利用基因工程技术合成人附睾特异蛋白ESC42进行抗菌谱的筛选,并探讨其作用机制.方法 用微量稀释法细菌敏感试验,观察该蛋白对大肠埃希氏菌ATCC25922,金黄色葡萄球菌ATCC29213,铜绿假单胞菌ATCC17853以及临床分离耐药菌株大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果;应用溶血实验检测ESC42蛋白对兔红细胞的毒性作用.结果 应用不同的蛋白浓度作用细菌,随着时间延长和蛋白浓度的增加其抑制率逐渐增加.对兔红细胞没有毒性作用.结论 rhESC42蛋白对细菌有一定的抑制作用,对真核细胞无害.