基于HPLC-ESI-TOF/MS法分析测定乌天麻和红天麻中化学成分的研究

建立高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱（HPLC-ESI-TOF/MS）联用技术用于指认乌天麻和红天麻中的化学成分,并对天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛、腺苷、巴利森苷A、4,4＇-二羟基二苄基醚6种成分进行含量测定。采用Agilent 1120高效液相系统,YMC-PEAK ODS-A column（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为0.1%甲酸水溶液（A）-甲醇溶液（B）,梯度洗脱：0-5 min,5%B;5-65 min,5%-40%B;65-80 min,40%-100%B;分析时间80 min;体积流量1 m L/min;柱温25℃;进样量50μL。最终指认了天麻提取物中的15种成分,其中天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛、腺苷、巴利森苷A、4,4＇-二羟基二苄基醚6种成分在线性范围内均具有良好的线性关系（r≥0.9991）;平均回收率在94.90%-99.81%之间,RSD〈2.40%。在不同品种的天麻饮片中,6种成分的量存在差异,红天麻各成分含量稍高于乌天麻,一级乌天麻各成分含量高于二级乌天麻。同一品种天麻中,巴利森苷类成分含量较高,腺苷和4,4＇-二羟基二苄基醚含量均较低。建立的HPLC测定方法分离效果与重复性好、快速、简便,为天麻饮片的质量控制提供参考。

UPLC-ESI-TOF/MS应用于黄芩化学成分的快速分析

目的:建立黄芩的超高效液相色谱-电喷雾-飞行时间质谱(UPLC-ESI-TOF/MS)分析方法,研究黄芩的化学成分。方法:分别采集UPLC-TOF/MS全扫描质量色谱图和源内裂解的UPLC-TOF/MS色谱图,通过分子离子精确质量和同位素拟合度的分析确定分子式,在数据库中检索匹配的化合物,进而解析源内裂解的质谱图,从而对各峰进行鉴定或结构表征。结果:共鉴定或表征了黄芩药材中31个成分,均为黄酮类化合物。结论:该方法快速、灵敏、准确,可用于黄芩化学成分的分析,也为其它中药的成分分析提供了思路。

HPLC-ESI-TOF/MS对黄芪药材中24种化学成分的快速分离与鉴别

目的：采用HPLC-ESI-TOF /MS对黄芪药材中的化学成分进行快速分离与鉴别。方法：采用Agilent poroshell 120 SB-C18（100 mm ×3 mm,2.7μm）色谱柱,流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速：0.4 ml·min-1,检测波长254 nm,柱温25℃,进样量：10μl ；使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据,N2流速10 L·min-1,载气温度350℃,毛细管电压4 kV,轰击电压165 V,扫描质子范围m/z 100~1100。结果：HPLC-ESI-TOF /MS方法对黄芪药材进行了在线化学成分分离与质谱表征,一次性在一张图谱上共鉴别出黄芪中24种主要化学成分。结论：建立了一种基于HPLC-ESI-TOF/MS联用技术对黄芪中的化学进行快速、高效的分析方法,可为黄芪的药效物质基础和质量控制研究奠定基础。

HPLC-DAD-ESI-TOF/MS法分析安神补脑液中化学成分

目的建立高效液相色谱-二极管阵列检测器-电喷雾飞行时间质谱(HPLC-DAD-ESI-TOF/MS)法分析安神补脑液(淫羊藿、制何首乌、鹿茸等)中化学成分。方法该药物的分析采用Waters XELECTTM HSS T3色谱柱(3.0 mm×150 mm, 3.5μm);流动相乙腈-0.4%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.2～0.5 mL/min;柱温25℃;检测波长278 nm。结果发现了40种成分,并鉴定出其中20种。维生素B1、次黄嘌呤、甘草苷、二苯乙烯苷、淫羊藿苷、甘草酸、6-姜辣素、大黄素在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 0),平均加样回收率91.10%～107.50%,RSD 2.43%～6.64%。结论该方法稳定可靠,可用于安神补脑液的质量控制。

UPE-HILIC-DAD-ESI-TOF/MS法测定山东产区丹参中丹酚酸类成分

建立超高压提取-亲水色谱-二极管阵列检测器-电喷雾飞行时间质谱法(UPE-HILIC-DAD-ESI-TOF/MS)测定丹参中丹酚酸类成分的方法,并用于山东产区丹参中丹酚酸类成分的测定。采用单因素试验对超高压提取条件进行了系统优化;采用Waters XBridge Amide色谱柱进行分析,以水溶液(0.8%甲酸、20 mmol/L甲酸铵、30%乙腈、10%正丁醇)-乙腈(0.8%甲酸)为流动相体系,梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,柱温为25 ℃,检测波长为280 nm;采用DAD-ESI-TOF/MS对各化合物进行鉴别,采用HILIC-DAD对各化合物进行定量测定。在优化的提取条件下,超高压提取法的提取率明显优于超声波辅助提取法和水浴回流提取法;采用HILIC法可以实现丹参中丹酚酸类成分的较好分离;通过ESI-TOF/MS获得的精确分子量信息和DAD获得的紫外吸收信息结合标准对照品可以对各化合物进行准确鉴别;对7种丹酚酸类成分(丹酚酸A、迷迭香酸、原儿茶醛、原儿茶酸、熊果酸、紫草酸、丹酚酸B)进行了含量测定,结果表明各化合物的峰面积与其质量浓度呈良好的线性关系( r =0.999 0~1.000 0),各化合物的浓度范围分别为0.311~0.438、1.218~1.517、0.104~0.147、0.375~0.527、0.303~0.401、4.025~4.935、35.628~44.255 mg/g。该方法提取效率高、分离度好,为丹参中丹酚酸类成分提取、测定和质量评价研究提供了技术支持。

中药库拉索芦荟化学成分的液质定性分析

为阐明中药库拉索芦荟(Aloe barbadensis)叶的汁液浓缩干燥物的化学成分,该研究采用HPLC-DAD-ESI-IT-TOF-MS n技术,结合对照品对比和文献检索,对其进行系统的定性分析。以水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),质谱使用ESI离子源,采用负离子模式分析液质数据。结果表明:(1)首次阐明中药库拉索芦荟中蒽醌类(芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷)、蒽酮类(芦荟素A、芦荟糖苷A)、色酮类(芦荟新苷D、7-O-甲基芦荟新苷A、altechromone A、芦荟苦素、芦荟新苷G、芦荟新苷C)、α-吡喃酮类(芦荟宁A、芦荟宁B)四类成分的主要化合物的裂解途径。蒽醌类化合物的裂解途径以失去CO_(2)和CO为主,蒽酮类化合物的裂解途径以己糖苷的裂解和失去CO为主,色酮类化合物的裂解途径以己糖苷的裂解和酯基的水解为主,α-吡喃酮类的裂解途径主要包括己糖苷的裂解、CO_(2)和H_(2)O的丢失等。(2)共检测到168种化学成分,参考相关文献、数据库和对照品数据共鉴定/指认了其中的78种化学成分,包括3种蒽醌类成分、29种蒽酮类成分、35种色酮类成分、7种α-吡喃酮类成分、4种其他类成分;78种化学成分中有23种为新发现的库拉索芦荟叶的化学成分,其中aloinoside D、isoeleutherin、ethylidene-aloenin等14种成分具有抗菌、抗炎或清除自由基等药理活性。该研究结果进一步丰富了中药库拉索芦荟的化学成分信息,为芦荟的药效物质基础研究及质量控制奠定了基础。

山楂中化学成分的UPLC/ESI-TOF/MS分析

目的建立山楂中化学成分的超高液相/电喷雾–飞行时间/质谱（UPLC/ESI-TOF/MS）的分析方法。方法 Acquity UPLC BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）,流动相0.1%甲酸水溶液–乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min,柱温50℃,检测波长范围260~360 nm,进样量1μL。ESI离子源,飞行时间质谱检测器,对比对照品进行鉴别。结果共鉴定出13个化合物,分别为苹果酸（1）、枸橼酸（2）、绿原酸（3）、花青素B2（4）、表儿茶素（5）、花青素B3（6）、牡荆素葡萄糖苷（7）、芦丁（8）、金丝桃苷（9）、异槲皮苷（10）、槲皮素（11）、熊果酸（12）、熊果醇（13）。结论建立了一种简单、快速的UPLC/ESI-TOF/MS方法对山楂中化学成分进行了鉴定。

UPLC-ESI-TOF MS/MS分析太子参中环肽类成分

建立超高效液相色谱-电喷雾飞行时间串联质谱(UPLC-ESI-TOF MS/MS)分析太子参中环肽类成分的方法。实验采用反相C18色谱柱,梯度洗脱,分离并检测太子参中11种环肽类成分。通过信息关联采集(IDA)模式,运用动态背景扣除(DBS),消除背景离子干扰,在获得11种环肽类成分MS/MS图谱的同时,也得到其精确的分子质量信息。

UPLC-DAD/ESI-TOF-MS鉴定黑脉羊肚菌多酚化合物

以黑脉羊肚菌为原料,分离提取羊肚菌多酚(游离酚和结合酚),对提取物中酚类物质的含量及抗氧化活性进行研究,并采用超高效液相色谱-二极管阵列检测器/电喷雾飞行时间质谱对黑脉羊肚菌游离酚和结合酚的组分进行鉴定。结果表明,黑脉羊肚菌多酚主要为游离酚,且游离酚的DPPH自由基清除率、还原力及氧自由基吸收能力都显著强于结合酚(P<0.05),而两者清除ABTS^+·能力相当。从黑脉羊肚菌多酚中鉴定出15种组分,分别是没食子酸、焦性没食子酸、原儿茶酸、对羟基苯甲酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、荭草素、芦丁、金丝桃苷、白藜芦醇、木犀草素、槲皮素、肉桂酸、阿魏酸,游离酚提取物有15种组分,结合酚提取物有14种组分。

HPLC-DAD-ESI-TOF/MS鉴别和测定前列欣胶囊中多种成分及其多指标定量指纹图谱研究

目的:高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(HPLC-ESI-TOF/MS)联用技术用于前列欣胶囊多种化学成分快速鉴定和测定及多指标定量指纹图谱研究。方法:采用Kromasil 100-5C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.8%甲酸流动相体系进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长300 nm;利用ESI-TOF/MS法对前列欣胶囊提取物中多种化合物进行鉴别,对已知的活性成分进行定量测定,并建立前列欣胶囊的HPLC指纹图谱。结果:应用HPLC-DAD-ESI-TOF/MS指认了前列欣胶囊提取物中的8个成分(没食子酸、绿原酸、咖啡酸、王不留行黄酮苷、异槲皮苷、丹酚酸B、丹酚酸A、隐丹参酮),定量测定结果表明各化合物线性关系良好(r=0.999 0~0.999 7);平均回收率分别为95.25%、96.85%、98.10%、96.71%、97.87%、95.80%、97.57%和96.74%。10批样品中上述各化合物的质量分数分别为194.39~209.43、242.65~253.32、82.79~86.46、132.45~146.80、169.08~188.13、402.36~429.87、595.75~637.11、112.78~122.92μg·g^(-1);10批样品的相似度在0.999 6~1.000 0之间。结论:本研究所建立的活性成分快速鉴别和多指标定量指纹图谱测定方法,为提高前列欣胶囊的质量控制水平提供了技术支持。

UPLC／ESI-TOF-MS／MS分析蛇床子提取物中香豆素类化合物

目的:对蛇床子提取物中的香豆素类化合物进行快速分析与鉴定。方法:采用超高效液相色谱法(UPLC),选择C18反相色谱柱,以乙腈-水(含0.1%甲酸)为流动相,二元线性梯度洗脱进行分离;联用电喷雾飞行时间质谱(ESI-TOF-MS/MS)获得蛇床子提取物中各香豆素成分的精确分子量和分子式;采用碰撞诱导解离技术获得各化合物裂解碎片信息,结合文献对蛇床子提取物中的各化合物进行鉴定。结果:蛇床子提取物中各化合物在10 min内达到了基线分离,由MS和MS/MS结果推断其中的5种香豆素类成分分别是花椒毒酚、花椒毒素、佛手苷内酯、欧前胡素和蛇床子素。结论:UPLC/ESI-TOF-MS/MS技术能对蛇床子提取物中香豆素类化合物进行有效鉴别。

HPLC-ESI-TOF-MS法优选麻黄中麻黄碱的提取工艺

目的优选麻黄中麻黄碱的最佳提取工艺。方法水煎法获得麻黄药材总提取物,反相高效液相色谱-电喷雾-飞行时间串联质谱选择离子对法测定总提物中麻黄碱的含量,正交设计优选最佳提取工艺。结果方法检测限为0.05μg·mL-1,线性范围为0.005～0.5mg·mL-1;麻黄碱最佳提取工艺为:加30倍量水,75℃加热40min,提取4次。结论该检测方法灵敏、准确,可用于复杂体系中麻黄碱的测定;水煎法经济、绿色、无污染,可作为麻黄碱等生物碱类物质的提取方法。

甘地胶囊化学成分的HPLC-ESI-TOF/MS分析

目的：对甘地胶囊的化学成分进行快速分离与鉴别。方法：采用高效液相色谱．电喷雾．高分辨飞行时间质谱（HPLCESI—TOF／MS）联用技术。色谱柱为Agilent Poroshell 120 SB-C18（100mm×3mm，2．7μm），流动相为0．1％甲酸水溶液．乙腈（梯度洗脱），流速为0．4ml／min，检测波长为254nm，柱温为25℃，进样量为10μl；使用ESI离子源，在负离子模式下采集数据，N2流速为10L／min，载气温度为350℃，毛细管电压为4000V，轰击电压为165V，扫描质量范围（m／z）为100～1100amu。结果：推断出甘地胶囊内容物中主要成分有18种，分别为8-表马钱子苷酸、莫诺苷、马钱素、当药苷、芦丁、异毛蕊花苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山茱萸新苷、黄芩苷、山柰酚-3-O-葡糖苷、2’-羟基-3＇,4’-二甲氧基异黄烷-7-O-β-d-葡糖苷、汉黄芩苷、黄芪甲苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩新素Ⅱ、异黄芪皂苷Ⅰ、乙酰黄芪皂苷Ⅰ。结论：该方法快速、微量、高效，可为甘地胶囊的药效物质基础和质量控制研究奠定基础。

Screening and identification of multiple components in Tanreqing injection using RP-HPLC combined with DAD and ESI-TOF/MS

A liquid chromatography coupled with diode array detector(DAD) and electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry(ESI-TOF/MS) method was developed for the screening and identification of the multiple components in Tanreqing injection, a well-known Chinese medicine injection in China. By combining the DAD spectrum and the accurate mass measurement of ESI-TOF/MS, twelve components in Tanreqing injection were identified. This study contributes to clarifying the nature of Tanreqing injection, and provides an effective and reliable process for the comprehensive and systematic characterization of complex traditional Chinese medicine preparations.

DPPH-HPLC联合HPLC-ESI-TOF/MS筛选、鉴别马粪海胆中的抗氧化成分

目的建立基于DPPH-HPLC联合HPLC-ESI-TOF/MS技术的抗氧化成分快速筛选方法,并用于马粪海胆中抗氧化成分的快速辨识。方法对DPPH-HPLC筛选条件进行系统优化,采用优化的条件对马粪海胆提取物进行筛选,采用HPLC-ESI-TOF/MS技术对其进行鉴别。结果该方法快速、准确、灵敏度高,在马粪海胆中发现了9种具有抗氧化活性的化学成分。结论本研究为海洋天然产物中抗氧化成分快速辨识提供了方法和技术支持。

用PCR和ESI-TOF-MS技术检测线粒体DNA的异质性

目的用PCR和ESI-TOF-MS分型技术检测线粒体DNA（mtDNA）D环高变区,通过碱基组成分析mtDNA的异质性。方法从华东汉族群体选取12名无关个体,用PLEX-ID平台进行mtDNA分型。该平台使用12对引物,对mtDNA高变区1（HVⅠ,引物所跨区域为15893~16451）进行碱基组成分析;使用另外12对引物,对mtDNA高变区2（HVⅡ,引物所跨区域为5~603）进行碱基组成分析,考察mtDNA异质性频率。结果 mtDNA多态性区域的碱基组成信息反映出区段内有无异质性。在高变区Ⅰ的12个区段中,有3个区段表现出多聚C长度异质性：在mtDNA高变区Ⅱ（31~576）的12个区段中,有3个区段检见点异质性,另外5个区域检见Poly C长度异质性。结论群体调查表明,mtDNA的序列异质性多见于高变区Ⅱ的103~267区段,多聚C长度异质性多见于高变区Ⅰ的16124~16201、16157~16201、16182~16250区段和高变区Ⅱ的234~367、431~576区段。将mtDNA标记用于母系关系检验和（或）个体识别时,需要格外留意这些异质性信息,以免结论错误。

加速溶剂萃取法结合HPLC-ESI-TOF MS测定清肝散结汤中29种化学成分（英文）

清肝散结汤(QGSJ)是由14味不同中药组成的复方制剂,基于长期的实验观察和临床经验以不同组合成方用于肝癌的治疗。本研究建立了一种基于加速溶剂萃取(ASE)结合高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(HPLC-ESI-TOF MS)的方法同时测定清肝散结汤中29种化学成分。使用70%乙醇作为提取溶剂,提取温度100℃,静态萃取时间5min,提取2次,以上条件采用正交设计和主成分分析进行优化。HPLC分离采用Kromasil C18色谱柱,梯度洗脱。TOF MS在负离子模式下检测,质量扫描范围m/z100~1 100。结果表明:清肝散结汤中29种成分具有良好的线性关系(r>0.994)和日内、日间精密度(RSD<5%);提取回收率在96.5%~104.5%之间。该方法快速、可靠,适用于复方中药的定量评价。

用ESI-TOF-MS分型技术检测线粒体DNA高变区碱基组成的多态性

目的用ESI-TOF-MS分型技术检测线粒体DNA的D环高变区,通过碱基组成分析其多态性。方法在PLEXID技术平台上,分别对mtDNA高变区1(HVⅠ,15924-16428nt)和mtDNA高变区Ⅱ(HVⅡ,31-576 nt)进行碱基组成分析,考察mtDNA在华东汉族人群的多态性,并将该技术应用于一例特殊的亲子鉴定案件。结果用ESI-TOF-MS分型技术检测线粒体DNA,在高变区Ⅰ的8个区段检见碱基组成的多态性,在mtDNA高变区Ⅱ的10个区段检见多态性。在所应用的亲子鉴定案例中,线粒体DNA标记成了常染色体STR基因座的重要补充,经高变区Ⅰ和高变区Ⅱ的碱基组成检测,最后排除了非母。结论 ESI-TOF-MS检测mtDNA的技术具有良好的应用前景,在一些特殊的案件中,该法可为最终获得可靠鉴定结论提供技术支撑。

HPLC-DAD/ELSD-ESI-TOF/MS分析金鸣片中化学成分及其多指标定量指纹图谱研究

目的采用HPLC-DAD/ELSD-ESI-TOF/MS对金鸣片中化学成分进行分析鉴别,建立其HPLC多指标定量指纹图谱,并为其质量控制提供科学依据。方法采用Agilent SB C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2%乙酸水溶液为流动相,对金鸣片甲醇水提物进行梯度洗脱;柱温为25℃,体积流量为0.8 mL·min^(-1),进样量为30μL,检测波长为280 nm。采用ESITOF/MS正、负离子模式扫描对其化学成分定性分析。结果应用HPLC-DAD-ESI-TOF/MS从金鸣片中初步鉴别了20种化学成分,对其中5种主要成分进行了含量测定;在对多批次样品分析的基础上,建立了金鸣片多指标定量指纹图谱,结合相似度分析实现了对金鸣片的质量评价。结论建立了金鸣片的化学成分分析和质量评价方法,为提高其质量评价标准提供了方法和技术支持。

基于UPLC-ESI-TOF-MS技术的姬松茸和双孢蘑菇酚化合物定性分析及体外抗氧化活性研究

采用超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱对姬松茸和双孢蘑菇子实体中的酚化合物组成进行了初步分离鉴定,并对其体外抗氧化活性进行了分析。从2种子实体中共分离鉴定出16种酚化合物,分别为:甘氨酰-L-酪氨酸、β-N-(γ-谷氨酰)-4-甲酰基苯肼、甲基戊酸、5-羟基色氨酸、2-乙酰氨基-3-羟基苯甲酸、4-羟基苯甲醛、acromelic acid E、L-焦谷氨酰-L-亮氨酸、邻-丁二酰胺基-苯甲酸甲酯、L-焦谷氨酰-L-苯丙氨酸、5-羟脯氨酰-L-谷氨酸、3,4-二羟基苯甲酸、(2R,4R)-2-[(1H-吲哚-3-基)甲基]-4-氨基-2-羟基戊烷-1,5-二酸、环磷酰胺、阿朴鸟嘌呤A和犬尿氨酸。2种食用菌子实体的多酚含量分别为22.21和19.58 mg GAE/g,均具有较强的抗氧化活性,且姬松茸提取液的DPPH自由基清除能力、还原力和Fe^(2+)螯合能力均显著强于双孢蘑菇(P<0.05)。研究结果可为姬松茸和双孢蘑菇相关功能产品或添加剂开发提供一定的理论依据。