基于胞嘧啶碱基编辑器构建ESM1基因敲除Hela细胞系

目的:基于胞嘧啶碱基编辑器(CBE)提前引入终止密码子构建内皮细胞特异性分子1(ESM1)基因敲除Hela细胞系。方法:根据NCBI数据库ESM1序列信息(Gene ID:11082),利用在线软件Benchling在ESM1基因1号外显子上设计2个向导sgRNA,构建对应的pX330-ESM1-sgRNA表达载体。将BE4max、ACBE-ASR、pX330-ESM1-sgRNA 3个质粒共转染Hela细胞,用嘌呤霉素富集筛选CBE工作阳性细胞。PCR扩增含靶点的序列并进行Sanger测序,比较2个sgRNA的效率。通过有限稀释法筛选单克隆细胞,扩大培养后进行测序及Western Blot检测。结果:测序结果显示pX330-ESM1-sgRNA表达质粒构建成功,sgRNA2的编辑效率为66%,远高于sgRNA1的编辑效率;10组细胞单克隆中有6组细胞的靶点进行了双等位基因精确编辑,成功提前引入了终止密码子;Western Blot结果显示ESM1被成功提前终止翻译,达到基因敲除的目的。结论:基于胞嘧啶碱基编辑器提前引入终止密码子的策略成功构建了ESM1基因敲除Hela细胞系,为后续研究ESM1在宫颈癌中的作用机制提供了实验材料,奠定了基础。

ESM1基因对崇仁麻鸡生长性状的影响

本研究利用崇仁麻鸡差异性状的重测序结果,筛选与其生长性状相关的SNP、SV和InDel等位点或结构信息并进行大群验证。结果发现:内皮细胞特异性分子-1(ESM1)基因在崇仁麻鸡群体中检测到3个多态位点,对崇仁麻鸡的生长性状有着显著或极显著影响。ESM1基因在崇仁麻鸡的多个组织中均能检测到表达,经软件预测发现,ES-3位点变异可能会引起ESM1蛋白结构或功能的变化。研究结果表明,ESM1基因对崇仁麻鸡的生长性状有一定影响,但能否作为崇仁麻鸡生长性状的分子标记还需要进一步的确认。

桑仙降压颗粒对自发性高血压大鼠心肌MVD和ESM1蛋白表达的干预

目的观察桑仙降压颗粒对自发性高血压大鼠(SHR)心肌微血管密度(MVD)及内皮细胞特异性分子-1(ESM1)蛋白的影响,探讨其对高血压心肌微血管数目的干预及作用机制。方法 SHR随机分为空白对照组、吲哒帕胺西药对照组、桑仙降压颗粒组,以Wistar大鼠为正常对照,4周及8周后观察SHR心肌MVD及ESM1蛋白的表达。结果相较空白对照组,实验4周桑仙降压颗粒组、吲哒帕胺组CD34表达仅有增多趋势,实验8周时两组CD34表达明显增多,实验4周、8周,与空白对照组相比,桑仙降压颗粒组、吲哒帕胺西药对照组ESM1蛋白表达均增高,均有显著性差异。结论桑仙降压颗粒能有效预防SHR心脏微血管减少,其机制之一可能与上调ESM1蛋白表达有关。

ESM1通过调控PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌细胞增殖和侵袭

目的探讨ESM1在宫颈癌组织中的表达情况及对人宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响,并识别可能机制。方法利用GEPIA数据库分析宫颈癌组织及正常组织中ESM1表达情况;利用Kaplan Meier plotter在线分析工具分析ESM1的表达和患者预后的相关性;将ESM1小干扰RNA及其阴性对照分别转染进宫颈癌细胞系。CCK-8,EdU和Transwell实验检测ESM1对人宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。使用Western blot实验检测ESM1对宫颈癌细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白表达的影响。结果GEPIA数据库显示ESM1在宫颈癌组织中表达水平显著高于正常宫颈组织(P<0.05)。ESM1高表达和宫颈癌患者预后较差显著相关(P<0.05)。敲低ESM1可显著抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭能力(P<0.05)。此外,敲低ESM1可抑制宫颈癌细胞系中p-PI3K和p-AKT蛋白的表达(P<0.05)。结论ESM1在宫颈癌组织中高表达,其可通过调控PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌细胞增殖和侵袭。

ESM1在宫颈鳞癌细胞中的表达及病理特征分析

探讨内皮细胞特异性分子1(Endothelial Cell Specific Molecule 1,ESM1)在宫颈鳞癌中的表达特征、预后价值及其分子机制。 方法 收集2018年12月至2022年12月于本院病理科145例宫颈鳞癌、45例癌旁的石蜡包埋组织,采用免疫组化检测宫颈鳞癌组织中ESM1蛋白的表达,并结合肿瘤公共数据库(GEO、TCGA ),分析ESM1在宫颈鳞癌中的表达及临床意义。此外,通过siRNA实验,敲低ESM1在宫颈鳞癌细胞SiHa和ME-180中的表达,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和集落形成实验检测细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移能力,Western blot法检测VEGFα/VEGFR2/ERK通路相关蛋白的表达。结果 ESM1在对照组织中低表达或不表达,在宫颈鳞癌中,ESM1的表达量显著增高,差异具有统计学意义。ESM1的表达定位于癌细胞的细胞质,ESM1阳性率为31.72%(46/145)。ESM1的阳性表达与患者的血管侵犯、TNM分期、生存状态有显著相关性,而与年龄、淋巴结转移无关。在宫颈鳞癌患者中,ESM1高表达与不良预后密切相关。宫颈癌细胞系siRNA实验表明,下调ESM1的表达抑制了SiHa和ME-180细胞的增殖、迁移及侵袭能力(均P <0.05)。敲低ESM1可导致缺氧诱导因子HIF-1α、VEGFα通路相关蛋白的表达降低,且VEGFR2、ERK的磷酸化水平降低。结论 在宫颈鳞癌中,ESM1的表达显著高于癌旁组织,且与患者的不良预后相关。敲低ESM1的表达,可抑制癌细胞的增殖、迁移及侵袭,该过程可能与VEGFα/VEGFR2/ERK及HIF-1α相关通路相关。表明ESM1可能参与了宫颈鳞癌的发生、发展,可作为宫颈鳞癌预后评估指标或治疗靶点。

ESM1、SRPX2、CA125联合检测诊断早期结直肠癌的价值

目的:探讨血清内皮细胞特异性分子1(ESM1)、Sushi重复含蛋白质X连锁2(SRPX2)、糖类抗原125(CA125)联合检测诊断早期结直肠癌的价值。方法:选择我院2019年11月至2021年8月期间的疑似早期结直肠癌患者321例,其中经病理学检查确诊早期结直肠癌37例(恶性组),结直肠良性疾病284例(良性组);选择同期321名体检健康者作为对照组。所有受试者均接受血清ESM1、SRPX2、CA125水平检测,分析3组受试者血清ESM1、SRPX2、CA125水平,并分析ESM1、SRPX2、CA125单项检测及三者联合检测诊断早期结直肠癌的效果。结果:恶性组患者血清ESM1、SRPX2、CA125水平均明显高于良性组和对照组,P<0.05;良性组患者血清ESM1、SRPX2、CA125水平均明显高于对照组,P<0.05。ESM1、SRPX2、CA125单项检测分别诊断早期结直肠癌20例(54.05%)、23例(62.16%)和21例(56.76%),三项联合检测诊断早期结直肠癌35例(94.59%)。ESM1、SRPX2、CA125三项联合检测诊断早期结直肠癌的效果优于各单项指标检测,P<0.05。结论:血清ESM1、SRPX2、CA125联合检测对早期结直肠癌的诊断效果更好,有望成为筛查早期结直肠癌的新方法。

甲状腺癌患者癌组织中CD34、增殖细胞核抗原和内皮细胞特异分子-1的表达及意义

目的探讨CD34、增殖细胞核抗原(PCNA)和内皮细胞特异分子(ESM)-1在甲状腺癌组织中的表达水平及其与甲状腺癌临床分期、病理分型、有无淋巴结转移的关系。方法选取甲状腺癌组织81例、甲状腺癌旁正常组织28例作为研究对象。采用酶联免疫、实时荧光定量PCR和免疫组织化学方法,检测癌组织和癌旁正常组织样本中CD34、PCNA、ESM-1的蛋白含量、mRNA水平及蛋白阳性表达强度;通过检测CD34、PCNA、ESM-1在甲状腺癌组织中的阳性表达率,分析三种基因与甲状腺癌临床病理特征的关系。结果 (1)与甲状腺癌旁正常组织比较,CD34、PCNA、ESM-1在甲状腺癌组织中的蛋白含量、mRNA水平及蛋白阳性表达强度均明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)CD34、PCNA、ESM-1在甲状腺癌组织中的阳性表达率随甲状腺癌临床分期逐级递增,随病理分级高、中、低分化依次递增,随无、有淋巴结转移依次递增。结论甲状腺癌组织中CD34、PCNA、ESM-1基因表达水平呈明显上调趋势,说明三者可能与甲状腺癌的发生、发展、侵袭、转移密切相关。

宫颈癌患者癌组织中内皮特异性分子-1和血管内皮细胞生长因子蛋白的表达及意义

目的探讨宫颈癌患者癌组织中内皮特异性分子(ESM)-1和血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达水平、蛋白阳性表达强度及其临床意义。方法宫颈癌组织(n=150)和癌旁宫颈组织(n=30)样本均来源于吉林省人民医院病理科。采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色法检测两组样本中ESM-1和VEGF mRNA及蛋白阳性强度的表达水平,分析ESM-1和VEGF的表达与宫颈癌临床病理特征的关系及两者的相关性。结果与癌旁宫颈组织比较,宫颈癌组织中ESM-1和VEGF mRNA水平及蛋白阳性表达强度均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);ESM-1和VEGF的阳性表达率与临床分期、病理类型及有无淋巴结转移均有明显相关(P<0.05);通过Spearman等级相关分析,ESM-1和VEGF在组织中的mRNA水平及蛋白阳性表达强度均呈正相关(r1=0.529,P1=0.026;r2=0.601,P2=0.035)。结论 ESM-1和VEGF参与宫颈癌的发病机制,二者在癌组织中的mRNA水平及蛋白阳性表达强度明显升高,提示阻断二者的表达可能成为宫颈癌的有效靶向治疗。