鲁中肉羊SMAD1和ESR2基因多态性与产羔数关联分析

为探究SMAD1、ESR2基因多态性与鲁中肉羊产羔数之间的关系,采用Sequenom MassARRAY誖SNP技术检测鲁中肉羊SMAD1、ESR2基因单核苷酸多态性,并与产羔数进行关联分析。结果表明:SMAD1基因g.12485895A>G存在AA、AG和GG基因型,基因型频率分别为0.05、0.45和0.50;ESR2基因g.73324006C>T存在CC和CT基因型,基因型频率分别为0.98和0.02。g.12485895A>G位点在鲁中肉羊表现为中度多态(0.25<PIC<0.5),g.73324006C>T位点为低度多态(PIC<0.25);卡方适合性检验表明,g.12485895A>G位点在鲁中肉羊处于哈代温伯格不平衡状态(P<0.05),g. 73324006C>T位点处于哈代温伯格平衡状态(P>0.05)。g.12485895A>G位点多态性与鲁中肉羊产羔数没有显著关联(P>0.05), g.73324006C>T位点多态性与鲁中肉羊产羔数显著关联(P<0.05)。综上可知,SMAD1基因g.12485895A>G位点和鲁中肉羊产羔数性状没有显著关联(P>0.05),ESR2基因g.73324006C>T位点对鲁中肉羊产羔数性状选育具有一定的指导意义。

豚鼠ESR2基因新的可变剪接体克隆及序列分析

【目的】对豚鼠雌激素受体2(ESR2)基因进行克隆及序列分析,并预测分析其编码的蛋白序列,为提高豚鼠产仔性能及其育种打下基础。【方法】根据Gen Bank已公布的豚鼠ESR2基因序列(登录号XM_003472337)设计引物,以豚鼠卵巢组织总RNA为模板,RT-PCR扩增ESR2基因编码区序列(CDS),利用生物信息学分析其编码蛋白氨基酸的组成及理化性质、二级结构及与相关物种的同源性。【结果】克隆获得的豚鼠ESR2基因CDS长度为1650 bp,编码549个氨基酸,比参照序列(XM_003472337)少54个碱基,是ESR2基因新的可变剪接体,且第7外显子缺失;蛋白质二级结构预测结果表明,豚鼠ESR2成熟肽包含α螺旋、β折叠和无规卷曲3种二级结构元件,由于缺失18个氨基酸导致蛋白质结构发生变异;同源性分析结果显示,豚鼠与长尾龙猫、奥氏更格卢鼠、马、达马拉鼹鼠、裸鼢鼠、鼠狐猴、八齿鼠、猪和人的ESR2基因序列同源性分别为91%、87%、86%、91%、92%、86%、88%、92%和86%。【结论】克隆获得的豚鼠ESR2基因为新的可变剪接体,可作为研究豚鼠产仔性能及豚鼠育种重要的候选基因之一。

ESR2基因SNPrs1256049多态性与包头地区汉族男性弱精子症的相关性

目的:探讨包头地区汉族人群ESR2基因rs1256049多态性与男性弱精子症的相关性。方法:采用病例对照研究方法,选取78例男性弱精子症患者为观察组,同时选取精液正常、有正常生育史的男性124例为对照组;设计统一调查问卷收集男性一般人口统计资料以及临床流行病学调查资料,通过PCR扩增目的片段,应用测序法检测ESR2基因rs1256049基因型,分析ESR2基因SNPrs1256049多态性在两组中的分布及差异,采用Logistic回归法分析ESR2基因SNPrs1256049多态性与男性弱精子症的关系。结果:本研究中SNPrs1256049多态位点在观察组和对照组间等位基因频率分布相比,差异无统计学意义(χ2=0.061,P=0.805);经Logistic回归法分析,以GG为对照,GA基因型频率(P=0.622),AA基因型频率(P=0.424),差异无统计学意义。结论:包头地区汉族人群中ESR2基因rs1256049位点多态性与男性弱精子症无相关性。

绵羊ESR2基因组织表达及其多态性与产羔数关联分析

为了探究雌激素受体2 (Estrogen receptor 2, ESR2)基因在绵羊各组织的表达及其多态性与产羔数之间的关系,本研究利用半定量PCR和实时荧光定量PCR技术检测ESR2基因在不同繁殖力小尾寒羊群体组织中的相对表达量,同时采用Sequenom MassARRAY誖SNP技术对多羔品种绵羊(小尾寒羊,湖羊,策勒黑羊)和单羔品种绵羊(苏尼特羊,草原型藏羊,滩羊) ESR2基因g.73324006C>T位点进行检测,并与小尾寒羊产羔数进行关联分析。半定量PCR表明,ESR2基因在单、多羔小尾寒羊子宫中高表达,在其它组织中等或低丰度表达;单羔群体、多羔群体间荧光定量PCR表明,ESR2基因在单羔小尾寒羊垂体表达量显著高于多羔小尾寒羊(p<0.05);群体遗传学分析表明,g.73324006C>T在小尾寒羊群体中表现为低度多态(PIC<0.25),在滩羊群体中处于中度多态(0.25<PIC<0.5);卡方检验表明:g.73324006C>T在小尾寒羊群体处于哈代温伯格平衡状态(p>0.05);关联分析表明,g.73324006C>T位点多态性与小尾寒羊第一胎、第二胎、第三胎产羔数及平均产羔数均显著关联(p<0.05),CC型各胎产羔数均高于TC型。与FecB (A746G)基因组合后发现,GG-CC和AG-CC基因型母羊产羔数显著高于AA-TC、AA-CC、AG-TC基因型组合(p<0.05)。综上,ESR2与小尾寒羊产羔数密切相关,g.73324006C>T可作为绵羊产羔性状选育的潜在分子标记。

FecB突变对绵羊发情表型及格拉夫卵泡颗粒细胞中ESR1和ESR2基因表达的影响

为了研究FecB突变对绵羊发情性状的表型效应及相关分子机制,试验将体重为68~73 kg的经产小尾寒羊母羊按照FecB基因型分为++、+B和BB三个基因型组,每组7只,通过公羊试情、腹腔内窥镜等方法,测定试验母羊的发情表型差异;利用放射免疫法测定试验母羊的血清繁殖激素水平;采用荧光定量PCR法测定试验母羊格拉夫卵泡颗粒细胞的ESR1和ESR2基因的mRNA表达水平。结果表明:+B基因型组试验母羊于撤栓后(23.14±1.46)h表现出第一次发情,显著早于++(32.61±0.89)h和BB(33.43±0.60)h基因型组(P<0.05)。撤栓后48 h的+B基因型组血清LH浓度为(5.18±0.47)mIU/mL,显著高于BB基因型组的(3.02±0.42)mIU/mL(P<0.05),而此时+B基因型组试验母羊的格拉夫卵泡内颗粒细胞的ESR1和ESR2基因的mRNA表达水平也均极显著高于++基因型组(P<0.01),ESR1基因mRNA表达水平极显著高于BB基因型组(P<0.01)。说明小尾寒羊的格拉夫卵泡颗粒细胞中雌激素受体基因表达量的增加有助于绵羊的外部发情表型和排卵发生的提前开始。

5个绵羊群体ESR2基因多态性与产羔数的关联分析

为探究绵羊ESR2基因多态性与产羔性状的相关性,本研究以杜泊羊、滩寒羊、杂一代、杂二代和横交一代5个绵羊群体为研究对象,利用Sequenom Mass ARRAY?SNP技术对5个绵羊群体ESR2基因3个错义突变位点进行检测,并与其产羔数进行关联分析。结果显示,ESR2基因g.73323973C>T和g.73326795G>A位点在5个群体中均表现为中度多态(0.25<PIC<0.50);g.73353489C>A位点在滩寒羊群体中表现为低度多态(PIC<0.25),在杜泊羊、杂一代、杂二代和横交一代4个群体中表现为中度多态。产羔数关联分析表明,g.73323973C>T位点在滩寒羊群体中TT型产羔数极显著高于TC、CC型(P<0.01),说明g.73323973C>T位点适用于滩寒羊群体多羔性状的选育。通过生物信息学分析表明,3个位点突变前后ESR2蛋白的二级结构类型均发生了变化;蛋白互作网络分析表明ESR2蛋白与调控动物繁殖的相关蛋白质互作。本研究为开展提高绵羊繁殖力的分子标记辅助选育提供依据。

黑羽乌蒙乌骨鸡ESR2、PRL基因多态性与产蛋数的关联性分析

为了探究黑羽乌蒙乌骨鸡ESR2和PRL基因多态性及其对产蛋数的影响,试验采用PCR直接测序技术筛选黑羽乌蒙乌骨鸡ESR2和PRL基因单核苷酸多态性(SNP)位点,对ESR2、PRL基因mRNA二级结构和蛋白质二级、三级结构进行预测,并分析SNP位点的遗传特性、连锁不平衡及单倍型和双倍型,最后对ESR2、PRL基因SNP位点不同基因型和双倍型、合并基因型与300日龄黑羽乌蒙乌骨鸡产蛋数的关联性进行分析。结果表明:在黑羽乌蒙乌骨鸡ESR2基因中检测到3个SNP位点,均产生3种基因型,分别为位于内含子7的g.53223142 G>A,内含子8的g.53223404 G>A,外显子8的g.53223338 C>T;其中外显子8的g.5322338 G>T,导致苏氨酸变为甲硫氨酸,为错义突变位点。在PRL基因中检测到4个SNP位点,分别为位于内含子4的g.58576867 A>G,位于外显子5的g.58577099 C>T、g.58577160 C>G和g.58577368 T>C,其中位于外显子5的g.58577099 C>T位于外显子编码区,而其他两个位点位于外显子非编码区。ESR2基因SNP位点g.53223338 C>T,突变前mRNA序列二级结构的自由能为-1 789.92 kJ/mol,突变后自由能为-1 794.10 kJ/mol;蛋白质二级结构中的α-螺旋、β-转角、无规卷曲和延伸链占比和三级结构都不发生改变。ESR2基因3个SNP位点中的优势基因型分别为AA、TT、GA,相对应的优势等位基因分别为A、T和A,3个SNP位点均未偏离Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);PRL基因4个SNP位点中的优势基因型分别为AA、TT、GG、TC,相对应的优势等位基因分别为A、T、G、T,SNP位点g.58576867 A>G、g.58577099 C>T和g.58577160 C>G未偏离Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),g.58577368 T>C显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)。ESR2基因3个SNP位点间均不存在强连锁不平衡,3个SNP位点中存在4种单倍型、8种双倍型;PRL基因4个SNP位点中g.58577099 C>T与g.58577160 C>G之间完全连锁不平衡,其他位点间均不存在强连锁不平衡,4个SNPs位点中存在4种单倍型、8种双倍型。300日龄黑羽乌蒙乌骨鸡ESR2基因不同SNP位点基因型和双倍型个体间产蛋数均差异不显著(P>0.05),但双倍型H1H3(AACTGG)个体产蛋数最高;PRL基因不同SNP位点基因型个体间产蛋数均差异不显著(P>0.05),但双倍型H1H4(AGCTCGCC)个体的产蛋数显著高于双倍型H2H2(AATTGGCC,P<0.05)。对ESR2基因SNP位点g.53223338 C>T(外显子8)和PRL基因SNP位点g.58577099 C>T(外显子5)的合并基因型与产蛋数进行关联性分析发现,CT-CT为优秀基因组合,拥有该基因组合的个体产蛋数均高于其他基因组合个体。说明可通过提高ESR2基因AA、CT、GG与PRL基因AG、CT、CG和CC组合基因型频率增加黑羽乌蒙鸡产蛋数,也可通过选育CT-CT基因型个体来进一步提高黑羽乌蒙乌骨鸡群体的繁殖性能。