胶质瘤细胞中上皮剪接调控蛋白1(ESRP1)对人髓细胞白血病基因(MCL1)剪接的调控

目的研究胶质瘤细胞系U251中上皮剪接调控蛋白1(ESRP1)对人髓细胞白血病基因1(MCL1)转录本剪接的调控作用。方法对胶质瘤患者数据库中MCL1的测序结果进行数据挖掘,寻找关键位点。构建pc DNA-ESRP1外源表达载体并在U251细胞中进行过表达,通过反转录PCR和Western blot法检测MCL1不同异构体的表达情况。结果 ESRP1在U251细胞中的蛋白表达水平较正常胶质细胞低,MCL1异构体1在U251细胞中的表达高于正常胶质细胞,而异构体2和异构体3的表达则低于正常胶质细胞;在U251细胞中过表达ESRP1以后,发现异构体1表达较未转染组下降,而异构体3表达则显著升高,异构体2表达无明显变化。此外,第801G、802A缺失的MCL1无法被ESRP1正确剪切,异构体1和异构体3的表达与ESRP1转染前后无显著差异。结论抑制ESRP1表达或RNA识别位点突变可以引起肿瘤中癌基因转录本剪接异常。

miR-23a调控ESRP1干预直肠癌细胞增殖和凋亡

目的分析微小RNA-23a(microRNAs-23a,miR-23a)在直肠癌组织及细胞系中的相对表达水平,以及miR-23a对直肠癌细胞增殖和凋亡的作用,并分析其可能作用机制。方法采用qRT-PCR检测miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平;利用qRT-PCR检测miR-23a在直肠癌SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a抑制剂(inhibitor)RNA片段和抑制剂阴性对照RNA片段(inhibitor negative control,inhibitor NC),并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测转染后细胞凋亡率;Western blot法检测上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRPl)蛋白在SW480细胞中的表达水平;构建野生型p GL3-ESRP1-3'UTR(wt-p GL3-ESRP1-3'UTR)或突变型p GL3-ESRP1-3'UTR(mut-p GL3-ESRP1-3'UTR)质粒,HEK293和SW480细胞经上述质粒分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染后测定双荧光素酶活性。结果与癌旁正常组织相比较,miR-23a在直肠癌组织中的相对表达水平明显上调,差异有统计学意义(P=0.000);与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调,差异有统计学意义(P=0.000);SW480细胞转染miR-23a inhibitor后,细胞增殖较inhibitor NC组下降35.54%±5.27%,两组结果差异有统计学意义(P=0.000);转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显高于inhibitor NC组(P=0.000);荧光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;SW480细胞转染inhibitor NC后对ESRP1蛋白表达无明显影响,而转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高。结论 miR-23a在直肠癌组织和细胞系中的表达均显著升高,miR-23a可通过下游靶基因ESRP1从而调控直肠癌细胞增殖和凋亡。

miR-23a和ESRP1在直肠癌中的作用

目的探究miR-23a和ESRP1在直肠癌中的作用。方法选取42例经手术切除的新鲜直肠癌组织和癌旁正常组织标本作为研究对象,对miR-23a和ESRP1在直肠癌组织中的表达分别使用RT-qPCR分析、免疫组化检测。结果 miR-23a和ESRP1在直肠癌组织中的表达呈明显的负相关系;miR-23a的直接靶向基因是ESRP1。结论 ESRP1可被miR-23a进行负向调控,从而对直肠癌细胞的生长以及凋亡产生影响。

ESRP1剪接变异体的克隆及其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响

目的克隆ESRP1剪接变异体并构建其慢病毒表达载体,研究其对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法以OVCAR3细胞的c DNA为模板,PCR扩增ESRP1剪接变异体,将其连接到带有Myc标签的pCMV-Myc真核表达载体;再以该真核表达载体为模板,将含有Myc标签的ESRP1剪接变异体克隆到慢病毒表达载体p LVt TR/KRAB-Red上,从而构建带有Myc标签的ESRP1剪接变异体慢病毒表达载体;用该慢病毒表达载体转染293T细胞,包装慢病毒;用该慢病毒感染MDA-MB-231细胞,用MTT法检测该细胞增殖,用Western blot检测该细胞中PARP蛋白的表达。结果成功构建带有Myc标签的ESRP1剪接变异体慢病毒表达载体,并包装出慢病毒;用该慢病毒感染MDA-MB-231细胞后,与空载体对照组比较,ESRP1过表达能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05);ESRP1过表达能诱导PARP蛋白的剪切。结论成功构建带有Myc标签的ESRP1剪接变异体的慢病毒表达载体;ESRP1过表达能抑制MDA-MB-231细胞增殖,这可能与细胞死亡有关。

ESRP1在人头颈部鳞状细胞癌中的表达及其与ZEB1的关系

目的:探讨上皮剪切调控蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)和在人头颈部鳞状细胞癌(Head and Neck Squamous Cell Carcinoma,HNSCC)发生、发展中的作用及其与锌指E盒结合蛋白1(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)的关系。方法:采用免疫组化S-P染色法检测ESRP1和ZEB1在32例HNSCC组织及其对应的癌旁组织中的表达情况。结果:(1)HNSCC组织中ESRP1表达较癌旁组织低(P<0.05);(2)在HNSCC组织中ESRP1的表达与肿瘤分化及复发/转移密切相关(P<0.05);(3)HNSCC组织中ESRP1高表达者ZEB1表达较低(P<0.05)。结论:(1)ESRP1表达减少或缺失对HNSCC的发生发展可能具有促进作用,与肿瘤分化程度也可能密切相关;(2)ESRP1表达下调与ZEB1高表达密切相关。

ESRP1在恶性肿瘤中的研究进展

上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein1,ESRP1)是近年发现的RNA结合蛋白,具有选择性剪接前体mRNA的作用,能够在转录水平调节基因的表达,进而影响基因转录过程。从分子生物学和基因学角度深入研究后发现,ESRP1在多种不同部位的肿瘤中表达情况不一,可能通过信号通路的调控致使恶性肿瘤浸润性、迁移性增强并影响患者预后。ESRP1对肿瘤的起源、进展、转移及预后判断等多方面具有重大意义,本文将围绕ESRP1与恶性肿瘤相关性的研究展开综述,为ESRP1相关的肿瘤诊疗扩展思路。

miR-23a-3p靶向调控ESRP1对非小细胞肺癌增殖与迁移的影响

针对miR-23a-3p借助靶向调控ESRP1对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移以及增殖的调控进行探究。方法 采取实时荧光定量PCR对癌旁正常组织和NSCLC组织还有肺癌细胞株德等进行表达。当NSCLC细胞转染miR-23a-3p mimics出现后,借助CCK-8法对NSCLC细胞增殖能力进行检测,应用WesternBlot检测NSCLC细胞ESRP1的表达情况。应用双荧光素酶报告基因实验验证ESRP1是miR-23a-3p的靶基因。结果 与正常上皮细胞及癌旁正常组织相比,miR-23a-3p在肺癌细胞及肺癌组织中的表达明显升高(p<0.05)。CCK-8细胞增殖实验及划痕实验表明,miR-23a-3p过表达能增强肺癌细胞的增殖及迁移能力(p<0.05)。WesternBlot实验表明miR-23a-3p过表达能抑制肺癌细胞中ESRP1的表达。进一步研究发现miR-23a-3p直接作用于ESRP1的3'-UTR。结论 miR-23a-3p通过靶向调控ESRP1来增强NSCLC的细胞的增殖与迁移。