DETECTION OF GENES FOR HEAT-STABLE ENTEROTOXIN IN ESCHERICHIA COLI BY BIOTINYLATED ST-DNA PROBES

Reference strains of enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC), non-enterotoxigenic Escherichia coli (non-ETEC), enteropathogenic Escherichia coli (EPEC), enteroinvasive Escherichia coli (EIEC), and other enteropathogenic bacteria were used to prove the reliability of BIO-ST-DNA probe hybridization. In addition, 417 strains of E. coli isolated from children with diarrheal diseases in Shanxi Children's Hospital were examined for BIO-ST-DNA probe hybridization. In the test, BIO-ST-DNA hybridization was compared with suckling mouse assay in identifying ST-ETEC. The results obtained by both methods showed no significant difference. It was found that identification of ST-ETEC using hybridization is a simple, sensitive and more practical method.

大肠杆菌生物素LT基因探针的制备及应用

碱变性和羟基磷灰石柱层析分离纯化大肠杆菌重组质粒ＰＷＪ１４０ＤＮＡ，经ＰＳＴＩ完全酶解，琼脂糖凝胶电泳分离，电洗脱回收５．９ｋｂ片段，经化学修饰转氨基作用后制成ＬＴ基因的生物素探针，斑点印迹杂交试验表明，生物素ＬＴ基因探针灵敏性高，可检测到ｐｇ水平，与标准的ＥＴＥＣ（ＬＴ＋）杂交阳性，与非ＥＴＥＣ的大肠杆菌、沙门氏菌等无杂交反应。２０份不同来源的样品试验结果表明，ＬＴ探针可用于检测猪、牛、人、鸡及食品来源的毒素源性大肠杆菌。

肠毒素大肠杆菌LTh－STIb二价基因探针的克隆及其应用研究

在肠毒素大肠杆菌（ＥＴＥＣ）ＬＴｈ－ＳＴＩａ－ＳＴＩｂ三价基因探针的基础上，用限制性内切酶ＥｃｏＲｌ酶切，回收片段．重新构建ＬＴｈ－ＳＴＩｂ二价基因探针的克隆株。用辣根过氧化物酶复合物（ＨＲＰ）直接标记二价基因探针，建立了增强型化学发光反应（ＥＣＬ）检测ＥＴＥＣ的方法．其敏感性可测到０．１ｐｇ的质粒ＤＮＡ或由１０个菌体培养而来的ＥＴＥＣ细胞，与同位素标记杂交方法的敏感性一致．且此探针仅与产ＳＴＩｂ、ＬＴｈ肠毒素的人源性ＥＴＥＣ菌株杂交，与ＳＴＩａ肠毒素菌株及其它非ＥＴＥＣ菌株均无杂交信号．该探针与三价探针及ＬＴｈ单价探针联合使用，能间接将ＬＴｈ、ＳＴＩａ和ＳＴＩｂ３种肠毒素分型。结果表明该方法简便快速、特异敏感，无放射性污染，是ＥＴＥＣ实验室诊断及分子流行病学调查的有效工具。

产肠毒素大肠杆菌腹泻病的系列研究（Ⅱ）临床特点

用产肠毒素大肠杆菌（ＥＴＥＣ）的４种主要毒力基因（ＬＴ、ＳＴｐ、ＳＴｈ、ＣＦＡ／Ｉ）制成同位素标记的探针作为诊断手段，在广州市远郊农村对ＥＴＥＣ腹泻病做了系列研究。该病年发病率１２．１７％，年龄１个月～７５岁。不足５岁的发病率为８０．２８％，其中不足２岁的高达１８．９７％；５岁以上的为２．１８％，差异非常显著（Ｐ＜０．０１）．男孩显著高于女孩（Ｐ＜０．０１）．发病高峰在７月（１．４７％）和１１月（１．７６％）。临床症状以腹泻（１００％）、呕吐（３２．５％）、食欲差（２８．９％）为主，９５％的不足２岁患者伴有上感症状，３１．３％有３８℃以下低热，个别达３９℃以上者常伴有合并感染，但成人少见，７５％患者为水样便或稀便，１４．５％为粘液便，３．６％为脓血便；有脓血便者常合并志贺氏菌、空肠弯曲菌或侵袭性大肠杆菌（ＥＩＥＣ）感染。８２％的患者每天大便３～５次，＞１０次者常有合并感染。菌型以ＥＴＥＣ－ＳＴｐ为主，依次为ＬＴ、ＳＴ／ＬＴ和ＣＦＡ／Ｉ。病程一般为３～４天。对常用抗菌药物敏感，但对红霉素、四环素、青霉素Ｇ有高度抗性，且多重抗性十分普遍。

肠毒素大肠杆菌LTh-STIb二价基因探针的克隆及其应用研究

在肠毒素大肠杆菌（ETEC）LTh－STIa－STIb三价基因探针的基础上，用限制性内切酶EcoRI酶切，回收片段，重新构建LTh－STIb二价基因探针的克隆株。用辣报过氧化物防复合物（HRP）直接标记二价基因探针，建立了增强型化学发光反应（ECL）检测ETEC的方法，其敏感性可测到0．1pg的质粒DNA或由10个菌体培养而来的ETEC细胞，与同位素标记杂交方法的敏感性一致，且此探针仅与产STIb、LTh肠毒素的人源性ETEC菌株杂交，与STIa肠毒素菌株及其它非ETEC菌株均无杂交信号。该探针与三公探针及LTh单价探针联合使用，能间接将LTh、STIa和STIb三种肠毒素分型。结果表明该方法简便快速、特异敏感、无放射性污染，是ETEC实验室诊断及分子流行病学调查的有效工具。