ETMIC-2基因表达产物对人工感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡的保护及病理学研究

采用大肠杆菌表达鸡艾美耳球虫微线蛋白(ETMIC 2),对石歧杂小公雏在1、2周龄按分组以不同剂量分别肌注免疫,3周龄人工感染强毒柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,4周龄全部捕杀,进行增重、盲肠病变和免疫淋巴器官病理组织学观察。结果表明,全部试验组增重率均高于红对照组,其中两组超过白对照组;盲肠病变均低于红对照组;免疫淋巴器官发生不同程度的增生,尤其是胸腺,盲肠扁桃体及脾脏,淋巴滤泡增大,淋巴细胞明显增殖。此结果可以提示,适量的ETMIC 2基因表达产物免疫雏鸡后,再进行柔嫩艾美耳球虫的强毒攻击,能刺激机体的免疫淋巴组织器官产生免疫应答反应,对机体具有较好的保护力。

猪瘟病毒E2基因的定点突变、在大肠杆菌中的高效表达及表达产物的免疫原性

用重组PCR技术对猪瘟病毒石门株E2基因进行了定点突变 ,然后将突变后的基因克隆至表达载体质粒pET 2 8a(+ )中 ,构建成重组质粒pETE2。将pETE2转入受体菌BL2 1(DE3 )plysS中 ,在IPTG的诱导下 ,重组转化菌可高效表达目的基因 ,表达量平均可达菌体蛋白总量的 2 8%。免疫印迹和间接ELISA表明所表达的蛋白是CSFV特异性的。

Bcl-2及Bag-1基因产物在肾癌组织中的表达及意义

目的 讨论基因 Bcl- 2和 Bag- 1在肾癌组织中的表达及相互关系 ,了解肿瘤增殖与凋亡的特点 .方法 采用免疫组化 SABC法对 4 1例肾癌与 10例正常肾组织的石蜡标本切片对照 ,进行产物表达的统计研究 .结果 Bcl- 2在肾癌组织中阳性表达率为 75 .6 % ,与正常肾组织 30 .0 %相比 ,有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ,但其表达与不同病理细胞类型、病理分级及临床分期无关 (P>0 .0 5 ) .Bag- 1在肾癌组织中表达率为 6 1.0 % ,正常肾组织 10 .0 %表达 . Bag- 1与肿瘤分级、分期及预后密切相关 (P<0 .0 5 ) ,随肾癌恶性程度增加 ,其表达强度也增加 .Bcl- 2与 Bag- 1的表达正相关 (r=0 .4 38) .结论 肾癌组织中 Bag- 1表达可作为预后指标 ;Bcl- 2可能参与肾组织由良性向恶性转化的过程 ,但与癌细胞恶性分化程度无关 .

Kaposi肉瘤Bcl-2原癌基因产物的表达观察

Ｋａｐｏｓｉ肉瘤Ｂｃｌ－２原癌基因产物的表达观察普雄明①石得仁①沈大为②近年来有关细胞凋亡机制与肿瘤关系的研究已成为肿瘤分子生物学研究的一项重要内容，而Ｂｃｌ－２原癌基因产物可抑制细胞凋亡，观察其在某些肿瘤组织中的表达水平，对于研究细胞凋亡机制在肿瘤...

EtMIC-2表达产物对鸡三种艾美耳球虫的保护试验

鸡艾美耳球虫病由隶属顶复门7种艾美耳球虫（E.tenella、E.necatrix、E.acervulina、E.maxima、E.brunetti、E.praecox、E.mitis）引起,常混合感染,有很高的发病率和死亡率,轻者则影响鸡的增重和饲料转化率。微线是顶器的结构之一,位于子孢子和裂殖子前端,EtMIC-2是其50 kDa左右的酸性蛋白,在虫体入侵时表达,该蛋白可能在虫体入侵时起重要作用。用Pet载体经原核表达该蛋白,7、14日龄经口服、肌注不同剂量工程活菌和菌体裂解蛋白二次免疫鸡,免疫后1周用3种艾美耳球虫（E.tenella、E.acervulina、E.maxima）攻虫,发现相对增重率随菌体蛋白含量增加呈现增强趋势,E.tenella攻虫表现最有效的是口服PBS200μg活菌组为96％,E.ac-ervulina、E.maxima分别为96％、87％。从攻虫后7～14 d卵囊排出曲线看,每天排卵囊数和相对卵囊产量均低于红对照;相对卵囊产量,E.tenella攻虫后,口服PBS 200μg活菌组最低,为17％,E.acervulina、E.maxima攻虫后,口服PBS 200μg裂解菌组最高,分别为90％、93％。从增重与卵囊产量来看,EtMIC-2对E.tenella、E.ac-ervulina和E.maxima这3种球虫有一定的免疫保护作用,尤其口服200μgPBS活菌时,对E.tenella保护作用最明显。说明来源于E.tenella子孢子的Etmic-2基因的表达产物对E.tenella、E.

汉滩病毒S基因0.7kb片段与M基因G2片段不同拼接方式嵌合基因原核表达产物的初步比较

比较汉滩病毒S、M基因部分片段的嵌合基因不同拼接方式表达产物的活性。构建了嵌合基因原核表达载体pGEX-4T-1-S0.7G2,并与已构建的pGEX-4T-1-G2S0.7的诱导表达产物进行了比较。结果表明,融合蛋白同时保持亲本蛋白的结合活性,且前者表达产物的结合活性始终比后者低。研究表明,嵌合基因的不同拼接方式对融合蛋白的活性可能有一定的影响。

MDM_2基因产物在大肠癌中的表达及其临床意义

目的 研究MDM2 基因蛋白表达与大肠癌生物学行为及预后的关系。方法 应用免疫组化LDP法检测 6 0例大肠癌手术标本、30例癌旁组织及 16例大肠良性病变组织中MDM2 基因蛋白的表达。结果 大肠癌组织中 ,MDM2 基因蛋白表达阳性率为 75 % ( 4 5 /6 0 ) ,其中伴有区域淋巴结转移者阳性率为 95 .6 % ( 4 3/45 ) ,无伴有淋巴结转移者阳性率为 13 .3 % ( 2 /15 ) ,两者比较差异有高度显著性 ( χ2 =36 .30 ,P <0 .0 0 1) ;MDM2 基因蛋白表达水平在不同的大肠癌分化程度、浸润深度中差异有高度显著性 ( χ2 分别为 2 8.42 ,2 4.6 7,P均 <0 .0 0 1) ;但在不同的Duke分期、不同年龄组、不同部位及类型的大肠癌之间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;MDM2 基因蛋白表达阳性者术后 5年生存率与阴性者比较差异有显著性 ( χ2 =6 .40 ,P <0 .0 5 )。 30例癌旁组织及 16例良性病变呈阴性表达。结论 MDM2 基因在大肠癌浸润和淋巴结转移过程中发挥重要作用 ,MDM2 基因蛋白的检测 ,可作为大肠癌预后判断的一个重要指标。

骨肿瘤组织C-erbB-2原癌基因产物表达及临床意义

应用S－P法观察了67例骨肿瘤标本C－erbB－2癌基因产物的表达。结果显示：20例良性骨软骨瘤呈阴。性反应，而侵袭性骨巨细胞瘤与骨肉瘤分别有48％、65％的阳性表达（P＜0．001）。提示C－erbB－2原癌基因产物的表达与骨肿瘤的细胞生物学行为有关，随骨肿瘤的恶性程度增高，阳性表达频率显著性增加。进一步研究表明：C－erbB－2的阳性表达随骨巨细胞瘤病理分级提高，软组织受累和局部复发而明显增高；肿瘤＞5cm的骨肉瘤患者C－erbB－2的阳性率越高。C－erbB－2阳性表达的骨肉瘤患者预后较差。

重组绵羊白细胞介素2基因的分泌性表达及表达产物的提取

将构建的绵羊白细胞介素2基因表达菌株(PMPOIL2)接种在营养肉汤培养基上,培养20h,分别收集菌体及上清液。菌体超声裂解;上清液中的蛋白质分别用MgCl2、(NH4)2SO4、NaCl沉积。用抗Pilin-IL2血清检测菌体裂解物及上清沉淀物,结果上清沉淀物中有凝集抗原,而菌体中没有,并且(NH4)2SO4沉积的效果最好。

乳腺癌中抗凋亡基因bcl-2蛋白产物的表达及意义

bcl—2通过抑制细胞凋亡过程，从而导致肿瘤发生。为了检测bcl—2在乳腺癌中的表达情况及与临床病理的关系，应用枸椽酸—ABC——微波免疫组化技术．对87例福尔马林固定，石蜡包埋乳腺癌组织进行bcl—2癌基因蛋白表达的测定。结果显示：bcl—2蛋白在乳腺癌原发灶中的阳性表达率63．22％，其表达与ER、PR状况关系密切（均P＜0．001）；随着肿瘤病理学级别的升高，bcl—2蛋白表达率下降。bcl—2蛋白表达在区域淋巴结无转移组比淋巴结有转移组高（P＜0．001），bcl—2阳性表达率在术后生存期≥5年组比＜5年组高，且较少发生原位复发及脏器转移，差异具有显著性意义（P＜0．001）。提示；bcl—2蛋白参与乳腺癌的发生，并与好的预后因素相联系。

MDM2基因产物在大肠癌中的表达及其临床意义

目的：研究MDM2基因蛋白表达与大肠癌生物学行为、预后的关系。方法：应用免疫组化LDP法检测60例大肠癌手术标本、30例癌旁组织及16例大肠良性病变组织中MDM2基因蛋白的表达。结果：大肠癌组织中，MDM2基因蛋白表达阳性率为75％(45／60)，其中伴有区域淋巴结转移者阳性率为95．6％(43／45)，无伴有淋巴结转移者阳性率为13．3％(2／15)，两者比较差异有显著性(P<0．001)；MDM2基因蛋白表达水平与大肠癌分化程度、浸润深度有显著性差异(P<0．001，P<0．001)，而且表达强度与其分化和浸润程度呈正相关，分化越差、浸润越深，阳性表达程度越强，反之亦然；MDM2表达与大肠癌Duke’s分期亦有显著性差异(P<0．001)，但在不同年龄组、不同性别、不同部位及不同类型的大肠癌之间差异无显著性(P>0．O5)；MDM2基因蛋白表达阳性者术后5年生存率24．4％(11／45)，而阴性者达60．0％(9／15)，二组患者术后5年生存率有显著性差异(P<0．001)。30例癌旁组织及16例良性病变呈阴性表达。结论：MDM2基因在大肠癌浸润和淋巴结转移过程中发挥重要作用，研究大肠癌组织中MDM2基因表达，有助于对大肠癌生物学行为的进一步了解，MDM2基因蛋白的检测，可作为大肠癌预后判断一个重要指标。

c-erbB-2和p53基因产物在实验性大肠癌裸鼠移植瘤和转移瘤中的表达

目的探讨c-erbB-2和p53基因产物在实验性人大肠癌裸鼠移植瘤和转移瘤中的表达及其在肝转移中的作用。方法用具有不同生物学物特性的人大肠癌细胞株HT29(低分化腺癌)和Lovo细胞株(未分化癌)进行BALB/C裸鼠脾内接种,分别制成人大肠癌肝转移模型。应用快速免疫组化法分别检测裸鼠移植瘤和转移瘤中c-erbB-2和p53基因产物的表达情况。结果 p53蛋白在两种细胞株接种的移植瘤及转移瘤中的表达虽有一定的变化,但无统计学意义。c-erbB-2基因产物在Lovo细胞株接种后的移植瘤及转移瘤中的阳性表达率间有显著的统计学差异(p<0.05)。结论 p53基因突变可能发生在癌转移之前,而c-erbB-2基因产物变化可能与癌转移有关。

涎腺肿瘤中c-erbB-2癌基因扩增及蛋白产物过度表达的研究

作者采用ＤＮＡ斑点杂交及免疫组织化学方法对２８５例涎腺肿瘤石腊包埋组织中ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因扩增及蛋白产物过度表达进行检测．结果表明：涎腺恶性肿瘤及多形性腺瘤有不同程度的ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因扩增，其中癌在多形性腺瘤中扩增率２０／３０（６６．６７％），腺癌为１３／２０（６５．００％），明显高于其它肿瘤（ｐ＜０．０５）．ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白产物过度表达出现在癌在多形性腺瘤中１６／３０（５３．３３％）、腺癌１１／２０（５５．００％）、肉瘤１／１０（１０．００％）及多形性腺瘤中５／３５（１４．２９％），癌在多形性腺癌中及腺癌表达率明显高于其它肿瘤（ｐ＜０．０５）．提示：ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因可能与涎腺肿瘤细胞分化程度有关，在部分肿瘤的发生、发展过程中起一定的作用．

酸味中药复方对糖尿病大鼠心肌组织晚期糖化终产物形成及其受体基因表达的影响

目的以氨基胍(AG)为对照,观察酸味中药复方对2型糖尿病大鼠心肌组织晚期糖化终产物(AGEs)含量及受体(RAGE)基因表达的影响,探讨其防治糖尿病心肌病变的机制。方法采取腹腔注射链脲佐菌素(STZ)配合高热量饮食的方法建立糖尿病动物模型。成模后随机分为模型组、AG组、中药组。给药8周和12周后分别采用荧光法和荧光定量PCR法检测心肌组织AGEs含量和RAGE基因表达量。结果糖尿病大鼠心肌组织AGEs含量和RAGE基因表达量明显高于正常组(P<0.05);中药组和AG组AGEs含量和RAGE基因表达量明显低于模型组(P<0.05)。结论酸味中药复方可能通过抑制大鼠心肌组织AGEs形成和下调RAGE基因表达实现对高糖状态下心肌组织保护作用。

非小细胞肺癌凋亡及相关基因bcl-2和bax的表达

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡与相关基因bcl-2、bax表达产物的关系及其临床意义。方法:应用流式细胞术和间接免疫荧光标记法进行检测。结果:凋亡率,Bcl-2、Bax蛋白标记率在NSCLC组与对照组中的差别有统计学意义(P<0.05)。NSCLCI期凋亡率明显高于II、III期组(P<0.01)。NSCLCI期组Bcl-2蛋白标记率明显低于II、III期组(P<0.01)。NSCLC中Bcl-2蛋白标记率与凋亡率呈负相关(r=-0.667,P<0.01)。Bax标记率与凋亡率无直线相关性(r=0.230,P>0.05)。Bcl-2/Bax>1组凋亡率明显低于Bcl-2/Bax≤1组(P<0.05)。结论:随着NSCLC临床分期的进展凋亡率下降,Bcl-2通过抑制凋亡影响NSCLC的进展。NSCLC细胞内存在一种对死亡讯号的应答模式:bcl-2/bax。

人工饲料育家蚕/杆状病毒表达猪瘟病毒囊膜糖蛋白E_2基因

以重组病毒Bm-BacPAK6-E2接种全龄人工饲料育及5龄桑叶育家蚕皓月×菁松幼虫、蛹,观察重组病毒的感染发病情况,调查病蚕、蛹的采血量并进行SDS-PAGE分析.结果表明,全龄人工饲料育家蚕接种重组病毒的成功率、采血量等指标均与5龄桑叶育相近,SDS-PAGE蛋白质电泳在家蚕幼虫、蛹血淋巴中均检测到1条与目的蛋白理论分子量(63 kD)相符的特异性蛋白条带,初步认为是重组病毒Bm-BacPAK6-E2的融合表达产物.

胃癌组织中c-erbB-2癌基因表达与胃癌主要病理特征的关系

原癌基因c-erbB-2（又称neu或HER-2）属于受体酪氨酸激酶Ⅰ类亚家族,定位于人类17号染色体q21区带上,编码产物为Mr18500的跨膜糖蛋白（故又称P185）,参与对细胞生长、繁殖、分裂的调控,其异常表达或基因突变时,使某些不正常细胞的独立生长能力失控,从而发展为肿瘤细胞[1,2],可作为卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌及消化道肿瘤预后的参考指标[3]。

HIV-1gag/IFNα-2b表达产物免疫小鼠的实验研究

为了将艾滋病病毒核心蛋白(gag)与干扰素(IFNα-2b)融合基因表达的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,观察小鼠的体液免疫和细胞免疫应答。将IFNα-2b基因片段插入到gag基因的nt531位点,经脂质体转染与血凝素阴性蚀斑筛选出重组痘苗病毒。经SDS-PAGE和Westexn blot鉴定表达产物。用重组病毒vJ38gag/IFNα-2b免疫小鼠,用ELISA方法检测血清IgG抗体含量,用流式细胞仪测定小鼠脾CD4^+、CD8^+T淋巴细胞计数。结果表明,血清IgG抗体含量逐渐增高,实验组与对照组比较差异有显著意义(P<0.05)。CD4^+、T淋巴细胞计数与对照组比较差异有显著意义(P<0.05)。结论:重组痘苗病毒vJ38gag/IFNct-2b能增强小鼠的体液免疫和诱导细胞免疫。

ICAM-1、C-erbB-2蛋白表达产物p185和喉癌相关性研究

目的研究喉癌组织中细胞间粘附因子-1(ICAM-1)、C-erbB-2基因的蛋白产物p185的表达情况及其在肿瘤发展过程中的作用。方法采用免疫组化方法检测ICAM-1、p185在喉癌(52例),喉息肉(10例)及正常人喉粘膜组织(10例)中的表达。结果ICAM-1、p185在喉癌中阳性表达率为69.2%,51.9%,其阳性表达率在有无淋巴结转移、复发、临床分期、5年生存率等方面差异有显著性(P<0.05)。结论ICAM-1、p185在喉癌中的表达与肿瘤的自然发展过程有关,同时可作为判断肿瘤恶性程度及预后的有效指标。