Eupatilin调控血管新生内膜形成的作用和分子机制研究

目的探讨Eupatilin调控血管新生内膜形成的作用和分子机制。方法选择10~12周龄TSC1c/c SM22Cre+/-小鼠,体内实验予以行左侧颈动脉结扎制备左侧颈动脉狭窄小鼠模型后分为2组,每组8只,Sestrin2激动剂组每日予以10 mg/kg Eupatilin灌胃,对照组每日予以Sestrin2激动剂组等容量生理盐水灌胃,共持续28 d。Van Gieson染色检测左颈动脉新生内膜形成。体外实验分离和培养TSC1c/c SM22Cre+/-小鼠源性主动脉血管平滑肌细胞(AVSMCs)。予以不同终浓度Eupatilin干预AVSMCs24 h后,CCK-8检测AVSMCs增殖。予以终浓度为0、100μmol/L Eupatilin干预AVSMCs 24 h后,划痕实验检测AVSMCs迁移能力,蛋白印迹法检测AVSMCs中Sestrin2以及TSC2、S6K1、4E-BP1等分子及其磷酸化水平的表达。结果动物体内实验研究显示:与对照组相比,Eupatilin干预后TSC1c/c SM22Cre+/-小鼠的左颈动脉管腔面积增加(P<0.05)、内膜面积和I/M比值减少(P<0.05)。体外细胞实验研究显示:Eupatilin呈剂量依赖性地抑制AVSMCs的增殖,以100μmol/L Eupatilin的抑制效率最高(P<0.05)。与对照组相比,100μmol/L Eupatilin组AVSMCs迁移距离缩短(P<0.05),AVSMCs中Sestrin2、TSC2磷酸化水平表达升高,p-S6K1表达降低(P<0.05),4E-BP1及其磷酸化水平表达无明显变化(P>0.05)。结论 Eupatilin是抑制血管新生内膜形成以及AVSMCs的增殖和迁移的有效药物,与激活Sestrin2密切相关。

Sestrin2在Eupatilin调控结直肠癌细胞株SW480增殖和凋亡中的作用研究

目的探讨Sestrin2(SESN2)在Eupatilin抑制结直肠癌细胞株SW480增殖中的作用。方法分别以短发夹RNA慢病毒稳定抑制SESN2表达载体(shSESN2)及其对照乱序非编码片段(shCon)感染SW480细胞以制备SW480shSESN2细胞和SW480^shCon细胞。以SW480^shCon和SW480shSESN2细胞为研究对象,CCK-8法检细胞增殖能力并计算Eupatilin对各细胞的半数抑制浓度(IC50)。以Eupatilin对SW480^shCon细胞的IC50浓度(37.93μmol/L)干预两组细胞48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹检测细胞Sestrin2、LC3、P62等蛋白的表达。结果与SW480^shCon细胞相比,SW480shSESN2细胞活力增高、Eupatilin对其的IC50增加。经Eupatilin干预48 h后,与SW480shSESN2细胞相比,SW480^shCon细胞凋亡增加,P62蛋白表达降低、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比例升高。结论Eupatilin可能通过激活Sestrin2以抑制结肠癌细胞株SW480增殖、促进其凋亡。

Eupatilin对黄嘌呤氧化酶活性抑制的实验研究

目的:通过体外酶学试验分析Eupatilin对黄嘌呤氧化酶活性的影响及抑制机理。方法:利用紫外分光光度计观测尿酸生成导致的吸光度变化值,测定波长为292 nm,并以黄嘌呤为底物根据测定结果绘制Lineweaver-Burk和Dixon图。结果:Eupatilin对黄嘌呤氧化酶表现很强的抑制作用,其Ki值为0.128 6μg/ml,抑制类型为混合型;而别嘌呤醇作为对照,其Ki值为0.62μg/ml,抑制类型为竞争性抑制。结论:Eupatilin具有明显的黄嘌呤氧化酶抑制活性。

异泽兰黄素改善蛛网膜下腔出血模型大鼠学习记忆能力的机制

背景:异泽兰黄素是一种源自青蒿属的黄酮类活性成分,可缓解蛛网膜下腔出血大鼠的炎症反应,改善神经学评分,但其在学习记忆方面的作用和机制仍不清楚。目的:探究异泽兰黄素对蛛网膜下腔出血模型大鼠学习记忆能力及P38有丝分裂素激活蛋白激酶(p38 MAPK)/信号传导和转录活化因子3(STAT3)通路蛋白的影响。方法:采用随机数字表法将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、异泽兰黄素组、橙皮素组、异泽兰黄素+橙皮素组,每组10只。除假手术组外,其余4组通过血管内穿孔构建蛛网膜下腔出血模型,造模成功2 h后,异泽兰黄素组尾静脉注射10 mg/kg异泽兰黄素,橙皮素组尾静脉注射50 mg/kg橙皮素(p38 MAPK/STAT3信号通路激活剂),异泽兰黄素+橙皮素组尾静脉注射10 mg/kg异泽兰黄素+50 mg/kg橙皮素,假手术组与模型组尾静脉注射10 mL/kg生理盐水。药物治疗24 h后,采用神经功能评分及Morris水迷宫实验检测大鼠神经功能及学习记忆能力,苏木精-伊红染色检测海马组织病理学变化,TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫荧光染色检测海马组织双皮质素阳性细胞数,Western blot检测海马组织p38 MAPK/STAT3蛋白表达。结果与结论:①与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分、学习记忆能力、双皮质素阳性细胞数均降低(P<0.05),神经细胞凋亡率及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-STAT3/STAT3蛋白表达均升高(P<0.05);②与模型组比较,异泽兰黄素组大鼠神经功能评分、学习记忆能力、双皮质素阳性细胞数均升高(P<0.05),神经细胞凋亡率及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-STAT3/STAT3蛋白表达均降低(P<0.05);橙皮素组大鼠神经功能评分、学习记忆能力、双皮质素阳性细胞数均降低(P<0.05),神经细胞凋亡率及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-STAT3/STAT3蛋白表达均升高(P<0.05);③与异泽兰黄素组比较,异泽兰黄素+橙皮素组大鼠神经功能评分、学习记忆能力、双皮质素阳性细胞数均降低(P<0.05),神经细胞凋亡率及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-STAT3/STAT3蛋白表达均升高(P<0.05);④苏木精-伊红染色显示,相较于模型组,异泽兰黄素组神经细胞排列较为整齐,橙皮素组神经细胞排列紊乱,异泽兰黄素+橙皮素组神经细胞排列与模型组相似;⑤结果表明,异泽兰黄素可能通过抑制p38 MAPK/STAT3信号通路改善蛛网膜下腔出血模型大鼠的学习记忆能力。

异泽兰黄素对脑出血小鼠的神经保护作用及氧化应激和神经元凋亡的影响

目的:探究异泽兰黄素对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)小鼠的神经保护作用及其机制。方法:采用自体血注射法复制小鼠ICH模型,同时设立假手术组。分别给予ICH小鼠1、3、10 mg/kg异泽兰黄素灌胃给药3 d。Longa评分法评估小鼠神经缺损情况。称重小鼠脑组织,测定含水量,免疫荧光染色观察脑组织神经元改变及应激诱导蛋白Sestrin2(Sestrin2)表达,ELISA测定脑组织丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,Western blot测定脑组织B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、AMP依赖性蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、肝醣合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)蛋白表达。结果:异泽兰黄素干预后,ICH小鼠第1天、第3天神经缺损症状减轻(P<0.05或P<0.01),具有时间-剂量效应;此外,ICH小鼠脑部水肿程度降低(P<0.05或P<0.01),脑组织神经元细胞凋亡减少、尼氏小体数量增加(P<0.05或P<0.01),Sestrin2荧光表达下降(P<0.01),MDA水平降低(P<0.01),SOD、CAT活性提高(P<0.01),Bax、caspase-3蛋白表达下降(P<0.05或P<0.01),Bcl-2、p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/-GSK-3β表达升高(P<0.05或P<0.01),具有剂量效应。结论:异泽兰黄素对ICH小鼠具有神经保护作用,抑制氧化应激和细胞凋亡是其部分作用机制。

异泽兰黄素对脑出血继发性脑损伤的神经保护作用及相关机制研究

目的 探讨异泽兰黄素(EP)对脑出血(ICH)继发性脑损伤的神经保护作用及相关机制。方法 体内动物实验:将无特定病原体雄性小鼠按随机数字表法分为假手术组(0.9%氯化钠溶液)、模型组(0.9%氯化钠溶液)、EP低剂量组(5 mg/kg EP)、EP中剂量组(10 mg/kg EP)、EP高剂量组(20 mg/kg EP),每组18只;除假手术组外,其余4组均采用Ⅳ型胶原酶诱导ICH法构建小鼠ICH模型。检测并比较5组小鼠给药7 d后改良神经功能缺失评分(m NSS)、水迷宫实验结果(逃避潜伏期、平台停留时间、穿越平台次数)、血脑屏障通透性、脑含水量、脑组织病理学改变、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]、细胞凋亡数、炎症因子指标[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)]以及凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶-3β(GSK-3β)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)]、水通道蛋白4(AQP4)蛋白表达水平。体外细胞实验:将培养后的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞分别设空白组、模型组、EP低剂量组(12.5μmol/L)、EP中剂量组(25μmol/L)、EP高剂量组(50μmol/L),每组设6复孔;除空白组不作任何处理外,其余4组均加入冈田酸构建ICH神经细胞损伤模型。检测并比较4组细胞存活率、细胞凋亡率以及凋亡相关蛋白表达水平。结果 体内动物实验结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠脑组织结构破坏明显,神经细胞坏死且大量炎性细胞浸润,m NSS评分、逃避潜伏期、血脑屏障通透性、脑含水量以及脑组织MDA、细胞凋亡数和Cleaved caspase-3、AQP4蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05),平台停留时间、穿越平台次数、体重以及脑组织SOD、CAT、Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K、p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/GSK-3β均明显降低(均P<0.05)。与模型组比较,EP低、中、高剂量组脑组织结构以及上述指标均得到明显改善(均P<0.05),且呈剂量依赖性(均P<0.05)。体外细胞实验结果显示,与空白组比较,模型组细胞存活率、Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K、p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/GSK-3β均明显降低(均P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,EP低、中、高剂量组上述指标均得到明显改善(均P<0.05),且呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论 EP能减轻小鼠ICH后神经细胞凋亡和炎症反应,进而保护神经功能,且呈剂量依赖性;其作用机制可能与EP激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路进而对ICH后神经细胞损伤起保护作用有关。

异泽兰黄素通过调控MAPK和NF-κB信号通路抑制RANKL诱导的破骨细胞分化

目的:探究异泽兰黄素(Eupatilin)对破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化的作用和分子机制。方法:CCK-8法检测不同浓度的Eupatilin对破骨细胞前体细胞RAW264.7以及小鼠骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)细胞活性的影响。用核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7和BMDMs分化形成破骨细胞,同时使用不同浓度的Eupatilin(5、10、20μmol/L)干预,通过TRAP染色和F-actin染色评价Eupatilin对RANKL诱导的破骨细胞形成作用,qRT-PCR和Western blot检测破骨细胞相关标志基因的表达,Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核因子-κB(NF-κB)信号通路分子的磷酸化水平。结果:20μmol/L Eupatilin对破骨细胞的分化具有显著的抑制作用,同时对相关标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphase,TRAP)、基质金属蛋白酶-9(matrix metallopeptidase-9,MMP-9)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)等的表达也表现出有效的下调作用。Western blot结果显示Eupatilin显著抑制了RANKL诱导的MAPK和NF-κB信号通路分子的磷酸化水平。结论:Eupatilin通过调控MAPK和NF-κB信号通路,对RANKL诱导的破骨细胞分化具有显著的抑制作用。

转录组与代谢组联合分析三蕊柳对柳蓝叶甲的抗虫机制

为研究三蕊柳抗柳蓝叶甲的机制及其中的原理,以垂柳、黄花柳、旱柳为代表的非抗虫组和以3个无性系的三蕊柳为代表的抗虫组4种不同且相关的柳树品种为试验对象,以差异代谢物儿茶素溶液、水杨酸溶液、没食子酰葡萄糖溶液、新橙皮苷溶液以及异泽兰黄素溶液浸泡处理的叶片饲喂柳蓝叶甲成虫及幼虫进行试验,探究三蕊柳抗柳蓝叶甲的机制。结果表明:(1)柳蓝叶甲在食用异泽兰黄素溶液处理的叶片后出现死亡:24 h后成虫存活率平均为83.33%,48 h后成虫存活率平均为40%;24 h后幼虫存活率平均为80%,48 h后幼虫存活率平均为35%。(2)其他溶液处理的叶片均未造成柳蓝叶甲死亡:24 h后及48 h后,成虫、幼虫的成活率均为100%。(3)结合转录组与代谢组分析结果筛选出来的5种差异代谢物溶液处理叶片饲喂柳蓝叶甲之后,只有异泽兰黄素溶液处理出现柳蓝叶甲死亡,异泽兰黄素可能是三蕊柳抗柳蓝叶甲的重要原因。综上所述,推测三蕊柳抗虫机制与次生代谢物——异泽兰黄素有关。

鼠曲草化学成分研究

目的研究鼠曲草的化学成分。方法鼠曲草的乙醇提取物依次经石油醚和乙酸乙酯萃取,再经硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法等进行分离纯化,并通过波谱技术及理化性质鉴定化合物结构。结果从鼠曲草中分离得到8个化合物,分别为β-谷甾醇(1),芦丁(2),槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3),异泽兰黄素(4),5-羟基-6,7,3',4'-四甲氧基黄酮(5),槲皮素(6),木犀草素(7)和芹菜素(8)。结论其中化合物5为首次从鼠曲草属植物中分离得到,化合物8为首次从该植物中分离得到。

应用高效液相色谱法测定中药奇蒿中异泽兰黄素和奇蒿黄酮的含量

目的采用高效液相色谱(HPLC)法测定中药奇蒿中异泽兰黄素和奇蒿黄酮的含量。方法奇蒿药材以10倍体积甲醇超声60min提取。色谱分离采用资生堂MG-C18色谱柱(3.0 mm×100 mm,3μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸(40∶60,V/V),等度洗脱,流速0.5ml/min,检测波长350nm,柱温25℃,进样量5μl。结果异泽兰黄素和奇蒿黄酮在15min内基线分离,线性良好。方法学验证表明,日内、日间精密度,重复性和稳定性的范围均符合相关标准。异泽兰黄素的低、中、高加样回收率分别为100.26%,99.58%和102.24%;奇蒿黄酮的低、中、高加样回收率分别为99.09%,101.12%和101.43%。结论该方法快捷简单,稳定可靠,可用于对奇蒿药材进行质量控制。

艾叶抑制血小板聚集有效成分的研究

从艾叶中分离到β-谷甾醇和5,7-二羟基-6,3′,4′-三甲氧基黄酮。它们对抑制血小板聚集有显著作用。

一测多评法测定鼠曲草中绿原酸、咖啡酸、异毛蕊花糖苷和异泽兰黄素的含量

目的建立鼠曲草中绿原酸、咖啡酸、异毛蕊花糖苷和异泽兰黄素一测多评的质量控制方法。方法以绿原酸为内参物,分别建立咖啡酸、异毛蕊花糖苷和异泽兰黄素的相对校正因子,并用该校正因子进行咖啡酸、异毛蕊花糖苷和异泽兰黄素的计算,实现一测多评;同时采用外标法测定鼠曲草中4种成分的含量,比较计算值与实测值之间的差异,验证所建立方法的准确性、可行性和重复性。结果在线性范围内,绿原酸与咖啡酸、异毛蕊花糖苷和异泽兰黄素的相对校正因子分别为1.144 5、0.460 8、0.971 9,在不同实验条件下相对校正因子重现性良好,6批鼠曲草中咖啡酸、异毛蕊花糖苷和异泽兰黄素的计算值与实测值无显著性差异。结论所建立的鼠曲草中绿原酸、咖啡酸、异毛蕊花糖苷和异泽兰黄素的一测多评法准确、可行,重复性好,可用于鼠曲草药材的质量控制。

艾叶饮片HPLC指纹图谱研究

目的:采用HPLC法建立艾叶饮片的指纹图谱,为艾叶饮片质量评价提供依据。方法:采用AgilentEclipse XDB-C18(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱;以乙腈(B)-0.2%磷酸(A)为流动相,进行梯度洗脱;采用DAD检测器检测,检测波长330nm,参比波长420nm。流速:1.0 mL/min;柱温:25℃。结果:建立了艾叶饮片HPLC指纹图谱,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求,采用该方法共检测了不同产地10批艾叶饮片,共标定12个共有特征指纹峰。结论:本法准确、可靠,建立的HPLC指纹图谱为艾叶的质量控制提供更全面的信息。

基于一测多评法对肠胃散中8种物质的质量控制

目的建立一测多评法同时测定肠胃散中棕矢车菊素、异泽兰黄素、柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、肉桂醇、肉桂酸和桂皮醛的含量。方法色谱柱:Waters Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱,流速:1.0 ml/min;检测波长分别为345 nm(检测棕矢车菊素和异泽兰黄素)、215 nm(柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱)和275 nm(肉桂醇、肉桂酸和桂皮醛)。以吴茱萸碱为内参物,分别建立其他7种成分的相对校正因子,并用相对校正因子计算含量,实现一测多评;同时与外标法测定结果进行对比,验证一测多评法的准确性和可行性。结果棕矢车菊素、异泽兰黄素、柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、肉桂醇、肉桂酸和桂皮醛分别在0.98~19.60、2.67~53.40、4.06~81.20、1.98~39.60、2.69~53.80、0.56~11.20、1.49~29.80和8.77~175.40μg/ml范围内线性关系良好(r≥0.9992),平均加样回收率(RSD)分别为98.77%(0.96%)、99.38%(1.01%)、100.02%(0.83%)、97.80%(1.40%)、98.91%(1.18%)、96.99%(1.13%)、98.09%(1.24%)和99.10%(0.67%),一测多评法计算结果与外标法实测值无明显差异。结论所建立的方法简便、准确,可用于肠胃散的质量评价。

抗幽门螺杆菌的泽兰有效成分筛选

目的筛选泽兰中抗幽门螺杆菌的有效成分。方法用水提法粗提泽兰,粗提物有效后在商品库购买泽兰单体成分,用琼脂稀释法和微量稀释法检测泽兰水提物和泽兰有效成分最小抑菌浓度(MIC)。结果泽兰水提物MIC为1 mg/ml,筛选出的泽兰主要有效成分为异泽兰黄素和泽兰黄酮,对敏感和耐药幽门螺杆菌MIC均为16~64μg/ml。结论泽兰对幽门螺杆菌具有很好的抑制作用,主要抗菌成分为异泽兰黄素和泽兰黄酮。

醋艾叶饮片HPLC指纹图谱研究暨异泽兰黄素和棕矢车菊素含量测定

目的采用高效液相色谱法建立醋艾叶的指纹图谱,同时测定不同产地醋艾叶中异泽兰黄素和棕矢车菊素的含量,为醋艾叶质量评价提供依据。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以乙腈(B)-0.2%甲酸(A)为流动相,进行梯度洗脱;检测波长330 nm;流速:1.0 mL.min-1;柱温:25℃。结果建立了醋艾叶HPLC指纹图谱,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求,采用该方法共检测了10批醋艾叶,共标定14个共有特征指纹峰;不同产地艾叶异泽兰黄素和棕矢车菊素含量存在差异。结论本法准确、可靠,建立的高效液相色谱指纹图谱为醋艾叶的质量控制提供更全面的信息。

异泽兰黄素对肾癌786—O细胞增殖的抑制作用及分子机制

目的 探讨异泽兰黄素对肾癌786-O细胞增殖的影响及分子机制.方法 应用MTT法检测不同浓度（2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L）异泽兰黄素对肾癌786-O细胞活力的影响,流式细胞仪检测异泽兰黄素对肾癌786-O细胞凋亡的影响,Transwell检测异泽兰黄素对肾癌786-O细胞侵袭的影响,荧光定量PCR检测异泽兰黄素对肾癌786-O细胞miR-21表达的影响.转染病毒构建miR-21稳定表达细胞株,MTT、流式细胞仪和Transwell分别检测miR-21和异泽兰黄素对肾癌786-O细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,Western blot法检测miR-21和异泽兰黄素对细胞内p-AKT、AKT、Bax和Bcl2蛋白表达的影响.结果 2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L异泽兰黄素作用肾癌786-O细胞,细胞活力显著降低,且呈现浓度依赖性.与正常对照组相比,异泽兰黄素作用细胞24 h能显著促进细胞凋亡（P＜0.01）,抑制细胞侵袭（P＜0.01）,抑制miR-21的表达（P＜0.01）,且作用均具有浓度依赖性;Western blot结果显示,异泽兰黄素抑制AKT磷酸化水平和Bcl2蛋白表达,促进Bax蛋白表达,与正常对照组相比意义具有显著统计学差异.过表达miR-21能显著抑制异泽兰黄素诱导的细胞凋亡和侵袭,并抑制异泽兰黄素调控的p-AKT、Bax和Bcl2的表达.结论 异泽兰黄素可抑制肾癌786-O细胞miR-21的表达,通过激活AKT通路诱导细胞凋亡.

异泽兰黄素通过降低活性氧效应拮抗新霉素诱发的听觉毛细胞损伤的实验研究

异泽兰黄素是一个已在临床应用的新型抗氧化剂,具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等多种作用。本研究首次报道异泽兰黄素具有拮抗新霉素耳毒性,保护听觉毛细胞的作用。本研究的体外实验结果显示异泽兰黄素显著降低新霉素对HEI-OC1细胞的毒性作用,保护HEI-OC1细胞。通过活性氧探针检测本研究发现异泽兰黄素显著降低新霉素诱发的HEI-OC1细胞活性氧。此外,本研究通过线粒体荧光标记检测发现异泽兰黄素显著抑制新霉素对HEI-OC1细胞线粒体的损伤。最后,本研究利用斑马鱼耳毒性模型发现异泽兰黄素明显抑制新霉素对斑马鱼侧线神经丘毛细胞的损伤作用。结合体内和体外实验结果,本研究证实异泽兰黄素通过降低活性氧而拮抗新霉素对听觉毛细胞的损伤,发挥对听觉毛细胞的保护作用。因此,异泽兰黄素可能是一种有临床价值的防治药物性耳聋的听力保护药物。

异泽兰黄素通过抑制miR-188-5p的表达抑制视网膜母细胞瘤的侵袭并诱导凋亡

目的研究异泽兰黄素对miR-188-5p过表达的调节及对视网膜母细胞瘤(Rb)的增殖、侵袭和凋亡的影响。方法选择Rb系中Y79细胞进行研究。不同浓度异泽兰黄素(1、2.5、5、10、20、40、100、200、300μmol/L)处理Y79细胞并采用MTT法检测其细胞活性;Control组、异泽兰黄素(低、中、高剂量)组Y79细胞分别用终浓度含有异泽兰黄素0、10、20、40μmol/L培养基培养并检测异泽兰黄素对Y79细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。建立Control组、mimic-NC组、miR-188-5p mimic转染组,建立好转染模型后并用浓度为40μmol/L异泽兰黄素处理各组细胞,检测异泽兰黄素对miR-188-5p表达量的影响及对Y79细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。采用RT-qPCR检测miR-188-5p的表达量;采用克隆形成试验、流式细胞术和Transwell试验检测细胞增殖、凋亡及侵袭力;采用Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Bax和Bcl-2蛋白的表达量。结果miR-188-5p过表达促进Rb Y79细胞增殖,减轻细胞凋亡,促进细胞侵袭。而异泽兰黄素能抑制miR-188-5p过表达,从而抑制Rb Y79细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。结论异泽兰黄素通过抑制miR-188-5p的表达抑制Rb细胞侵袭,并诱导细胞凋亡。

异泽兰黄素通过改善腹侧海马GABAa受体传递缓解大鼠酒精戒断焦虑样行为

目的:研究异泽兰黄素(Eupatilin,Eptl)对大鼠酒精戒断(Ethanol withdrawal,EtOHWI)焦虑样行为的改善作用及其与腹侧海马(Ventral hippocampus,vHippo)相关机制。方法:将32只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组,分别为生理盐水对照组、EtOHWI模型组、Eptl低剂量治疗组和Eptl高剂量治疗组,每组各8只。EtOHWI模型组、Eptl低、高剂量治疗组每天1次腹腔注射3 g/kg乙醇(Ethanol,EtOH),连续28 d,戒断3 d制备大鼠EtOHWI模型,生理盐水对照组腹腔注射等容积生理盐水。在3 d戒断期间,Eptl低、高剂量治疗组分别每天1次灌胃10和30 mg/kg Eptl,第3次给药30 min后,利用旷场(Open filed,OF)和高架十字迷宫(Elevatedplusmaze,EPM)实验对各组大鼠进行焦虑样行为学检测。利用ELISA检测血清皮质酮(Coritosterone,CORT)浓度、vHippo组织中GABA水平;利用实时荧光定量PCR检测vHippo组织中谷氨酸脱羧酶67(GAD 67)mRNA相对表达量;利用Western blot(WB)检测vHippo组织中GABAaRα1(GABAa receptorα1,GABAaRα1)、GABAaRα2、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达;利用试剂盒检测vHippo组织中MDA、T-SOD、CAT、GSH以及IL-6和TNF-α的含量。利用免疫荧光检测技术观察HT22细胞的核中Nrf2蛋白水平。结果:与EtOHWI模型组相比,Eptl低、高剂量治疗组大鼠在OF中央区活动距离极显著升高(P<0.01),分别为70.62%和124.21%,活动时间显著升高(P<0.05或P<0.01),分别为251.75%和371.62%,EPM的开放臂进入次数百分比显著升高(P<0.05或P<0.01),分别为110.33%和207.32%,滞留时间百分比显著升高(P<0.05或P<0.01),分别为99.56%和184.18%;血清CORT含量极显著降低(P<0.01);vHippo组织中GABA含量和GAD67mRNA表达显著升高(P<0.05或P<0.01);GABAaRα1、GABAaRα2、Nrf2和HO-1蛋白表达显著增多(P<0.05或P<0.01);MDA水平极显著降低(P<0.01),而T-SOD、CAT和GSH的活性或水平显著升高(P<0.05或P<0.01);IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.05或P<0.01)。体外实验结果显示,与空白对照组相比,200μmol/L H2O2刺激的HT22细胞核中Nrf2的水平极显著增多(P<0.01),但30μmol/L Eptl预处理显著抑制了Nrf2水平的增多(P<0.05)。结论:Eptl具有改善大鼠EtOHWI焦虑样行为的作用,其机制可能通过Eptl的抗氧化和抗炎作用而调节EtOHWI大鼠vHippo的GABAaR传递紊乱所介导。