EV-71型疫苗接种前后济宁市手足口病发病和病原学变化研究

目的了解济宁市2012—2021年肠道病毒71型(EV-71型)疫苗接种前后济宁市手足口病发病和病原学变化情况。方法采用描述性流行病学方法对济宁市手足口病发病和病原学情况进行分析,比较EV-71型疫苗接种前后手足口病发病和病原学变化。结果2012—2021年济宁市6月龄~5岁儿童中,手足口病发病率为658.93/10万,其中,2018年发病率最高(1094.63/10万),2021年发病率最低(247.23/10万)。实验室诊断病例中,EV-71型占27.89%,柯萨奇病毒A16型(CV-A16)占34.59%,非EV-71非CV-A16型占37.52%。6月龄~5岁儿童中,EV-71型估算发病率为131.04/10万,2017年估算发病率最高(322.13/10万),2021年最低(7.71/10万)。重症病例以EV-71型为主,占76.25%。2016—2021年济宁市EV-71疫苗平均估算接种率为7.98%。EV-71型疫苗接种后手足口病EV-71型占比低于接种前,下降4.80%。优势毒株为EV-71型的年份是2013年和2017年,2018年起EV-71型占比开始降低,2021年最低(5.16%)。结论济宁市EV-71型疫苗接种率比较低。接种EV-71型疫苗后,EV-71型估算发病率虽在2017年达到高峰,但之后呈下降趋势,毒株以CV-A16型和非EV-71非CV-A16型居多,应进一步开展非EV-71非CV-A16分型,研发多价手足口病疫苗。

EV-71感染手足口病患儿血神经元特异性烯醇化酶水平变化及其临床意义

目的观察EV-71感染对手足口病患儿血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平的影响,探讨其感染与神经系统损伤的相关性,为潜在神经系统损伤的早期干预及治疗提供理论依据。方法随机收集2011年4月至2012年11月间在本院儿内科治疗的100例手足口病患儿的临床资料,依据血清EV-71抗体检测结果分为阳性组43例和阴性组57例;同时选择在本院保健科进行体检的健康儿童80例作为对照组。应用电化学发光法进行血清NSE含量测定。对手足口病组和对照组、EV-71阳性组和阴性组血清NSE值进行对比分析。结果手足口病组和对照组比较,血清NSE水平偏高,差异有显著统计学意义(P<0.01);EV-71阳性组和阴性组患儿比较,血清NSE水平明显高于阴性组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论手足口病患儿血清NSE水平较正常儿童有明显偏高,EV-71阳性患儿最为明显,提示手足口病患儿较正常儿童易并发神经系统损伤,EV-71感染的手足口病患儿神经系统损伤相对更为严重。

发热与手足口病(EV-71)合并病毒性脑炎相关性研究

目的:研究发热与手足口病(EV-71)合并病毒性脑炎相关性,为临床早期诊断重型手足口病提供指导。方法:回顾研究某院手足口病住院病人1097人,合并病毒性脑炎425例,符合入选条件374例,分析发热与病毒性脑炎相关性。结果:手足口病(EV-71)发热超过39℃2天以上和/或发热38.5℃超过3天以上,大多并发病毒性脑炎,对临床早期判断重型手足口病有指导意义,重型手足口病早期应用静注免疫球蛋白预后好。

蛴螬提取物体外抗肠道EV-71病毒的研究

目的:对蛴螬用不同极性的溶剂提取并研究其提取物对肠道EV-71病毒的抑毒效果,对其有效部位进一步分离。方法:分别用蒸馏水、75%乙醇、乙酸乙酯提取蛴螬,对其水提醇沉和醇提水沉的上清液和沉淀分别进行对肠道EV-71病毒的抑毒实验,根据实验结果对水提醇沉的沉淀部位通过大孔树脂吸附的方法进一步分离。结果:蛴螬水提醇沉的沉淀物对肠道EV-71病毒有明显的抑制作用,其TI=94.15;对其用大孔树脂吸附的方法分离后水1部位抗病毒效果最为明显,TI=118.93。结论:蛴螬的水提醇沉的沉淀部位具有良好的抗肠道EV-71病毒效果。

EV-71病毒感染手足口病与空腹血糖的相关性分析

目的:探讨EV-71病毒感染手足口病与患儿空腹血糖的变化及空腹血糖在预测病情轻重的价值。方法:观察60例患儿空腹血糖的变化及病情轻重,其中EV-71病毒感染手足口病30例,非EV-71病毒感染手足口病30例。结果:30例EV-71病毒感染手足口病患儿血糖均值为(7.80±2.12)mmol/L,有16例为重症手足口病,重症比例为53.3%。30例非EV-71病毒感染手足口病患儿血糖均值为(5.06±2.05)mmol/L,有4例为重症手足口病,重症比例为13.3%。EV-71病毒感染手足口病与非EV-71病毒感染手足口病患儿比较,血糖水平明显升高,差异有统计学意义(P1<0.05);重症比例明显升高,差异有统计学意义(P2<0.05)。结论:EV-71病毒感染手足口病与空腹血糖存在相关性,可以早期发现EV-71病毒感染,更好早期识别重症手足口病,赢得宝贵的抢救时间,降低手足口病死亡率。

EV-71感染危重型手足口病危险因素分析

目的探讨EV-71感染的普通型手足口病(HFMD)进展为危重型的影响因素,建立危重型HFMD的早期预警模型。方法选择2016年杭州市某儿童医院收治的65例确诊为EV-71感染的手足口病患儿为研究对象,其中普通型30例,危重型35例。比较两组患儿的一般情况、现病史和实验室检查指标,采用单因素分析筛选风险因素,Logistic回归分析独立危险因素。建立早期预警模型,并采用受试者工作曲线(ROC)评价。结果EV-71感染的普通型HFMD与危重病例在口腔疱疹、发热天数、最高体温、高热天数、发病至初诊时间、发病至入院时间、血糖、血清IgG水平存在明显差异(P<0.05),Logistic模型显示血糖、最高体温、高热天数、发病至初诊时间和口腔疱疹是危重型手足口病的独立危险因素(P<0.05)。预测模型ROC曲线下面积(AUC)为0.915,模型的敏感度为89.2%,特异度为90.5%,总体准确率为89.7%。结论密切观察EV-71感染的普通型HFMD患儿的血糖、最高体温、高热天数、发病至初诊时间和口腔疱疹,能够对危重症倾向进行早期预警。

检测EV71和EV-U的TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR的建立

目的建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。方法利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法,同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U),用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线,对病毒进行准确定量,同时对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。结果用TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR法检测CoxA16、CoxB2、EV71病毒和其他人类病毒RNA,证实其特异性为100%;对EV71和EV-U的检测灵敏度均达到102拷贝/μl;将EV71和EV-U的RNA标准品进行重复性实验,其批内、批间变异系数分别为0.97%～2.02%和0.89%～2.13%。结论本方法灵敏度较高,特异性强,重复性好,适用于手足口病的临床检测。

病毒性脑炎患者肠道病毒71型的分离与鉴定

目的:探讨肠道病毒71型在病毒性脑炎的病原学地位,进而建立快速诊断肠道病毒71型感染的实验室方法。方法:采用病毒分离和半巢式RT-PCR法对88例病毒性脑炎患者的脑脊液进行EV-71检测。结果:88例患者中EV-71病毒分离阳性8例。以病毒核酸为模板进行半巢式RT-PCR反应,结果扩增片断长度为226个碱基对的片段。阳性标本结果与同样条件下来自EV-71病毒BrCr株的分离结果相同。结论:通过病毒分离和半巢式RT-PCR的比较表明,半巢式RT-PCR技术与传统的组织培养法相比,快速、敏感性高且具有相同的特异性。

EV71型手足口病并发脑炎重症病例临床分析

目的研究肠道病毒71型(EV71)导致的手足口病并发脑炎重症病例的临床和实验室特点,以提高临床诊治水平。方法对笔者医院2011年5月～2012年1月收治的164例咽拭子EV71核酸检测阳性的手足口病并发脑炎重症患儿临床资料进行回顾性分析,将其分为重型组和危重型组,包括临床特征、实验室检查和治疗、转归情况。结果 164例患儿均有发热和皮疹。与重型组比较,危重型组中肌无力、抽搐、躁动症状的发生率较高,WBC、心肌受损相关指标(CK、CKMB、LDH、HBDH)、血糖及PCO2水平也明显升高。治疗上应积极采用甘露醇降颅内压(93.3%),酌情联合糖皮质激素(63.4%)及丙种球蛋白(15.9%)治疗,此外笔者医院重症病例通常加用鼠神经生长因子(72.6%)营养神经,匹多莫德(71.3%)提高免疫力。164例重症患儿中治愈好转158例,因病情危重自动出院1例,死亡5例。结论 EV71型HFMD并发脑炎重症患儿病情凶险,病死率高,需早期诊断、早期干预及细心护理,以提高治愈率,降低病死率。

肠道病毒71型分子生物学研究

就有关EV71病毒生物学特征、病毒的复制、诊断技术、EV型别鉴定及分子流行病学等方面作一综述。

肠道病毒71型VP1酶标抗原的制备及应用

为了建立用于肠道病毒71型(EV71)感染早期诊断的检测方法,将重组质粒pET-32a(+)-VP1转入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,对表达产物进行镍柱亲和层析纯化和复性,并对复性的VP1蛋白进行辣根过氧化物酶标记,作为酶标抗原建立捕获ELISA检测方法。结果表明,该方法μ链抗体包被浓度为1∶3 000,酶标抗原工作浓度为1∶20 000,且酶标抗原稳定性良好;检测临床血清样品阳性符合率为96.1%(49/51),阴性符合率为100%(65/65)。

31例确诊EV71感染所致重型手足口病诊治体会

目的:探讨肠道病毒71型(EV71)感染所致重型手足口病的临床特点和治疗方法。方法:采用描述性流行病学方法对31例确诊EV71感染所致重型手足口病患儿的临床资料进行回顾性分析。结果:男19例,女12例,年龄1岁～6岁8个月,患儿主要表现为持续高热、精神差、易惊、肢体抖动、呕吐;外周血WBC升高为主(67.8%);采用以糖皮质激素加静脉丙种球蛋白为主的综合治疗,31例患儿均治愈。结论:早期识别重型手足口病,采用以激素加丙球为主的综合治疗,能够取得满意的疗效。

2011年我院1287例手足口病中71型肠道病毒调查

目的：分析我县2011年EV71型病毒引起的手足口病（hand-foot—mouthdisease，HFMD）发病特征，并相应的做好防御工作和诊断治疗。方法：综合采用描述性方法收集我院2011年1月～12月的1287例HFMD患者的血液，采用胶体金法快速检测EV71-IgM抗体，结果为阳性的及时采集患者咽试子采用实时荧光PCR方法检测肠道病毒EV71型病原体。结果：2011年我县EV71型病毒引起的HFMD发病率为42．7％（550／1287），6月份为高发期，占23．3％（301／1287），患者主要分布在0～4岁，占88．9％（1145／1287），男性738例，女性519例。男女比例为1．48：1，男性多于女性，无死亡病例。夏秋季为发病高峰，应进一步加强手足口病的监测报告工作，广泛开展健康教育，加大重点人群的防控力度。

人源抗EV71病毒中和表位SP70的Fab抗体研制

目的构建人源抗EV71病毒Fab噬菌体抗体库,筛选具有中和活性的人源单克隆抗体,为EV71感染引起的手足口病临床诊断及治疗奠定基础。方法从成人志愿者抗凝血中分离外周淋巴细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA。以cDNA为模板,用人源IgG Fab段基因引物扩增轻链及重链Fd区基因,分步克隆至pComb3载体,构建Fab噬菌体抗体库。以SP70为抗原对Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,将获得的重组噬菌体感染XL1-Blue菌并诱导表达,用SP70对诱导表达的菌上清进行筛选。结果共获得3株轻、重链基因组合序列不同的克隆,且这3株Fab抗体可特异性结合SP70多肽。结论成功构建人源抗EV71病毒Fab噬菌体抗体库,并从中筛选出3株针对EV71病毒结构蛋白VP1上中和线性表位SP70的特异性人源Fab抗体,为研发新的手足口病诊断和治疗工具奠定基础。

小儿重症EV71型手足口病流行现状、病情特点及危险因素分析

目的小儿重症人肠道病毒71型(EV71)型手足口病(HFMD)流行现状、病情特点及危险因素分析。方法选择2017年2月-2019年2月本院收治的重症EV71型HFMD患儿103例作为研究对象,统计所有患儿的性别、年龄、症状、体征、实验室检查指标等临床资料,同时统计继发感染部位、病原菌类型等资料,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定患儿合并病毒感染种类,并多因素logistics回归分析重症EV71型HFMD发病的危险因素。结果EV71型HFMD患儿以EV71单一感染为主,所占比为53.40%,可合并CA16和EV混合感染;继发细菌感染以革兰阴性菌感染为主,所占比73.17%,其中以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为主,所占比分别为24.39%和18.29%,继发细菌感染分布部位以下呼吸道为主,所占比分别为27.49%;发病时间主要集中在6~8月夏季,所占比为49.51%;发病年龄主要集中在0~3岁,所占比为66.02%;患儿临床表现以发热、皮疹、神经系统症状、呼吸系统症状、循环系统症状、颅脑MRI异常等为主,同时男童、年龄<3岁、住宿环境卫生差、个人卫生习惯差及疾病知识掌握度差等是均是发病危险因素(P<0.05)。结论重症HFMD患儿多以EV71单一及其混合病毒感染所致,且好发于夏季,患儿以高热、皮疹、中枢神经系统损害、呼吸循环系统损害主要临床表现,并可继发下呼吸道等部位细菌感染,以革兰阴性菌为主,同时年龄<3岁男童、住宿环境和卫生习惯差等因素均可增加其发病风险。

肠道病毒A组71型在人脐静脉血管内皮细胞中的增殖及对细胞骨架的影响

目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测EV-A71在HUVECs中的复制和增殖,用免疫荧光双染色技术观察三种细胞骨架在EV-A71感染后的变化。结果 EV-A71能够有效感染HUVECs,且感染后24 h在细胞内复制达到高峰。病毒感染后微丝骨架完全解聚,微管骨架排列方式发生改变,而中间纤维结构模糊不清;同时检测到微管及中间纤维与病毒抗原共存。结论 EV-A71可以感染HUVECs并在其内有效复制增殖,同时诱导HUVECs三种细胞骨架发生改变,提示细胞骨架可能参与EV-A71感染HUVECs的过程。

2010-2017年天津市滨海新区健康人群人肠道病毒71型血清中和抗体动态变化研究

目的:了解天津市滨海新区健康人群人肠道病毒71型(EV-A71)中和抗体动态变化,为手足口病防控方案提供依据。方法:采集2010-2017年天津市滨海新区健康人的血清学标本368份,进行EV-A71中和抗体测定,并对监测结果进行统计学分析。结果:EV-A71中和抗体阳性率为79.35%;不同年份间的抗体阳性率差异有统计学意义(χ^2=6.695,P=0.01),呈周期性变化;不同年龄组人群的抗体阳性率差异有统计学意义(χ^2=46.531,P<0.01),5岁及以下年龄组抗体阳性率最低为59.26%;5岁以下各年龄组抗体阳性率无统计学差异(χ^2=1.481,P=0.830);不同性别间抗体阳性率差异无统计学意义(χ^2=3.480,P=0.062);以健康人群EV-A71中和抗体阳性率作为应变量,对健康人群的卫生习惯及环境进行Logistic回归分析,发现与没去过医院的相比,半年内去过医院患病风险更大(OR=2.291,95%CI:1.488~4.946)。结论:天津市滨海新区人群EV-A71中和抗体水平较高,易感人群为5岁及以下年龄组儿童,继续加强和完善EV-A71流行监测系统是防控手足口病的重要环节。

小儿手足口病146例临床分析

目的观察分析小儿手足口病的流行特征、临床特点、病情轻重及合并症情况,治疗效果及预后。方法回顾性分析我院2014年1月至2015年12月住院收治146例手足口病患儿的发病年龄、性别、人群分布、时间分布、临床表现、实验室检查、并发症、分期、治疗及转归等临床资料。结果手足口病发病年龄为3岁以下为主,男性高于女性,农村儿童明显高于城市儿童;以夏秋季发病明显;患儿均有疱疹;大部分患儿有发热,重症患儿为持续高热;心肌酶谱异常可见;以轻症病例为主;治愈率高。结论手足口病具有典型皮疹及传染特性,早期诊断及治疗可以达到治愈效果。惊跳是重症手足口病例早期识别的主要临床表现。重症病例,特别是EV-71病毒感染导致的重症手足口病,应保持高度警觉,密切观察病情,及时处理。

濮阳市2008—2012年手足口病流行病学特征分析

目的了解濮阳市手足口病流行病学特征,为制定防控策略提供科学依据。方法通过国家疾病监测信息管理系统收集的全市2008—2012年6月6日手足口病疫情资料进行描述和分析,并对部分病例和重症病例标本进行肠道病毒病原学检测。结果全市共报手足口病16 492例,发病高峰是每年的3-5月(第12～20周),呈典型的单峰型曲线;发病年龄以0～4岁居多;男性多于女性;散居儿童多于托幼机构儿童,爆发病例多发生在托幼机构,手足口病病原有EV71、CoxA16和其他肠道病毒,以EV71和CoxA16为主。结论手足口病发病有明显的季节性、年龄和性别差异,小年龄组儿童是手足口病预防控制重点人群,流行年度和流行季节的优势毒株为EV71,重症患者中EV71占到86.35%;非流行年和季节手足病例主要由CoxA16和其他肠道病毒引起。手足口病防控重点应体现在对病例分类管理上,同时应继续加强重症病例疫情监测和爆发控制。

蒲公英水提液抗病毒有效部位筛选及体外抗病毒作用观察

目的筛选蒲公英水提液抗病毒有效部位,并探讨其体外抗病毒机制。方法通过蒸馏水回流提取法制备蒲公英水提液(样品A),采用水提醇沉法得到上清液部位(样品B)和沉淀部位(样品C),进一步将样品C通过大孔吸附树脂吸附、洗脱液洗脱,得到多个洗脱部位的纯化样品(水X部位、25%乙醇X部位、50%乙醇X部位、75%乙醇X部位,X为洗脱次序)。采用呼吸道合胞病毒(RSV)-MA104、单纯疱疹病毒(HSV)-MA104、肠道EV-71型病毒(EV-71)-MA104细胞感染模型及样品A筛选出EV-71病毒进行蒲公英样品抗病毒有效部位的筛选。样品B、C分别进行体外抗EV-71病毒实验,筛选出最有效部位后,并将其作为研究样本进一步探究蒲公英体外抗EV-71病毒的作用。结果样品C经50%乙醇醇沉后,沉淀部位溶解,经D101型大孔吸附树脂吸附,水1洗脱部位的TI值为73.52。抗病毒作用实验中的预防作用组TI值为24.25,阻断作用组的TI值为5.28。两组比较,P<0.05。结论蒲公英水提液抗EV-71病毒最有效部位为样品C经50%乙醇醇沉后的水1洗脱部位。蒲公英体外抗EV-71病毒的作用主要为预防作用。