2016年上海市普陀区手足口病病原谱及EV71和Cox A16病毒分离株VP1基因特征分析

目的了解上海市普陀区手足口病病原学特点,分析肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16) VP1基因的特征,为手足口病的防治提供科学依据。方法收集2016年上海市普陀区手足口病患者的咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)进行核酸检测,并用RD细胞对核酸检测结果为EV71和Cox A16的标本进行病毒分离,收获的阳性分离株利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增病毒VP1区核苷酸序列,测序后分析其同源性并构建系统进化树。结果 2016年上海市普陀区共检测234份手足口病标本,阳性标本138份,阳性率为58.97%(138/234)。其中EV71阳性率为11.54%(27/234)、Cox A16阳性率为18.80%(44/234)、Cox A6阳性率为27.78%(65/234)和其他肠道病毒阳性率0.85%(2/234)。病毒分离培养阳性株包括10株EV71和20株Cox A16,10株EV71分离株均为C4a型,VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.6%～99.9%和98.7%～100.0%;20株Cox A16分离株均为B1b亚型,VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.4%～100.0%和98.2%～100.0%。结论 2016年上海市普陀区手足口病呈现Cox A6、EV71和Cox A16共同流行,而EV71流行株属于C4a亚型,Cox A16流行株属于B1b亚型,均与国内大部分地方的流行株基因亚型基本一致。

红景天甲醇冷浸提取物的体外抗病毒谱及抗病毒机制的研究

目的:为建立红景天抗病毒谱-效相关评价系统,对红景天抗病毒机制进行初步探究,通过对红景天甲醇冷浸提取物体外抗病毒活性进行筛选,最后选择红景天甲醇冷浸提取物抗柯萨奇病毒B型(COX-B5)活性进行研究病毒机制的初步研究。方法:采用体外抗病毒实验CPE法结合MTT染色法,以半数治疗浓度(EC50)和半数细胞毒性浓度(TC50)并以治疗指数TI值作为评价指标,观察红景天甲醇冷浸提取物对手足口病病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒B型(COX-B5)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。结果:中药材红景天对于四种病毒感染都有一定程度的抑制效果,其中以肠道病毒的抑制效果最好,红景天甲醇提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)的治疗指数为26.35,对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的治疗指数为14.03,对柯萨奇病毒B型(COX-B5)的治疗指数为33.82,对手足口病病毒71型(EV71)的治疗指数为27.28。在此基础上,选取红景天甲醇冷浸提取物抗柯萨奇病毒B型(COX-B5)活性做进一步的抗病毒机制研究,结果发现,红景天甲醇冷浸提取物在预防性治疗中,其治疗指数TI值为11.31,在抑制病毒穿入感染中,其治疗指数为19.29,在药物病毒直接作用的灭杀组中,药物的治疗指数为35.26。结论:中药材红景天对于肠道病毒的抑制有明显的效果,但其作用机制较复杂,并非针对病毒吸附感染复制的某一单一环节,作用机制有待进一步研究,红景天作为低毒高效的传统中药材,在抗病毒领域有很大潜力,有待进一步研究开发。

RT-PCR和FQ-PCR法在亳州地区手足口病检测中的应用

目的比较RT-PCR和FQ-PCR法在手足口病(HFMD)病原学检测中的差异,并探讨亳州地区EV71和CoxA16的流行特征。方法采集亳州地区2011年193例疑似HFMD患者不同种类的标本共252份。对其中的124份咽拭子样品,同时采用RT-PCR和FQ-PCR法进行EV71和Cox A16检测,并比较两种方法检测结果的差异。运用FQ-PCR法对所有标本进行检测,比较不同类型标本间结果的差异,并分析不同感染类型的阳性率。用FQ-PCR法检测咽拭子标本188份,分析不同类型HFMD感染者的季度分布。结果用FQ-PCR及RT-PCR法检测124份疑似HFMD患者的咽拭子标本,EV71的阳性率分别为68.55%(85/124)和63.71%(79/124),Cox A16的阳性率分别为46.77%(58/124)和41.94%(52/124)。两种方法检测结果间的差异均有统计学意义(χ2分别为95.385、101.908,P均<0.01)。用FQ-PCR法共检测252份标本,其中咽拭子、粪便、疱疹液和脑脊液的阳性率分别为75.00%(106/188)、81.13%(43/53)、6/7和1/4,不同类型标本之间阳性率的差异无统计学意义(χ2=6.888,P>0.05)。EV71单独感染、Cox A16单独感染及联合感染率分别为42.06%、9.92%和23.81%,其差异有统计学意义(χ2=63.369,P<0.05)。EV71单独感染季度间差异无统计学意义(χ2=6.561,P>0.05),而Cox A16单独感染及联合感染的季度间差异均有统计学意义(Cox A16单独感染:χ2=8.061,P<0.05;联合感染:χ2=24.898,P<0.01)。结论 FQ-PCR比RT-PCR法更适用于HFMD病原学检测,并且不受标本种类限制。EV71单独感染率最高,常年流行;联合感染次之,以夏秋季为主;Cox A16单独感染较少见,以秋冬季较多。

民族药地板藤不同萃取部位体外抗病毒实验研究

目的:研究民族药地板藤的体外抗病毒活性及有效部位。方法:采用细胞体外抗病毒实验结合细胞病变(CPE)法及MTT法,以病毒半数感染量(TCID50)及治疗指数(TI值)作为研究指标,以利巴韦林、阿昔洛韦为阳性对照,研究民族药地板藤及其不同萃取部位对呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒(HSV-1)、柯萨奇病毒(COX-B5)、肠道病毒71型(EV71)的抑制作用。结果:地板藤醇提物及不同萃取部位对EV71及HSV-1均显示出较好作用效果,其中水部位对HSV-1的TI值为23.38,接近于阳性对照组,其他萃取部位的TI值也较高,但对RSV及COX-B5只有水部位效果较好,TI值分别为9.41、11.09,其他萃取部位效果不明显。结论:地板藤提取物具有体外抗EV71、HSV-1的活性。

惠州市儿童手足口病的流行特征及病原学分析

目的了解惠州市手足口病流行期间（2009—2010年4—10月）的病原学特征及流行病学规律，为科学制定手足口病防控策略提供依据。方法2009—2010年手足口病流行期间共收集578份疑似手足口病标本，用荧光定量RT—PCR法进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）定量分型。结果578例被检测患儿中406例为肠道病毒阳性，阳性率为70．24％；EV71阳性208份，检出率为35．99％；CoxA16阳性145份，检出率为25．09％；手足口病2009年以CoxA16流行为主，2010年以EV71流行为主。手足口病重症病例EV71阳性率为81．55％。手足口病发病以幼儿为主，主要集中在4岁以下儿童，占83．91％。结论手足口病在不同时期的肠道病毒感染往往呈现不同的流行特点，年龄小于3岁的EV71阳性手足口病患儿已成为重症病例的危险因子。及时、持续地开展手足口病病原学调查，预测其流行规律，有助于更好的制定其防控措施。

2009-2014年云南省玉溪市手足口病流行病学研究

[目的]对2009-2014年玉溪市手足口病例流行病学和病原学分析,为手足病防控提供科学依据。[方法]对2009-2014年《中国疾病预防控制疾病监测信息报告管理系统》等手足口病监测数据进行描述性流行病学研究。[结果]2009-2014年玉溪市手足口病流行呈现周期性趋势,高发区域呈片状分布,各县/区中心城区高发,郊区及城区结合部报告病例较少。患者全年发病,高峰主要集中在4-7月份和11月至次年1月,呈双峰型分布;发病年龄以5岁及以下儿童为主;发生了5次优势病原体的更替,在普通病例中EV71型和Cox Al6型手足口病所占比例分别为43.01%和41.71%,但EV71型手足口病在死亡病例及重症病例中所占比例分别为100%和85.13%,而其他肠道病毒和Cox Al6型分别占重症病例的7.81%和7.06%。[结论]玉溪市手足口病控制需要根据其流行规律和病原谱的变化情况,提出有针对性的控制措施,并对EV71型进行更加深入的亚型和流行病学研究,为制定预防控制策略提供依据。

托幼机构儿童手足口病发病影响因素研究

目的探讨托幼机构儿童手足口病发病影响因素。方法 2013年4月-2016年1月共选择200例托幼机构儿童作为研究对象,调查问卷的方式进行研究,调查的因素包括：班级对手足口病防控的重视程度、相关制度的制定及落实、晨检午检情况、病例隔离情况、教职工、学生和家长对手足口病防控的态度、相关知识知晓率、预防行为的践行情况、教室等公共场所通风情况、消毒情况、教室每学生人均占有面积等。结果 31例儿童感染了EV71或Cox A16。晨检午检情况、隔离情况、手足口病相关知识知晓率、预防行为的践行情况、教室等公共场所通风情况、消毒情况、教室每学生人均占有面积均为托幼机构儿童手足口病发病的影响因素（P〈0.05）。结论社会及学校应加强力度宣传手足口病的相关知识及有效预防措施,使家长及托幼机构对幼儿的健康状况更加重视,积极践行预防行为,做好消毒工作,教室等公共场所保持通风换气,严格托幼机构的晨检午检,一旦手足口病的发生及时隔离,以降低手足口病的发生率。

菏泽市2013～2017年手足口病病毒学监测分析

目的探讨菏泽市2013~2017年手足口病流行病毒类型,为菏泽市手足口病疫情的防控和实施策略提供科学依据。方法 2013~2017年菏泽市各县区手足口病定点医疗单位收集的临床诊断病例的粪便或肛拭子标本,提取病毒核酸,应用实时荧光定量PCR进行病毒的核酸检测;用描述性流行病学方法分析流行病学特征。结果2013~2017年共收集样本2751份,其中阳性样本2294份,阳性率为83.39%;EV71阳性样本1111份,阳性率为40.39%;CA16阳性样本387份,阳性率为14.08%;其他肠道病毒阳性样本796分,阳性率为28.93%。2013年、2015年优势株为EV71;2014年优势株为CA16;2016、2017年以其他肠道病毒型为优势株。不同年龄组、性别、季节分布差异有显著性(P<0.05)。各年手足口病毒型别分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论 2013~2017年菏泽市手足口病流行病毒类型从高到低分别是EV71、其他肠道病毒和CA16。EV71是引起重症病例的主要病原体。在高发季节前,应加强托幼机构及散居儿童的卫生健康教育和防控力度,提前做好低幼儿童的疫苗宣传及接种工作;强化手足口病监测力度。

惠州市2010年手足口病疫情特点分析

目的分析探讨2010年惠州市手足口病疫情的病原体型、流行因素及流行病学规律,为制定防控策略提供科学依据。方法采用流行病学调查分析和实验室病原学检测方法。结果 2010年惠州市共发生手足口病疫情98例,肠道病毒通用型核酸、EV71和CoxA16核酸检出率分别为:68.88%,60.20%,2.04%。手足口病发病主要集中于<4岁儿童,占发病总数的82.65%,男性高于女性。结论加强手足口病的监测报告,做好家庭、托幼机构的消毒、健康教育工作是控制疫情的关键。开展手足口病流行病学和病原学研究,预测其流行规律,将有助于提出更好的预防和控制措施。

实验室诊断小儿手足口病的方法学比较

目的评价小儿感染手足口病实验室检测方法的临床应用价值,为临床提供合理的诊断依据。方法通过对2 753例手足口病患儿采集血清用ELISA方法检测血清中EV71和Cox A16的IgM抗体同时收集粪便用荧光RT-PCR方法检测该患儿粪便中的肠道病毒核酸,并对检测结果进行统计分析。结果 2 753例手足口病患儿EV71-IgM检测阳性948例,阳性率34.44%,EV71 RNA检测阳性942例,阳性率34.22%,两者的阳性检出率,差异无统计学意义,而两者合并检出率为41.34%,符合率为85.98%,两者诊断结果一致;Cox A16-IgM检测阳性486例,阳性率17.65%,Cox A16 RNA检测阳性274例,阳性率9.95%,Cox A16-IgM阳性检出率明显高于Cox A16 RNA阳性检出率,比较差异具有统计意义(P<0.05),将两者合并检出率为22.74%,符合率为82.31%,两者诊断结果一致性较差,具有统计学意义(P<0.05)。结论应用核酸及抗体检测的两种联合监测,可以提高EV71和Cox A16检出率,能更有效地提高手足口病患儿感染的诊断水平,对预防及对诊断手足口病有积极意义。

泰安市2013年手足口病病原体检测结果分析

目的对2013年泰安市手足口病病例进行病原体检测和分析。方法对临床诊断为手足口病病例的粪便标本505份,用实时荧光定量PCR筛选出肠道病毒通用引物阳性的标本,再分别使用Cox A 16和EV71型的特异引物进行分类检测。结果标本总肠道病毒阳性率为95.05%（408/505）,Cox A 16阳性率为31.09%（157/505）,EV71阳性率为27.92%（141/505）,其他肠道病毒阳性率为36.24%（183/505）,Cox A 16的阳性率高于EV71。发病年龄多为1-6岁,男性多于女性。结论 2013年度泰安市的手足口病疫情以EV71和Cox A 16并发为主,采用分子生物学方法检测手足口病的病原体,对手足口病的监测及防控具有重要作用。

2011年宜春市218例临床疑似重症手足口病病原学检测

目的对2011年宜春市各医院疑似重症手足口病病例样本进行实验室检测分析,从而为本地区手足口病的综合防治提供参考依据.方法采用real-time RT-PCR方法,对宜春市各医院采集的218份疑似重症手足口病患者的咽拭子、疱疹液、粪便、肛拭样本,进行肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒 A16（COX16）以及肠道病毒通用型（EV）的核酸检测.结果218份不同类型样本中,EV71病毒114例、COX16病毒4例、EV病毒20例.阳性率分别为52.29%、1.83%、9.17%.病例人群男性高于女性（1.38：1）,1~2岁年龄段病例数最多,4~6月份为本年度重症报告病例最多的月份.结论2011年宜春市手足口病引起重症病例的病毒株主要以EV71型为主,应特别加强对EV71引起的重症病例的监测,提前落实抢救措施,防止病情恶化导致死亡.

实时荧光定量RT-PCR法检测安徽宿州市手足口病病原体结果分析

目的 了解宿州市手足口病肠道病毒谱及感染情况,为制订手足口病预防控制策略提供依据。方法 采用实时荧光定量RT-PCR法对2012~2014年宿州市各县区哨点医院手足口病临床诊断病例进行病原学检测并分析。结果 在962份样品中,肠道病毒核酸检测阳性384例,阳性率为39.92%;其中EV71、Cox A16分别为154例（占40.10%）、144例（占37.50%）,其他型肠道病毒共86例（占22.40%）。384例阳性病例中,男247例,女137例,阳性检出率在性别间差异无统计学意义（χ2=0.83,P〉0.05）;1岁组和2岁组手足口病毒核酸检测阳性占全部阳性者的73.18%。在3~4月和6~7月的发病高峰期间,病毒主要以Cox A16型和EV71型毒株为主,10~12月以EV71型病毒株为主。在人口密集的萧县和埇桥区,其手足口核酸阳性检出率最高,分别为50.21%和42.18%。结论 宿州市手足口病病原体主要是EV71和Cox A16,主要发生在3岁以下儿童,发病时间以每年3~4月和6~7月为主,应加强在流行季节的防控工作及3岁以下手足口病患儿的病情监测与治疗。

实时荧光PCR技术在手足口病病毒核酸检测中的应用

目的通过对2010年4～8月北京市怀柔区手足口病病原学监测数据的分析,了解北京市怀柔区手足口病流行趋势,为该地区手足口病防治提供科学依据,同时探讨实时荧光RT-PCR在检测手足口病毒核酸中的应用价值。方法采集2010年4～8月怀柔区疑似肠道病毒感染者咽拭子和疱疹液标本,用实时荧光RT-PCR方法对人肠道病毒(包括EV71、CoXA16)进行核酸检测。结果 2010年4～8月共采集121例标本,检出肠道病毒EV71型87例,CoXA16型19例,肠道病毒通用型6例,阴性9例。结论 2010年4～8月怀柔区手足口病毒以肠道病毒EV71型为主。实时荧光RT-PCR技术具有特异性强、灵敏度高的特点,且能在采样后数小时内检测到病毒的RNA,从而达到快速诊断的目的,该方法对手足口病的治疗及疫情的有效控制提供有力的病原学支持。

2010~2013年濉溪县手足口病病原学及流行病学特征分析

目的了解本地区手足口病(HFMD)病原及流行病学特征,为HFMD防治提供科学依据。方法 251例临床诊断手足口病患者来自濉溪县医院2010年1月至2013年12月住院病例,采集咽拭子标本,应用实时荧光RT-PCR法检测标本中的人肠道病毒(HEV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)特异性核酸,分析手足口病的流行病学特征。结果251例HFMD患者标本,肠道病毒阳性率为28.69%(72/251),EV71阳性率为19.92%(50/251),Cox A16阳性率为6.77%(17/251),其他HEV阳性率为1.99%(5/251)。72例检测阳性病例中,EV71阳性病例50例占69.44%,Cox A16 17例占23.61%,CoxA16在年检测阳性率方面有统计学意义(P<0.05),EV71病毒在每年病原检测比例中都处于较高水平,为2010~2013年手足口病的优势病原。流行高峰主要是每年的3~6月份,发病年龄主要集中在1~3岁幼儿,肠道病毒检测阳性率在性别、年龄、流行季节方面比较无差异统计学意义(P>0.05)。结论 2010~2013年手足口病流行中,病原体主要为以EV71和Cox A16,其中EV71是优势病毒型,应加强1~3岁婴幼儿手足口病的预防和监测。

廊坊市2013—2014年手足口病病毒核酸检测结果分析

目的分析廊坊市2013—2014年手足口病病毒核酸型别及分布特征,为预防和控制手足口病提供科学依据。方法对该市各级医疗机构送检的手足口病临床诊断病例标本,采用Real-time RT-PCR法进行病毒核酸检测并分型。结果 2013年4月—2014年12月共收到咽拭子标本462份,检出阳性标本318份,总阳性率68.83%,其中EV71型95份,占29.87%;Cox A16型108份,占33.96%。发病年龄主要集中在5岁以下儿童,占85.50%。结论 2013年廊坊市手足口病的病原体以EV71型为主,2014年廊坊市手足口病的病原体以Cox A16型为主,5岁以下儿童是肠道病毒感染的高危人群。

经直肠滴入中药治疗手足口病的临床疗效及对病毒的清除作用研究

目的:观察经直肠滴入中药治疗手足口病的临床疗效及对手足口病病毒的清除作用。方法:选择西安大兴医院儿科在2017年1月~2018年6月期间收治的100例手足口病患儿为研究对象,随机分为对照组和治疗组。两组患儿入院后均接受对症治疗,在此基础上给予对照组患儿利巴韦林静脉滴注治疗,给予治疗组患儿经直肠滴入手足口病方煎剂,两组均连续治疗5d。比较两组患儿临床疗效、主要临床症状(发热、皮疹、口腔疱疹)消退时间治疗期间不良反应发生情况。分别于治疗前和治疗后炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)和CD4^(+)/CD8^(+))分布以及柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)和肠道病毒EV71型(EV71)RNA检测结果。结果:治疗组患儿治疗总有效率(98.00%vs.86.00%)和EV71 RNA转阴率(100.00%vs.78.95%)明显高于对照组(P<0.05),不良反应发生率明显低于对照组(4.00%vs.16.00%,P<0.05)。两组Cox A16 RNA转阴率比较无明显差异(100.00%vs.85.71%,P>0.05)。治疗组患儿发热、皮疹和口腔疱疹等主要症状消退时间都明显少于对照组(P<0.05)。两组患儿治疗后血清炎症因子IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α水平均较治疗前显著降低,CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)水平则显著升高(P<0.05)。而与对照组治疗后相比,治疗组患儿治疗后血清炎症因子和T淋巴细胞亚群水平均显著改善(P<0.05)。结论:经直肠滴入手足口病方煎剂能够明显提高手足口病患儿临床疗效,加快症状缓解,改善免疫功能,减轻炎症反应,杀灭病毒,安全性好,值得临床应用。

2017年我院300例手足口病流行病学特征分析

目的分析儿童手足口病流行病学特征,为今后的疫情防控指导及临床诊治工作提供重要依据。方法选取2017年我院收治的手足口病患儿,对其流行病学特征展开描述性分析。结果 2017年1—12月共报告手足口病患儿300例,包括重症病例5例,无死亡;男女比例为1.70∶1,男性所占比例高于女性;发病月份主要集中在4～7月和10～12月;散居儿童所占比例高于幼托儿童、学生;发病年龄集中在5岁及以下儿童,3岁及以下发病率最高;农村儿童所占比例高于城镇儿童;检出肠道病毒71型(EV71)95例,阳性率31.67%,检出柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)101例,阳性率为33.67%,其余肠道病毒104例,阳性率为34.67%。结论本地区手足口病目前的发病率依旧较高,疫情存在一定特征,在防控工作中,应注意加强宣传教育,改善儿童的生活习惯,控制手足口病的发生,降低手足口病发病率。

2008—2011年我国大陆地区重症手足口病流行特征分析

目的以重症手足口病患者为研究对象,旨在探讨重症手足口病在我国大陆地区的流行病学特征,为手足口病的重点防控提供依据。方法采用描述流行病学方法和地理信息系统对2008—2011年我国大陆地区重症手足口病例三间分布和病原体分布特点进行分析。结果 2008年5月至2011年12月期间我国大陆地区手足口病发病人数为5 020 994例,其中重症手足口病61 623例,重症比例为123/万。重症手足口病发病主要集中在4—7月(69.42%);实验室诊断结果显示,主要病原体为肠道病毒71型(81.75%),柯萨奇病毒A组16型(4.52%),其他肠道病毒(13.73%);男女性发病比为1.866∶1,3岁以下重症病例占总重症病例的91.13%;重症手足口病的主要患者为散居儿童(85.97%),其次是幼托儿童(12.72%),其他占1.31%。4年间重症手足口病患者主要集中在华南和华中地区。结论重症手足口病主要的发病季节为春夏季;多发于3岁以下儿童;男性人群的发病率高于女性人群;散居儿童是主要的发病人群;2008—2011年,重症手足口病的发病率呈先升后降的状态,发病强度在不同地区水平不同,地区差异比较明显,华中和华南等地区是重症手足口病的高发地区,考虑气候与人口密度等因素可能为疫情高发的相关因素。

2010～2012年德州市11县市区手足口病病原学特征分析

目的对2010～2012年德州市11县市区1 739例手足口病病例进行病原谱分析。方法采用荧光定量PCR方法对手足口病病例粪便标本进行肠道病毒通用型、EV71型和Cox A16型核酸检测。结果 1 739例手足口病病例肠道病毒通用型核酸阳性率64.29%,其中EV71阳性率为25.24%,Cox A16阳性率为22.31%,其他肠道病毒阳性率为16.73%;2010年病原以Cox A16为主,2011年病原以EV71为主,2012年病原以Cox A16为主,且有其他待定型别肠道病毒流行,检出率高于Cox A16;不同县市区之间病原体类型的阳性率差异有统计学意义(χ2=308.629,P<0.01);2～3岁组发病率最高,<1岁组病例数最少;发病时间主要集中在每年的4～7月,5月份病例数最多;9例重症病例中6例由EV71引起,1例由Cox A16引起,其他2例肠道病毒检测为阴性。结论手足口病病原谱复杂,具有动态变化特征。应加强手足口病监测,在发病高峰到来之前提前做好各项防控工作。