肠道病毒EV71和CAV6分离效果影响因素分析

目的探讨肠道病毒EV71、CAV6样本荧光定量RT-PCR的Ct值、接种剂量等因素对病毒分离效果的影响。方法采集确诊手足口病例咽拭子、肛拭子标本,应用荧光定量RT-PCR法检测病毒核酸,选取强阳性、阳性、弱阳性EV71、CAV6标本各30份,按不同剂量梯度(100,200,300,400μL)接种于RD细胞进行病毒培养分离。结果 180份标本的总体分离阳性率为52.2%,其中EV71阳性率60.0%,CAV6阳性率44.4%,差异有统计学意义(P<0.05);肛拭子分离阳性率60.9%,咽拭子分离阳性率43.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。不同接种剂量的病毒分离阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。结论肠道病毒EV71、CAV6标本荧光定量RT-PCR的Ct值、接种剂量、标本类型、分离细胞株对分离阳性率均有影响。

EV71-CA16肠道病毒荧光定量RT-PCR诊断试剂盒的研制

目的研制一种能同时检测EV71，CA16肠道病毒的二联实时荧光定量PCR检测试剂盒，主要用于EV71，CA16肠道病毒的快速检测和流行病学监测。方法设计特异度的EV71型、CA16型基因的引物和探针，优化实时荧光定量PCR检测体系，并研究产品的灵敏度、精密度、稳定性和检测线性范围；同时对2014年5月份收集的26份样品进行检测。结果试验得到了阳性重组质粒，线性范围在5＊10^2 copies／μl-10^5 copies／μl，该范围内检测结果良好；优化后肠道病毒CA16上下游引物和探针浓度分别为0．48，0．24μmol／L，EV71上下游引物和探针浓度分别为0.40，0．20μmol／L。敏感度达到500copies／μl，重复性变异系数CV≤5％；该荧光定量PCR检测试剂盒稳定性强，在-20℃下可以保存一年，对EV71，CA16肠道病毒具有良好的特异度。用该方法检测20份临床阳性样品和6份阴性样品，阳性检出率为100％（20／20），阴性检出率为100％（6／6）。结论试验建立的EV71，CA16肠道病毒实时荧光定量RT—PCR检测方法可用于EV71，CA16肠道病毒的临床诊断。

红景天苷体外抗EV71病毒的作用

应用MTT法研究红景天苷对Vero细胞的毒性以及对肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的抑制作用,通过吸附试验和穿入试验观察红景天苷是否对EV71的吸附和穿入具有抑制作用。结果表明,红景天苷的细胞毒性低,半数细胞毒性浓度(CC50)为4.25 mg/mL。药物在病毒感染前加入(药物预处理)、药物和病毒同时加入及药物在病毒感染后加入都能够抑制病毒,以药物预处理细胞抗病毒作用最好;红景天苷能够抑制病毒的吸附和穿入作用,对吸附作用抑制效果更强。表明红景天苷能够在体外抑制病毒对细胞的感染。

肠道病毒71型疫苗质量控制研究进展

手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)已成为西太平洋区严重的公共卫生问题之一,肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引起HFMD的主要病原体,研发疫苗是控制HFMD流行的有效手段。目前世界范围已有5个EV71全病毒灭活疫苗进入临床试验,其中中国研制的3种EV71疫苗已分别完成III期临床试验,结果表明3种疫苗都具有良好的安全性和保护效果。在EV71疫苗研发中,抗原质控的方法和标准是研发的瓶颈,其中抗原活性测定是工序工艺优化、免疫原性评价和剂量确定的关键指标。综述了EV71疫苗抗原质控的研究进展。

北京地区柯萨奇病毒A组6型、肠道病毒EV71型和柯萨奇病毒A组16型手足口病流行特征及临床特点比较

目的了解柯萨奇病毒A组6型、肠道病毒71型和柯萨奇A组16型手足口病流行特征、临床特点,为指导临床诊断,调整手足口病防控策略提供科学依据。方法采用前瞻性调查的方法,采集2013年8月至2015年9月在北京市儿童医院诊断的手足口病临床确诊病例的咽拭子,将手足口病原核酸检测阳性的病例分为CA6、EV71、CA16 3组,分析比较3组的临床特点、流行特征、预后及影响因素。结果共采集HFMD临床诊断病例574例患儿咽拭子,CA6入组122例,EV71入组107例,CA16入组124例。13组年龄、性别分布一致,差异无统计学意义。2不同年份流行主要毒株不同,但3种病原体引起的手足口病高峰均在夏季。3CA6组发热比例高达78.69%,明显高于EV71组(35.51%)和CA16组(37.90%)(P<0.001),平均体温约为38.78℃。CA6组表现大疱疹(9.01%)、结痂(8.20%)、皮疹部位疼痛(29.51%)、恢复期脱皮(38.52%)、脱甲(35.25%)、色素沉着(11.47%)比例高于EV71组、CA16(P<0.001)。43组在卫生学指标方面差异无统计学意义。结论CA6、EV71和CA16感染所致的HFMD发病高峰季节一致;与EV71、CA16感染相比,CA6感染引起的高热比例较高,部分病例可表现为大疱疹,疼痛、脱皮、脱甲、色素沉着、结痂发生率高,预后较好。

柯萨奇病毒A组6型与肠道病毒71型感染所致手足口病临床特征比较

目的了解柯萨奇病毒A组6型、肠道病毒71型手足口病临床特点，为指导临床诊断，调整手足口病防控策略提供科学依据。方法采用前瞻性调查的方法，收集2013至2014年在北京市西城区手足口病临床确诊病例信息，将手足口病原核酸检测阳性的病例分为CA6、EV71组，分析比较2组的临床特点、流行特征、预后等。结果CA6组130例，EV71组121例。2组的年龄、性别分布差异无统计学意义。CA6组发热比例高达82．3％，明显高于EV71组（34．7％，P〈0．05），其中大于等于38℃占85．0％。CA6组出现大疱疹（7．4％）、恢复期脱皮（16．9％）、脱甲（10．0％）的比例高于EV71组（P〈0．05）。不同年份流行主要毒株不同。结论与EV71感染相比，CA6感染引起的高热比例较高，部分病例可表现为大疱疹、脱皮、脱甲，整体预后较好。CA6和EV71感染所致的HFMD发病高峰季节不一致．

EV71病毒感染者的排毒研究

目的 阐明EV71感染者病毒的排泄特点.方法 采集重症手足口患者、轻症手足口患者及其密切接触者（简称密接）的咽拭子和粪便标本,利用荧光定量PCR检测EV71核酸.将研究对象分为重症组、轻症组及密接组,Kruskal-Wallis检验分析三组的排毒差异有无统计学意义.结果 本研究从27位儿童和3位成人共采集136份咽拭子和粪便标本,其中包括7例密接、9例轻症患者和14例重症患者.研究结果显示：密接、轻症病例及重症病例的排毒差异有统计学意义（P＜0.01）.EV71感染者咽拭子最长排毒时间为30天,粪便标本最长排毒时间为54天.结论 排毒时间较长是EV71感染者的典型特征.EV71感染者排毒时间与疾病严重程度相关.持续排毒是手足口病流行的一个潜在危险因素.

上海松江区≤6岁儿童家长对EV71疫苗接种态度及影响因素

目的 了解上海市松江区≤6岁儿童家长对手足口病（HFMD）及肠道病毒71（EV71）预防性疫苗的认知度,及其接受子女接种EV71疫苗的意愿情况。方法 采用分层随机抽样方法,于2015年7—9月在上海市松江区6个街道（镇）选取1 227名≤6岁儿童家长,自编《手足口病认知情况及EV71疫苗接种意愿调查表》进行问卷调查。采用多元logistic回归分析方法,分析接种EV71疫苗意愿的影响因素。结果 在接受调查的1 227名家长中,26.32%在接受本次调查前听说过EV71,16.22%听说过EV71疫苗,52.16%愿意让其子女接种EV71疫苗。担心疫苗的安全性是家长选择不接种疫苗的主要原因,大多数家长赞同EV71疫苗的推广使用,但希望政府能将该疫苗纳入国家免疫接种计划,或能提供适当的价格调控和经济补贴。多因素logistic回归分析显示,上海市户籍（OR=0.651,95%CI=0.479~0.884）、幼托儿童（OR=0.737,95%CI=0.563~0.965）、有手足口病既往史的儿童（OR=0.528,95%CI=0.349~0.798）家长让其孩子接种疫苗意愿低,高中文化程度、对EV71有所认知、认可接种疫苗对手足口病预防有帮助的家长让其孩子接种疫苗高。结论 家长对EV71疫苗的认知水平总体较低,户籍、儿童类型、文化程度、手足口病既往史、对EV71的认知、对接种疫苗预防疾病的认可程度是影响EV71疫苗接种意愿的主要因素。

手足口病601例实验室检测结果分析

目的:通过分析手足口病病例实验室检测结果,为临床诊断和预防控制提供帮助。方法:利用实时荧光定量PCR检测技术,对2013年哈尔滨市采集的601份标本进行肠道病毒、CoxA16、EV71、CoxA6、CoxA10检测。结果:检测手足口标本601份,肠道病毒阳性107份,EV71阳性55份(28.8%),CoxA16阳性29份(15.2%),CoxA6阳性91份(47.6%),CoxA10阳性1份(0.05%),其它肠道病毒15份(7.9%);重症病例儿例,其中EV71阳性4份(2.0%),其它肠道病毒阳性2份(1.0%);轻症病例590例,EV71阳性51份(26.7%),CoxA16阳性29份(15.2%),CoxA6阳性91份(47.6%),CoxA10阳性1份(0.05%),其它肠道病毒13份(6.8%)。结论:哈尔滨地区2013年的手足口优势流行株为CoxA6,而EV71和CoxA16、CoxA10、其它HEV也同时存在;

肠道病毒71型2C蛋白的异源表达及纯化

目的获得高纯度、性状均一的可溶蛋白肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)2C。方法截取2C蛋白的6个包含ATPase/解旋酶等核心结构域的基因片段,分别使用含有His标签和MBP促溶标签的表达载体在大肠埃希菌中进行异源表达,分子筛层析纯化2C蛋白,SDS-PAGE电泳检测表达产物和纯化蛋白。结果成功将EV71 2C蛋白的6个片段进行了克隆表达并纯化,获得了高纯度、性状稳定的可溶蛋白MBP-2C91aa-256aa和MBP-2C118aa-256aa。SDS-PAGE检测2C蛋白纯度达97%以上,分子质量与预期结果一致。纯化的2C蛋白浓度为8.8mg/ml。结论91aa-256aa和118aa-256aa片段的MBP-2C截短蛋白比包含其他片段的截短蛋白性状稳定、均一,MBP标签提高了2C的6个截短蛋白的可溶性。高纯度可溶蛋白的制备为其晶体结构和功能研究奠定了基础。

EV71灭活疫苗(人二倍体细胞)在恒河猴婴猴模型中的免疫保护性分析

肠道病毒71型作为引起儿童群体常见传染性手足口病（HFMD）的主要病原，具有导致少量感染个体出现脑炎等神经系统病变以及相关心肺功能衰竭的病理学特性．因此其预防性疫苗的研发具有重要的公共卫生意义．在前期工作的基础上，一种EV71灭活病毒疫苗（人二倍体细胞）在本研究中基于恒河猴婴猴模型进行了相应的免疫保护性分析．以160EU剂量对2～3月龄婴猴进行0，4周免疫后，动物在第4周接受了剂量为10。～CCID50的病毒经呼吸道的攻击．对病毒攻击后动物在14天内的临床症状、血液生物学、器官病原学分布以及病理学检测的动态观察表明，经疫苗免疫的动物未出现对照动物所具有的特征性临床表现，其血液生物学及病理学检测均无异常．同时，器官病原学分布亦呈阴性．结合动物中和抗体的明确增长及对照动物的综合表现分析，本文的工作证实了该EV71灭活病毒疫苗（人二倍体细胞）在恒河猴婴猴体内的免疫保护性．

盐城市2013年手足口病病原学特征分析

目的:对盐城地区2013年手足口病患儿及其临床重症病例进行病原学特征分析。方法:采集手足口病患儿咽、肛拭子,用肠道病毒实时荧光RT-PCR,对其病毒核酸进行肠道病毒检测定型。结果:491例(重症26例)患儿采集咽、肛拭子标本中,共检出肠道病毒核酸阳性193例(39.31%)中,EV71型35例(18.13%);CVA16型35例(18.13%),CVA6型96例(49.74%),其他未分型27例(13.99%)。临床重症病例14例中,EV71型3例,CVA16型0例,CVA6型9例,未分型2例,CVA6与EV71、CVA16三者发病比较,差异有统计学意义(χ2=8.0,P<0.01)。结论:检测的以往常见的EV71和CVA16型转变为CVA6型,它是引起重症病例的主要病原体,也是区域性手足口病的重要病原。

镇江市润州区2011-2014年手足口病流行病学特征

目的分析镇江市润州区手足口病流行病学特征。方法采用描述性流行病学方法,对2011-2014年手足口病发病情况进行分析。结果 2011-2014年共报告手足口病2 154例,年平均发病率为181.45/10万,其中重症病例3例,无死亡病例。主要集中在1~4岁儿童,占82.64%;具有明显季节性趋势;实验室监测2011-2012年以EV71型和CoxAl6型为主,2013年以其他肠道病毒型病例为主,2014年分布较散。结论润州区手足口病发病具有明显季节、人群、地区特征,可根据流行病学特点制定防控措施,重点关注5岁以下儿童。

小儿重症手足口病的护理体会

总结近2a来小儿重症手足口病的护理措施，预防并发症及后遗症，降低病死率。201O年6月～2012年6月入住我科的手足口病患儿共512例，有2／3以上为重症患儿，其中包括9例极重症手足口病患儿。近2a来手足口病重症病例有所增多，临床工作者应高度重视，加强诊断．根据病情制定周密的护理计划，预防并发症，大大提高治愈率，降低病死率。

黄石市364例手足口病的流行特征及病原学分析

目的 了解黄石市手足口病流行期间的病原学特征及流行病学规律，为科学制定手足口病防控策略提供依据。方法 收集手足口病流行期间2013年4—9月364临床确诊手足口病患儿资料和一周内标本，对病例资料分类统计分析，用荧光定量RT—PCR法进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CoxAl6)定量分型。结果 黄石地区手足口病的流行从4月开始增多，5月份急剧上升至高峰，随后逐月下降。男女比例为2.31:1，在1—不满6岁年龄段，4至5月份男性患病人数显著高于女性（X2=10.60，P﹤0.01）。364例被检测患儿中337例为肠道病毒阳性，阳性率为92.58％；EV71阳性216份，检出率为59.34％，CoxAl6阳性,102份，检出率为28.02％，两者检出率存在明显统计学差异( X2=69．39，P<0．001)。结论 气温和适宜的湿度是手足口病的发生与传播的主要原因，流行时间特征与当地气温和湿度手密切相关；在1—不满6岁年龄段，4至5月份男性患病人数显著高于女性；EV71和CoxA16为手足口病流行的两种主要病原体，但引起流行的主导病原体也交替出现，因此长期监测和监测手足口病的病原体变化显得尤为重要。

2012-2013年浙江省手足口病流行病学和病原学特征分析

目的了解2012-2013年浙江省手足口病流行特征和病原构成,为手足口病防控工作提供参考。方法收集2012-2013年浙江省手足口病疑似患者粪便、咽拭子、疱疹液标本,采用实时荧光RT-PCR对收集样本进行HFMD病原体检测。结果 2012-2013年共采集样本1 792例,患者以5岁以下散居儿童为主;浙江省手足口病发病高峰期在5-6月份,9月份出现发病次高峰;肠道病毒总检出率为72.9%,其中2012年浙江省手足口病优势病原体为EV71（40.3%）,其次为CoxA16（31.3%）,2013年浙江省手足口病优势病原体为其他肠道病毒（77.2%）（非EV71和CoxA16）,以CoxA6为主（51.3%）。不同样本类型中,肠道病毒检出率依次为疱疹液（100.0%）、粪便（76.2%）和咽拭子（65.1%）。结论手足口病的流行具有季节性和人群性,不同年份引起手足口病的优势病原体存在变化,持续地病原监测有助于预防和控制手足口病的流行暴发。

论手足口病的诊治

手足口病（Hand-foot-and-mouth disease） 由肠道病毒引起的传染病,多发生于婴幼儿,可引起手、足、口腔等部位的疱疹,个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症.引发手足口病的肠道病毒主要以柯萨奇病毒A16型（Cox Al6）和肠道病毒71型（EV 71）最为常见.本文论述了手足口病的病因病理、临床表现、诊断及治疗.