三氧化二砷诱导尤文肉瘤细胞凋亡及对EWS-FLi1融合蛋白的影响

目的:探讨三氧化二砷(Arsenictrioxide,As2O3)诱导尤文肉瘤细胞凋亡及对融合蛋白EWS-FLi1表达的影响。方法:应用噻唑蓝(MTT)法、形态学观察、原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞术(FCM)观察As2O3对体外生长的尤文肉瘤RD-ES细胞系生物行为的影响;应用半定量RT-PCR测定应用As2O3前后c-myc基因mRNA水平的变化;应用免疫细胞化学及固定化蛋白印迹法(Westernblot)观察用药前后EWS-FLi1融合蛋白表达水平的变化。结果:As2O3对体外生长的RD-ES细胞系具有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡。c-myc基因mRNA表达水平和EWS-FLi1融合蛋白表达量随As2O3作用时间延长逐渐降低。结论:常规治疗浓度的As2O3对体外生长的尤文肉瘤细胞具有明显的杀伤作用,其作用机制与改变线粒体膜通透性和抑制EWS-Fli1融合蛋白、降低c-myc基因表达有关。

尤文肉瘤融合基因修饰的重组腺病毒的构建及其转染的树突细胞体外抗尤文肉瘤免疫应答

目的:构建尤文肉瘤融合基因EWS-FLI1重组腺病毒,利用此腺病毒感染外周血单核细胞(PBMC),培养树突细胞(DC),检测感染后的DC致敏的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系的杀伤作用。方法:将质粒Pec1/EW S-FLI1酶切,切出的EWS-FLI1 cDNA片段克隆至腺病毒穿梭质粒padtrack-cmv的hCMV启动子下游。将穿梭质粒和骨架质粒共同转化大肠杆菌B J5183菌株,获得同源重组后的腺病毒质粒pADeasy-1/EW S-FLI1。将此质粒转染293细胞,包装产生腺病毒Ad EW S-FLI1。扩增、纯化产生高滴度的Ad EW S-FLI1。转染PBMC并经过鉴定后致敏淋巴细胞,4 h51Cr释放试验测定致敏后的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系的杀伤作用。结果:同源重组后产生的pADeasy-1/EW S-FLI1经PCR鉴定构建成功,纯化后的滴度为4×1010/mL。转染PBMC后,RT-PCR证实有EW S-FLI1 mRNA的转录。致敏后的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系有明显的杀伤作用,效靶比在40∶1时,对尤文肉瘤673细胞系的杀伤率为35.1800%±0.0128%,和对照组相比差异有统计学意义。结论:重组腺病毒Ad EW S-FLI1构建成功,并能在PBMC中稳定有效地表达,Ad EW S-FLI1转染的DC可高效地诱发机体T细胞的特异性抗肿瘤免疫应答作用。

尤文肉瘤家族肿瘤染色体易位及靶向治疗的研究进展

许多骨与软组织肿瘤中存在染色体易位的现象,其中对尤文肉瘤家族肿瘤(Ewing sarcoma family of tumors,ESFT)中染色体易位的研究最早且最为深入。约85%左右的ESFT患者存在t(11;22)(q24;q12)染色体易位,由其编码的融合蛋白EWS/FLI1是导致ESFT发生和发展的关键因素。因此,对EWS/FLI1进一步研究可以为ESFT的诊断、治疗和预后等提供新的靶点。本文结合近几年的最新报道,对EWS/FLI1在ESFT发生和发展中的作用机制以及靶向治疗等方面的最新进展做一综述。