STEP 的实现── EXPRESS 向 Java 的映射

为了实现面向Ｉｎｔｅｒｎｅｔ的制造信息的集成，采用Ｊａｖａ技术作为ＳＴＥＰ标准的实现方法是必要的。介绍了采用Ｊａｖａ技术实现ＳＴＥＰ标准的机制，重点在于ＥＸ－ＰＲＥＳＳ语言与Ｊａｖａ语言的联编映射。从面向对象思想和制造信息模型描述的语义出发，建立了映射规则，分析了联编映射中的语义内容和变化，讨论了实现需要解决的技术问题。

一个新的IEC61000-4-2标准ESD电流解析表达式

分析了两个ESD标准电流波形表达式,并提出一个新的基于脉冲函数来描述ESD标准电流的解析表达式,该表达式符合最新的标准IEC61000-4-2,在零时刻的电流及其微分部为0,且波形与实际测量波形基本吻合。

鲤鱼(Cyprinus carpio)生长激素基因克隆及原核表达

采用逆转录—聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，从鲤鱼脑垂体总ＲＮＡ中扩增出编码鲤鱼生长激素（ＧＨ）成熟肽基因序列．定向克隆至质粒ｐＵＣ１８，克隆的鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ不含信号肽序列并以新的起始密码子ＡＴＧ取代鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ第１个密码子ＴＣＡ．序列分析表明，与Ｋｏｒｅｎ报道的鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ相比有两个碱基差异，但推断的氨基酸序列完全一致．将鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ定向克隆至原核表达载体ｐＢＶ２２０，构建成重组鲤鱼ＧＨ基因表达载体ｐＢＶｃＧＨ８．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描分析表明：经４２℃诱导，ｐＢＶｃＧＨ８在大肠杆菌中可表达一分子量约２２０００的特异蛋白，表达量占细胞总蛋白的２９．２％．该基因重组的鲤鱼ＧＨ添加到饲料中投喂罗非鱼。

人乳头瘤病毒假病毒制备方法的优化

人乳头瘤病毒假病毒可广泛应用于中和抗体鉴定和疫苗免疫性评估等研究.本研究对多质粒共转染293FT细胞生产HPV假病毒的方法进行了深入优化,结果显示不同的HPV结构蛋白表达质粒转染比例对于假病毒生产效率有显著的影响,HPV主要结构蛋白L1的表达水平是影响生产效率的主要因素,L2表达质粒的用量过高或过低均不利于假病毒的生产,而报告质粒的用量对假病毒生产效率的影响相对较小.综合比较显示,在该体系中L1和L2表达质粒和报告质粒以合适比例(如1∶1/10∶1/2)进行共转染可获得更为理想的生产效率.本研究同时也在293FT细胞中对磷酸钙转染方法进行了优化,通过磷酸钙与质粒用量的交叉配比试验获得了较优的转染条件.通过优化,建立了更为高效的HPV假病毒大量制备方法,在HPV16、HPV18、HPV6、HPV11假病毒生产中的应用结果显示较原方法可显著提高生产效率.本研究为HPV假病毒中和实验的规模化应用提供了有利条件.

不结球白菜Ty1-copia类逆转座子序列的克隆及表达

参照Tyl-copia类逆转座子逆转录酶的保守区设计简并引物，分别从10个不结球白菜（Brassica campestris ssp．chinensis）品种的全基因组中均扩增出260bp左右的目标条带。将目的条带回收、克隆和测序后进行分析，DNAstar分析发现，这些序列存在高度的异质性，28个核苷酸序列变化范围为224～278bp，同源性范围为16．7％～83．0％。28条序列通过核苷酸聚类分为8个家族。推导氨基酸序列有移框突变、终止子突变或二者兼有；与已登录的不同物种同一类型逆转录酶氨基酸系统进化树分析表明，不结球白菜Tyl-copia类逆转座子与芥菜型油菜、拟南芥、芜菁、甜菜可能有共同的起源。半定量和实时定量PCR检测表明，水杨酸（salicylicacid）和Peronospora parasitica均能激活不结球白菜Tyl-copia类逆转座子，逆转座子在不结球白菜叶片中的表达特征说明它可能参与寄主对病原菌的抗性。

基因重组人血红蛋白的纯化

目的 :探索重组人血红蛋白的纯化方法。方法 :将α、β珠蛋白串联基因克隆进 pBV2 2 0表达载体 ,获得了高效表达 ,表达产物达细菌总蛋白的 2 0 %左右。该表达产物以包涵体形式存在 ,包涵体经洗涤后 ,用 8mol/L尿素溶解 ,先用Q SepharoseFastFlow阴离子交换纯化后 ,又经Sephacryl 10 0凝胶过滤纯化。 结果 :经两步纯化后重组人血红蛋白的纯度达 90 %左右。纯化产物经复性 ,具有与氧结合的能力。结论

家蚕系统表达的重组人丁酰胆碱酯酶的生化性质

研究家蚕系统中高效表达的重组人丁酰胆碱酯酶(rhBChE)的生化性质并与天然人丁酰胆碱酯酶(nhBChE)进行比较。采用丁酰胆碱酯酶活性测定,抑制剂及重活化剂作用,免疫印迹等方法。实验结果表明,rhBChE及nhBChE在底物亲和力、抑制剂敏感性及可重活化性、稳定性、对抗体的反应性等方面均有相似的生化性质,重组人丁酰胆碱酯酶具有天然人丁酰胆碱酯酶的功能。但rhBChE的糖基化修饰程度较低。

运动对骨骼肌肌动蛋白及其基因表达影响的研究进展

以肌动蛋白在骨骼肌运动中的重要生理功能为依据,从分子水平阐述了运动方式对骨骼肌肌动蛋白及其基因表达的不同影响,并对调节骨骼肌肌动蛋白合成和基因表达的因素进行了探讨。

人肺癌组织细胞Na^+/H^+交换蛋白-1基因的表达与其抗凋亡的关系

目的 :通过对临床人肺癌组织Na+/H+交换蛋白 1(NHE 1)mRNA的表达的检测 ,探讨肿瘤治疗新的特异靶点。方法 :采用RNA原位分子杂交法 (RNA IMH)检测了 2 7例人肺癌组织和正常肺组织NHE 1mRNA的表达。结果 :人肺癌组织细胞NHE 1mRNA的表达显著增强 ,呈过表达 ,而各病理类型间无显著差异。结论 :人肺癌组织细胞中NHE 1mRNA过表达这一区别于正常组织细胞的分子生物学特征与肿瘤细胞的抗凋亡特性的形成密切相关 。

大鼠补体C5a蛋白真核、原核表达载体的构建以及体外表达的鉴定、纯化和生物学活性分析

目的:构建带His标签的大鼠补体C5a蛋白真核表达载体pIRES2-EGFP-C5a和原核表达载体pET-21a-C5a,分别观察其体外表达情况,将C5a蛋白纯化后分析其生物学活性。方法:以RT-PCR方法从大鼠肝细胞中扩增出大鼠补体C5a基因全长cDNA序列,在序列的N端添加6个组氨酸His标签后,插入含增强绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP,用脂质体法转染HEK293细胞,免疫印迹法检测C5a蛋白的表达水平;以真核表达质粒pIRES2-EGFP-C5a为基础,将大鼠补体C5a基因亚克隆至原核表达载体pET-21a,体外检测C5a蛋白的表达情况,之后再行Ni2+螯合亲和层析柱纯化C5a蛋白。以C5a刺激中性粒细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧的生成;C5a刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMC)不同时间,RT-PCR测定其产生IL-6和TNF-α的水平。结果 :RT-PCR扩增出了大鼠补体C5a基因;并成功构建了pIRES2-EGFP-C5a重组质粒,体外成功转染入HEK293细胞,并在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,但免疫印迹法未能检出C5a蛋白的表达;另成功构建了pET-21a-C5a原核表达载体,并在体外用免疫印迹法检测到了C5a蛋白表达。另用亲和层析纯化得到了带His标签的C5a蛋白,证实C5a能促进中性粒细胞呼吸氧爆发。结论:成功构建了大鼠补体C5a真核和原核表达载体。构建的原核表达载体可测到C5a蛋白的表达,且C5a蛋白具有相应的生物学活性。

荧光定量PCR法检测副溶血弧菌tdh基因的表达差异

以pvuA为内标基因,运用实时荧光定量PCR检测不同来源以及不同应激条件下副溶血弧菌热稳定直接溶血素基因tdh的表达量。pvuA和tdh基因的荧光定量PCR融解曲线分析表明,两者均为特异性扩增。尽管相同来源的不同菌株间tdh表达量存在显著差异,副溶血弧菌临床分离株的tdh mRNA平均表达量显著高于海产品分离株((57.2比13.8)。在pH4.0、0.5%和8%NaCl应激条件下,临床株ZJ2和海产品分离株FJ14A的tdh mRNA表达量显著高于对照组;另一海产品分离株KP34在8%NaCl条件下的表达量显著提高,而低pH应激时tdh mRNA的表达量显著降低。结果表明,不同副溶血弧菌分离株的tdh mRNA表达差异显著,临床分离株的tdh mRNA表达量总体上高于海产品分离株,副溶血弧菌在不同应激条件下主要表现为tdh mRNA表达上调。

对“如积释锁”的探讨

对中国宋元间出现的“如积释锁”进行了探讨 .分为 3部分 :对“释锁”的理解 ;对“如积”的理解 ;关于《如积释锁》与元裕细草问题 .重点是对《如积释锁》这本书的研究以及对元裕细草可能形式的探讨 .

小檗胺衍生物(EBB)体外抑制肺癌细胞增殖机制的初探

本文研究并发现了新型半天然钙调素(CaM)拮抗剂——O-4-乙氧基丁基小檗胺(O-4-ethoxy-butyl-berbamine,EBB),具有选择性抑制肺巨细胞癌(PG)的增殖和降低细胞内CaM水平的能力,对人胚肺细胞(HEL)的增殖和细胞内CaM的水平影响较小。同时观察到EBB引起肿瘤细胞内CaM水平降低的原因,是对CaM基因的转录产物(mRNA)和翻译产物(CaM)两方面作用的结果。此外,EBB还能部分降低PG细胞内原癌基因和突变的抑癌基因转录产物mRNA的水平。EBB抑制肿瘤细胞增殖的机制,除了对CaM基因的表达水平和CaM活性调控外,可能还直接或间接地影响了相关的原癌基因和突变的抑癌基因的表达。

高速公路工程监理实践及建议

以泉州—厦门高速公路工程监理为例，介绍了施工监理组织及其实施概况。并在总结其它高速公路监理经验的基础上，对我国未来公路建设的发展，以及如何完善公路监理制度和提高工程监理质量提出了一些建议。

Survivin基因在大肠癌中的表达

目的探讨Survivin基因在大肠癌中的表达。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测20例大肠癌及其癌旁组织survivin mRNA表达情况。结果65%大肠癌组织表达survivin mRNA,而癌旁组织25%表达。Survivin基因表达与肿瘤大小、侵袭深度、淋巴结转移及分化程度无明显关系。结论Survivin基因在大肠癌发生发展中可能起作用,Survivin表达上调和端粒酶激活可能通过各自不同的信号途径在大肠癌变中发挥协同作用。

掌握Paraphrase,提高英语理解和表达能力

英语专业高年级学生往往对Paraphrase发怵，因为Paraphrase不但要求对原文正确理解．而且要求用更简单的词汇和结构来表达与原文相同的意思。社会文化与语言相互依存，从这个角度能更好地掌握好Para－phrase，从而提高英语理解和表达能力。

演唱声乐作品需注意的几个重要环节

声乐是一门听觉艺术,也是人们最能直接接受的一种艺术形式。为了更好的表达歌曲的思想感情,把美的艺术效果传递给听众,就必须认真分析和处理好作品。在忠实原作的基础上,进行大胆创作,把握好作品的演唱风格,才能使歌者与听众获得强烈的共鸣。

蛋白激酶CK2α基因在肝癌中的表达及其意义

为了克隆肝癌中CK2α基因并研究其功能。通过逆转录PCR从肝癌组织及癌旁肝组织中获得CK2α亚基因编码区cDNA。利用表达载体pT7- 7进行定向克隆。IPTG诱导表达 ,Westernblot鉴定。CK2α在肝癌中表达强于癌旁肝组织。转化子的阳性筛选率为 10 0 %。重组质粒转化表达菌经IPTG诱导后出现一个分子量 4 2kDa蛋白过度表达 ,Westernblot结果证明 ,过度表达产物能与抗人CK2α亚基抗体发生特异性免疫反应。结论 蛋白激酶CK2α亚基在肝癌中表达 。

慢性同种移植肾病大鼠肾组织中Smurf 2的表达及作用

目的观察Smad泛素化调节因子-2(Smurf 2)在慢性移植肾病(CAN)大鼠肾组织的表达及其与CAN大鼠肾脏功能改变、病理学改变之间的关系,探讨Smurf 2在CAN中的作用。方法实验组采用近交系大鼠的同种异基因动物间的左肾原位移植,雄性F344大鼠40只为供体,雄性LEW大鼠40只为受体,移植手术后第10天行右肾切除术,对照组采用单肾切除术的雄性大鼠25只。分别于4、8、12、16周及24周处死大鼠,做肾功能、移植肾组织学检测,并借助免疫印迹、逆转录-多聚酶联反应方法检测肾组织中Smurf 2 mRNA、Smurf 2蛋白的表达。结果移植组大鼠尿蛋白定量、血清肌酐水平于移植后16周时显著增高,24周时更为显著。Smurf 2 mRNA、Smurf 2蛋白在移植后随疾病进展逐渐升高,24周时达高峰。相关分析显示,肾移植大鼠Smurf 2表达水平与24 h尿蛋白定量、血清肌酐水平、肾间质纤维化程度呈正相关(P<0.05,P<0.01)。结论 Smurf 2在CAN发病机制中起作用。

肝癌中蛋白激酶CK_(2α)亚基的克隆及其功能初步研究

目的 克隆肝癌中CK2α基因 ,并研究其功能。方法 通过逆转录PCR从肝癌组织中获得CK2α亚基基因编码区cDNA。将NdeI/BamHI双酶切PCR产物连接到同样双酶切并经牛小肠碱性磷酸酶去磷酸化的表达载体 pT7- 7进行定向克隆。转化感受态大肠杆菌DH5获得转化子 ,琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子 ,将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定。随机挑选 4个阳性克隆进行DNA测序 ,将序列完全正确的重组质粒转化表达菌BL2 1(DE3) ,挑单克隆小量培养 ,IPTG诱导表达 ,Westernblot鉴定。结果 转化子的阳性筛选率为 10 0 % ,限制性酶分析结果表明 ,插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符。DNA正反向测序结果表明 :从 4个阳性克隆中筛选到 1个PCR过程不产生突变的重组质粒 ,并将其质粒命名为 pTMCKA。重组质粒转化表达菌经TPTG诱导后出现一个分子量 4 2Kda蛋白过度表达 ,Westernblot结果证明过度表达产物能与抗人CK2α亚基抗体发生特异性免疫反应。结论蛋白激酶CK2α亚基在肝癌中表达 。