NKX2-1-AS1介导miR-96-5p/PRDM16轴对未分化甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)NK2同源异形盒1-反义RNA 1(NKX2-1-AS1)介导微RNA(miR)-96-5p/含有PR结构域的蛋白16(PRDM16)轴对未分化甲状腺癌(ATC)细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长的影响。方法基于生物信息学筛选ATC组织及细胞中差异表达的lncRNA NKX2-1-AS1,并进一步筛选其靶基因miR-96-5p和下游靶基因PRDM16。双荧光素酶报告基因实验验证NKX2-1-AS1与miR-96-5p以及miR-96-5p与PRDM16之间的关系。Western blotting检测过表达miR-96-5p对NKX2-1-AS1过表达的CAL-62细胞PRDM16表达的影响。平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别检测敲减PRDM16对过表达NKX2-1-AS1的CAL-62细胞增殖、迁移和侵袭的影响。裸鼠皮下注射CAL-62细胞,观察敲减PRDM16对NKX2-1-AS1过表达的CAL-62细胞移植瘤生长的影响。结果基于生物信息学筛选出参与调节ATC发展的NKX2-1-AS1/miR-96-5p/PRDM16轴。双荧光素酶报告基因实验验证结果显示NKX2-1-AS1与miR-96-5p、miR-96-5p与PRDM16结合。过表达NKX2-1-AS1上调CAL-62细胞中PRDM16蛋白表达;而过表达miR-96-5p可逆转此上调作用。过表达NKX2-1-AS1抑制CAL-62细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长;而敲减PRDM16可逆转此抑制作用。结论NKX2-1-AS1可能作为竞争性内源性RNA与miR-96-5p竞争结合下游靶基因PRDM16,上调PRDM16表达,从而抑制ATC细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长。

血清miR-96-5p、miR-486-5p水平与创伤后脓毒症患者机体炎症反应及预后的关系分析

目的 分析血清微小RNA(miR)-96-5p、miR-486-5p水平与创伤后脓毒症患者机体炎症反应及预后的关系。方法 选取2019年3月至2022年10月海南医学院第一附属医院收治的205例创伤患者,根据治疗期间是否进展为脓毒症将患者分为脓毒症组(77例)与非脓毒症组(128例)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两组血清miR-96-5p、miR-486-5p相对表达水平,检测血清炎症细胞因子[C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白细胞介素6(IL-6)]水平,采用Pearson相关性分析脓毒症组血清miR-96-5p、miR-486-5p表达与炎症细胞因子的相关性。进一步分析创伤后脓毒症患者的预后,根据住院期间的存活结局分为存活组与死亡组;采用多因素Logistic回归模型分析创伤后脓毒症患者死亡的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-96-5p、miR-486-5p对创伤后脓毒症患者死亡的预测价值。结果 脓毒症组血清miR-96-5p相对表达水平低于非脓毒症组(P<0.05),miR-486-5p相对表达水平高于非脓毒症组(P<0.05)。脓毒症组血清CRP、PCT、IL-6水平高于非脓毒症组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,脓毒症组miR-96-5p相对表达水平与CRP、PCT、IL-6水平呈负相关(P<0.05),miR-486-5p相对表达水平与CRP、PCT、IL-6水平呈正相关(P<0.05)。77例创伤后脓毒症患者生存67例,死亡10例。多因素Logistic回归分析显示,miR-96-5p相对表达水平升高为创伤后脓毒症患者死亡的保护因素(P<0.05),损伤严重度评分(ISS)升高、miR-486-5p相对表达水平升高为创伤后脓毒症患者死亡的危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,ISS、miR-96-5p、miR-486-5p三者联合预测创伤后脓毒症患者死亡的曲线下面积为0.860,灵敏度和特异度分别为0.900、0.821,联合检测的预测效能高于单独检测。结论 创伤后脓毒症患者血清miR-96-5p低表达、miR-486-5p高表达,且机体炎症细胞因子水平上升;miR-96-5p、miR-486-5p表达与炎症反应密切相关,二者也是患者死亡的影响因素,对其预后具有一定的预测价值,可为临床早期评估病情及预后提供参考依据。

miR-2467、miR-96-5p在妊娠期糖尿病中的临床意义

目的:探讨微小核糖核酸-2467(miR-2467)、miR-96-5p在妊娠期糖尿病(GDM)中的临床意义。方法:纳入108例GDM住院患者作为GDM组,另选取同期产检的糖耐量正常孕妇82例为对照组。比较2组血清miR-2467、miR-96-5p相对表达量以及空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2hFBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),分析miR-2467、miR-96-5p与上述血糖指标的相关性。采用Logistic多元回归模型分析GDM发生的危险因素,绘制受试者工作特征曲线,分析miR-2467、miR-96-5p评估GDM的曲线下面积(AUC)。结果:GDM组血清miR-2467表达、FBG、2hPG、HbA1c水平及HOMA-IR高于对照组,miR-96-5p表达低于对照组(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示血清miR-2467表达与FBG、2hPG、HbA1c、HOMA-IR呈正相关,血清miR-96-5p表达与上述4项指标呈负相关(P均<0.05)。Logistic多元回归分析示孕早期BMI增长≥1.73kg/m^(2)、孕中期BMI增长≥4.88kg/m^(2)、糖尿病家族史、miR-2467≥3.44是GDM发生的危险因素,miR-96-5p≥1.95是GDM发生的保护因素(P<0.05)。血清miR-2467联合miR-96-5p评估GDM的AUC为0.865,敏感度、特异度分别为91.50%、81.50%。结论:miR-2467、miR-96-5p与GDM患者血糖指标及HOMA-IR存在相关性,对评估GDM具有一定意义。

七氟烷调控miR-96-5p/SIK1轴对胃癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨七氟烷调控微小RNA(miR)-96-5p/盐诱导激酶1(SIK1)轴表达对胃癌(GC)细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法 以0、1%、2%、3%、4%、5%v/v浓度的七氟烷处理GC细胞SGC7901细胞,CCK-8法检测SGC7901细胞增殖情况;将SGC7901细胞随机分为对照组(正常培养)、七氟烷组(3%v/v七氟烷干预)、七氟烷+miR-NC组(转染miR-NC后再以3%v/v浓度的七氟烷干预48小时)、七氟烷+miR-96-5p mimics组(转染miR-96-5p mimics后,以3%v/v浓度的七氟烷干预48小时),RT-qPCR检测各组细胞中miR-96-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室实验检测细胞侵袭;Western blot检测细胞磷酸化盐诱导激酶1(SIK1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-96-5p和SIK1的靶向关系。结果 与0浓度组相比,SGC7901细胞增殖抑制率在1%、2%、3%、4%、5%v/v浓度七氟烷处理下以剂量依赖性的方式显著增加(P<0.05),选取3%v/v浓度七氟烷进行后续实验;与对照组比较,七氟烷组细胞miR-96-5p表达水平、迁移、侵袭以及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低,凋亡率和SIK1蛋白表达水平显著增加(P<0.05);激活miR-96-5p表达减弱了七氟烷对SGC7901细胞迁移和侵袭的抑制能力,降低细胞凋亡率(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果表明miR-96-5p可靶向调节SIK1表达。结论 七氟烷可能通过下调miR-96-5p、上调SIK1抑制GC SGC7901细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

非酒精性脂肪性肝病患者血清miR-183-5p和miR-96-5p水平变化及其临床意义探讨

目的 探讨非酒精性脂肪肝病(NAFLD)患者血清miR-183-5p和miR-96-5p水平变化及其临床意义。方法 2019年11月~2022年1月我院诊治的NAFLD患者62例和同期性别和年龄相匹配且无过量饮酒史的健康体检者80例,采用实时荧光定量RT-PCR法检测血清miR-183-5p和miR-96-5p水平,应用多因素Logistic回归分析NAFLD发生的危险因素,应用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评估指标诊断严重脂肪性肝病的效能。结果 NAFLD患者BMI、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、空腹血糖(FPG)和血脂水平显著高于健康人(P<0.05),血清miR-183-5p和miR-96-5p水平分别为(0.8±0.2)和(1.2±0.3),显著低于健康人【分别为(1.4±0.4)和(2.3±0.6),P<0.05】;17例重度NAFLD患者血清miR-183-5p和miR-96-5p水平分别为(0.4±0.1)和(0.8±0.2),显著低于21例中度患者【分别为(0.8±0.2)和(1.2±0.3),P<0.05】或24例轻度患者【分别为(1.1±0.3)和(1.5±0.4),P<0.05】;经Logistic回归分析结果显示,BMI、HOMA-IR、FPG、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇以及血清miR-183-5p和miR-96-5p低水平是NAFLD发生的独立危险因素(P<0.05);应用血清miR-183-5p和miR-96-5p联合检测评估重度NAFLD发生的AUC为0.821,显著高于两项指标单独评估的0.713或0.718(P<0.05),其准确度、灵敏度和特异度分别达到77.4%、76.5%和77.8%。结论NAFLD患者血清miR-183-5p和miR-96-5p呈低水平,其水平越低,可能预示着肝内脂肪变程度越重,即它们的血清水平可在一定程度上反映疾病的严重程度,可作为诊断和评估病情的分子标志物,值得进一步研究。

EZAL-MY96乳酸菌种菌株分离鉴定

目的 :对引进法国罗地亚EZAL -MY96直投式酸奶发酵剂 (DVS)进行菌株分离鉴定。方法 :利用半选择性培养基进行发酵剂菌株分离 ,并采用糖发酵实验和RAPD指纹图谱进行鉴定。结果 :EZAL -MY96中球菌的平板菌落与光镜显微观察、糖发酵实验和RAPD指纹图谱均只有 1种情况 ,而杆菌均有 2种情况。结论 :从EZAL -MY96菌种中共分离到 3株菌 ,其中 1株鉴定为嗜热链球菌 ,1株为德氏乳杆菌保加利亚亚种 ,另

EZAL-MY96型发酵剂中3株菌株的生化特性分析

对EZAL-MY96发酵剂中3个乳酸菌菌株的生化特性进行了分析。测定3株菌株的生长曲线;采用pH计、乳酸测定试剂盒、硫酸苯酚法、黏度计和气相色谱仪分别对3株菌在pH变化、合成乳酸、多糖、黏度和乙醛进行了测定与分析。结果表明,乳酸是影响发酵液pH值的主要物质,多糖质量分数不是影响发酵液黏度的主要因素,3株菌株均是菌数达到对数生长期最高点时合成的乙醛量达到最大值。

新生儿脓毒血症血清miR-16-5p、miR-96-5p水平与疾病严重程度和机体炎性反应的相关性研究

目的探讨血清微小RNA-16-5p(miR-16-5p)和微小RNA-96-5p(miR-96-5p)水平与新生儿脓毒血症(NS)疾病严重程度和机体炎性反应的相关性。方法选择2020年3月—2022年3月海南现代妇女儿童医院收治的52例NS患儿作为脓毒血症组,同时选择同期住院的52例非脓毒血症患儿作为对照组。定量检测两组血清miR-16-5p、miR-96-5p、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)和白介素6(IL-6)含量,收集两组基线资料与入院24 h内临床检查结果。采用双变量Pearson相关性检验分析血清miR-16-5p、miR-96-5p水平与疾病严重程度和炎性反应指标的相关性。结果脓毒血症组格拉斯哥昏迷评分(GCS)、急性生理学和慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭估计评分(SOFA)、白细胞计数(WBC)、血肌酐、PCT、CRP和IL-6水平显著高于对照组,而血清白蛋白水平显著低于对照组(均P<0.05)。脓毒血症组血清miR-16-5p表达水平显著高于对照组,而miR-96-5p表达水平显著低于对照组(均P<0.05)。miR-16-5p高表达者的GCS评分、APACHEⅡ评分、SOFA评分、WBC、PCT、CRP和IL-6水平均显著高于miR-16-5p低表达者(均P<0.05)。miR-96-5p高表达者的APACHEⅡ评分、SOFA评分、WBC、PCT、CRP和IL-6水平均显著低于miR-96-5p低表达者(均P<0.05)。脓毒血症组血清miR-16-5p水平与GCS评分、APACHEⅡ评分、SOFA评分、WBC、PCT、CRP和IL-6水平呈正相关(均P<0.05),而血清miR-96-5p水平与APACHEⅡ评分、SOFA评分、WBC、PCT、CRP和IL-6水平呈负相关(均P<0.05)。结论NS患儿血清miR-16-5p水平升高,miR-96-5p水平降低,与疾病严重程度和机体炎性反应相关,提示miR-16-5p和miR-96-5p可作为NS早期诊断和病情评估的标志物。

高糖环境下miR-96-5p对人角质形成细胞的影响及相关机制研究

目的探讨高糖环境下miR-96-5p对人角质形成细胞的影响及相关机制。方法分离人角质形成细胞以50 mmol/L葡萄糖终浓度模拟高糖环境。通过转染miR-96-5p模拟物和抑制剂构建miR-96-5p过表达和抑制组,分为空白组、正常培养组、高糖培养组、高糖培养+miR-96-5p minic组、高糖培养+miR-96-5p inhibitor组。采用划痕实验观察细胞迁移水平,采用CCK-8实验观察细胞增殖水平,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。采用Western blot检测BNIP3、FAK、FAK磷酸化蛋白(p-F AK)蛋白的表达水平。结果50 mmol/L高糖处理后角质细胞折光性降低,同时细胞中出现空洞。与空白组和正常培养组比较,高糖培养组、高糖培养+miR-96-5p minic组和高糖培养+miR-96-5p inhibitor组的各时间点细胞迁移量明显更低(P<0.05),且高糖培养+miR-96-5p inhibitor组细胞迁移量明显高于高糖培养组和高糖培养+miR-96-5p minic组(P<0.05);与空白组和正常培养组比较,高糖培养组、高糖培养+miR-96-5p minic组和高糖培养+miR-96-5p inhibitor组的各时间点细胞增殖量明显更低(P<0.05),且高糖培养+miR-96-5p inhibitor组细胞增殖明显高于高糖培养组和高糖培养+miR-96-5p minic组(P<0.05);与空白组和正常培养组比较,高糖培养组、高糖培养+miR-96-5p minic组和高糖培养+miR-96-5p inhibitor组的各时间点细胞侵袭量明显更低(P<0.05),且高糖培养+miR-96-5p inhibitor组细胞侵袭明显高于高糖培养组和高糖培养+miR-96-5p minic组(P<0.05);与空白组和正常培养组比较,高糖培养组、高糖培养+miR-96-5p minic组和高糖培养+miR-96-5p inhibitor组的各时间点BNIP3、FAK、p-F AK蛋白表达量明显更低(P<0.05),且高糖培养+miR-96-5p inhibitor组的BNIP3、FAK、p-F AK蛋白表达量明显高于高糖培养组和高糖培养+miR-96-5p minic组(P<0.05)。结论miR-96-5p可通过靶向调控BNIP3/FAK信号通路的表达从而影响角质细胞的增殖、侵袭和迁移能力,进而发挥影响糖尿病足创面愈合的作用。

miR-96-5p靶向PTEN激活PI3K-Akt信号通路抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭实验研究

目的:探讨miR-96-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、侵袭和增殖的作用及分子机制。方法:在人NSCLC细胞系A549中转染miR-96-5p类似物(miR-96-5p mimics)、阴性对照(NC mimics)或miR-96-5p抑制剂(miR-96-5p inhibitor)、阴性对照(NC inhibitor),通过CCK-8法检测细胞的增殖能力,通过划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞的迁移侵袭能力;采用荧光素酶报告基因实验检测miR-96-5p与磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)启动子区DNA的结合;采用蛋白质免疫印迹实验检测miR-96-5p对PTEN/PI3K/Akt信号通路的调控作用。结果:抑制miR-96-5p, NSCLC细胞的迁移、侵袭和增殖能力降低,过表达miR-96-5p促进NSCLC细胞的迁移、侵袭和增殖(均P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-96-5p能与PTEN启动子区DNA结合;蛋白质免疫印迹实验结果表明,抑制miR-96-5p, PTEN表达升高、p-Akt的表达降低,过表达miR-96-5p后,PTEN表达降低、p-Akt的表达升高(均P<0.05),且沉默PTEN的表达后,逆转了敲低miR-96-5p对p-Akt的抑制作用(均P<0.05)。结论:miR-96-5p通过抑制PTEN,激活PI3K-Akt信号通路,促进NSCLC细胞的迁移、侵袭和增殖。

大黄素通过miR-96-5p靶向叉头蛋白K2减轻狼疮性肾炎肾小球系膜细胞的损伤

目的:探讨大黄素通过miR-96-5p靶向叉头蛋白K2(FOXK2)减轻狼疮性肾炎肾小球系膜细胞(MCs)损伤。方法:检测MRL/faslpr小鼠(狼疮性肾炎肾组)和MRL/MPJ小鼠(对照组)24 h尿蛋白以及血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)含量。MCs分离纯化后分为:MCs组(未做任何处理的MCs);L-EMO组(10μmol/L大黄素处理MCs)、M-EMO组(25μmol/L大黄素处理MCs)、H-EMO组(50μmol/L大黄素处理MCs)、H-EMO+miR-96-5p-NC组(50μmol/L大黄素处理MCs后转染miR-96-5p-NC)、HEMO+miR-96-5p-minic组(50μmol/L大黄素处理MCs后转染miR-96-5p-minic)。双荧光素酶报告基因实验验证miR-96-5p和FOXK2的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-96-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测FOXK2以及凋亡相关蛋白表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测MCs炎性因子水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定MCs活力;Annexin-V FITC/PI双染法检测MCs凋亡情况。结果:与对照组相比,狼疮性肾炎组24 h尿蛋白含量、血清BUN和Scr水平显著升高(P<0.05);与MCs组相比,L-EMO组、MEMO组、H-EMO组miR-96-5p的表达量、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、A450值、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白水平依次显著下降(P<0.05),FOXK2水平、细胞凋亡率、Bcl-2相关的X基因(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白水平依次显著升高(P<0.05),大黄素作用效果呈现剂量依赖性;与H-EMO组、H-EMO+miR-96-5p-NC组相比,H-EMO+miR-96-5p-minic组显著升高miR-96-5p的表达量、炎性因子水平、A450值以及Bcl-2蛋白水平(P<0.05),显著降低FOXK2水平以及细胞凋亡率(P<0.05)。结论:大黄素通过下调miR-96-5p进而上调FOXK2,从而减轻狼疮性肾炎MCs损伤。

miR-96-5p通过下调肌动蛋白结合蛋白1促进卵巢癌干细胞顺铂耐药性

目的 探索微小核糖核酸(miRNA)miR-96-5p通过调控肌动蛋白结合蛋白1(profilin 1,PFN1)对卵巢癌干细胞(SiHa细胞)顺铂耐药的分子机制。方法 采用RT-qPCR检测miR-96-5p表达水平;将SiHa细胞置于不同浓度顺铂的培养基中,构建顺铂耐药细胞SiHa/DDP;采用Western blot检测蛋白的表达水平;双荧光素酶报告实验验证miR-96-5p与PFN1的靶向关系;MTT、Transwell和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡;成球实验检测细胞的成球能力。结果 miR-96-5p在SiHa细胞中高表达,且在SiHa/DDP细胞中的表达最高;敲降miR-96-5p可抑制SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球能力并促进细胞凋亡;PFN1是miR-96-5p的潜在靶基因,过表达miR-96-5p通过下调PFN1促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球,抑制细胞凋亡。结论 miR-96-5p通过靶向调控PFN1,促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭及其干细胞成球并抑制凋亡,从而增强SiHa/DDP细胞对顺铂的耐药性。

糖能兼用甘蔗新品种粤糖96-86的选育与种性分析

粤糖96．86是广州甘蔗糖业研究所以粤糖85—177为母本、崖城野生蔗F2代粤糖74—141为父本杂交育成的糖能兼用品种。多年新、宿41点次试验，粤糖96-86蔗茎产量和含糖量分别为109．25t／hm^2和16．91t／hm^2，比ROC10增产33．8％，增糖36．9％；11月-翌年1月平均甘蔗蔗糖分15．47％，比ROC10提高0．35个百分点。有效茎数和茎长是影响蔗茎产量的主要因素和重要因素，对蔗茎产量贡献最大。高产栽培上应侧重有效茎数和提高植株的高度。产蔗量75～105t／hm。的较合理群体结构为：有效茎数在5．55万～6．75万条／hm^2，茎长在240—265cm，茎径在2．79～3．17cm；产蔗量105～135t／hm^2的较合理群体结构为：有效茎数在6．75万-7．95万条／hm^2，茎长在260～285cm，茎径在2．77—3．11cm。

温度对双低两用核不育水稻96-5-2S与培矮64S育性的影响

在自然变温、人工控温及冷水灌溉条件下 ,比较研究了温度对双低两用核不育水稻 96 -5 -2 S与两用核不育水稻培矮6 4 S育性影响的差异。结果表明 :1当它们在雄性育性转换温敏感期遇到 1～ 1 2 d平均自然日均温 2 3.0～ 2 3.8℃的低温时 ,96 -5 -2 S表现不育 ,套袋自交结实率为 0 ,而培矮 4 6 S可育 ,套袋自交结实率为 0 .1 %～ 4 .5 % ;2在它们雄性育性转换温敏感期用 2 2℃恒温处理 5 d,96 -5 -2 S败育彻底 ,套袋自交结实率为 0 ,而培矮 6 4 S可育 ,套袋自交结实率为 1 0 .7% ;用1 7℃恒温处理 6 d,96 -5 -2 S与培矮 6 4 S均可育 ,但 96 -5 -2 S套袋自交结实率 ( 6 .8% )显著高于培矮 6 4 S( 2 .5 % ) ;3在它们雄性育性转换温敏感期用不同温度的冷水串灌 1 5 d,水深维持在 2 0 cm左右 ,当水温为 2 2～ 2 2 .5℃时 ,96 -5 -2 S不育 ,结实率为 0 ,而培矮 6 4 S可育 ,结实率为 1 8.5 % ;当水温为 1 9.5～ 2 1 .5℃时 ,96 -5 -2 S与培矮 6 4 S均可育 ,但 96 -5 -2 S结实率( 2 .5 %～ 4 5 .1 % )显著或极显著低于培矮 6 4 S( 5 0 .4 %～ 5 6 .9% )。以上结果说明 :导致双低两用核不育水稻 96 -5 -2 S雄性不育的起点温度与导致其生理不育的下限温度均低 ,其不育性比培矮 6 4 S更稳定 ,耐寒性比培矮 6 4

热休克蛋白gp96-肽复合物的提取及纯化

目的:建立从H22肝癌细胞中提取、纯化热休克蛋白gp96肽复合物的方法。方法:①制备H22肝癌细胞蛋白:将H22肝癌细胞裂解、离心、过滤及透析后获得。②gp96肽复合物的纯化:上述可溶性H22肝癌细胞蛋白经分级硫酸铵盐析后,依次用ConASepharose亲和层析、SephadexG25更换缓冲液及DEAESephacel离子交换层析分离纯化。③gp96肽复合物的鉴定和浓度测定:所得蛋白经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernblot进行蛋白分子量及性质鉴定,Lowry法测定蛋白浓度。结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染鉴定为单一带,分子量为96kD;Westernblot结果证实为HSPgp96。每20ml压积H22细胞最终获得1mg的HSPgp96。结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度HSPgp96肽复合物。

microRNA-96-5p靶向调控羊驼黑色素细胞中MITF基因的表达

旨在预测并验证调控小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)基因表达的关键miRNA。使用在线软件对与MITF具有靶向关系的miRNAs进行预测。在羊驼黑色素细胞中,利用荧光定量PCR检测过表达和抑制表达miR-96-5p后MITF基因的表达量;通过免疫细胞化学技术对过表达和抑制表达miR-96-5p的细胞进行MITF特异抗体的染色。结果表明,miR-96-5p是调控MITF表达的一个关键miRNA,经荧光定量PCR、免疫细胞化学技术检测,当过表达miR-96-5p后,MITF mRNA水平不变,但其下游基因表达量极显著降低(P<0.01),MITF蛋白水平表达量与其下游基因的蛋白水平表达量全部极显著低于空白组(P<0.01),当抑制表达miRNA-96-5p后,MITF mRNA水平不变,但其下游基因表达量显著升高(P<0.01),MITF蛋白水平表达量与其下游基因的蛋白水平表达量全部极显著高于空白组(P<0.01)。miR-96-5p可以靶向结合MITF基因,在MITF转录后水平发挥调控作用,抑制MITF的转录,抑制MITF及其下游基因TYR、TYRP1、TYRP2的表达。

96-Ⅱ喜树叶片高频率植株再生体系建立

用96-Ⅱ喜树无菌苗叶片为外植体,筛选出了96-Ⅱ喜树最佳愈伤组织诱导培养基为WPM+6-BA1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+2,4-D0.1 mg/L,愈伤组织诱导率95%以上;愈伤组织分化培养基为WPM+6-BA0.5 mg/L,分化率达90%;最佳生根培养基为WPM+IBA0.8 mg/L,生根率为94%以上,平均根数为4～8条;移栽成活率达到95%以上。

在线超声提取96-孔盘技术高通量快速测定全叶马兰中果聚糖成分

采用在线动态超声提取装置对全叶马兰果聚糖成分进行提取,用效应面方法优化了在线提取条件。提取溶剂为纯水,待测样品为5 mg,提取条件为超声功率是496 W,溶剂流速0.63 mL/min,溶剂体积4.69mL;用96-孔盘联合酚硫酸程序对果聚糖进行高通量快速检测,果聚糖的加标回收率为98.3%～105.7%,相对标准偏差为2.9%～4.1%,全叶马兰果聚糖含量为17.60%。15 min内可分析24个样品。试剂用量较常规比色分析减少了95%。本方法快速、准确,特别适合天然植物资源生态学研究中数以百计的大样本统计调查。

GFP标记的植物促生菌B96-Ⅱ-gfp的定殖能力研究

采用绿色荧光蛋白基因标记技术研究了植物促生菌B96-Ⅱ的标记菌B96-Ⅱ-gfp在盆栽黄瓜土壤中的时间、空间定殖动态以及在黄瓜植株上的分布。研究表明:B96-Ⅱ-gfp在土壤中具有持久的定殖能力,接种180d时在自然土和黄瓜枯萎菌病土中的定殖数量分别为2.7×104cfu·g-1和6.6×104cfu·g-1,360d时在土壤中仍可检测到B96-Ⅱ-gfp的存在。B96-Ⅱ-gfp可在盆栽植株生长土壤的表层(0～4cm)、中层(4～8cm)和底层(8～12cm)定殖,定殖数量随土壤深度的增加而增加。此外,B96-Ⅱ-gfp还可在黄瓜的根、茎和叶上定殖,根部定殖的数量(7.2×104cfu·g-1)显著高于茎部和叶部定殖的数量;黄瓜植株体内定殖的数量多于体表定殖的数量。对土壤中可培养的3大微生物类群影响的研究表明:B96-Ⅱ-gfp对土壤中真菌数量具有显著抑制作用,而对细菌和放线菌数量则没有明显影响。防病促生试验表明:B96-Ⅱ-gfp可增加黄瓜株高、鲜重和干重,对黄瓜枯萎病有一定的防治效果,且与未标记菌株B96-Ⅱ的防病促生作用无显著差异。

甘蔗创新亲本崖城82-96、崖城84-153和崖城90-3

本文介绍了三个甘蔗创新亲本崖城８２－９６、崖城８４－１５３和崖城９０－３的亲系、血缘，开花情况、锤度、抗逆性等主要特点，杂交利用情况以及各亲本的具体利用方法。同时建议育种单位在利用野生种低世代材料的过程中，要加强亲本创新研究。