EZH2抑制剂对恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗、Th细胞分化及PD1/PD-L1表达的作用机制

目的探究Zeste基因增强子同源物(EZH)2抑制剂对恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗、Th细胞分化及程序性死亡(PD)1/PD1配体(PD-L1)表达的作用机制。方法取对数生长恶性淋巴瘤放疗抵抗细胞株将其分为恶性淋巴瘤(A)组、多柔比星(B)组、EZH2抑制剂(C)组、EZH2抑制剂联合PD1/PD-L1抑制剂(D)组,酶联免疫吸附试验(ELISA)及流式细胞仪检测Th细胞分化相关因子,Western印迹检测PD1/PD-L1蛋白表达,Hoechst33258染色法、噻唑蓝(MTT)法及小室法检测恶性淋巴瘤细胞活性。结果与A组相比,B、C、D组细胞凋亡率、干扰素(INF)-γ水平明显升高,细胞增殖率、侵袭数量、白细胞介素(IL)-4水平、PD1、PD-L1蛋白表达明显降低(P<0.05),且C组比B组变化更明显,D组比C组变化更明显(P<0.05)。结论EZH2抑制剂可显著抑制恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗,有效调控Th细胞分化,并抑制PD1/PD-L1蛋白表达。

奥利司他联合EZH2抑制剂GSK126对胰腺癌细胞脂质代谢重编程的影响

目的:阐明果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(EZH2)抑制剂抗胰腺癌疗效不理想的可能机制,为探索新的胰腺癌治疗方案提供依据。方法:采用不同浓度(0~50μmol·L-1)EZH2抑制剂GSK126分别处理胰腺癌PANC-1细胞、CFPAC-1细胞和胰腺转移癌SW1990细胞,CCK-8法检测各组细胞存活率。将3种细胞各分为对照组和GSK126组,GSK126孵育48 h后采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,油红O染色观察各组细胞中脂滴形成情况,检测各组细胞中甘油三酯(TG)水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中凋亡基因含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1、3、7、9(Caspase-1、Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9)和血管内皮生长因子A(VEGFA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及干性标志基因CD133、CD24和CD44 mRNA表达水平,以及脂代谢相关基因脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶a(ACACA)、柠檬酸合成酶(CS)、ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)和酰基辅酶A合成酶短链家族成员2(ACSS2)mRNA表达水平。将3种细胞各分为对照组、GSK126组、FASN抑制剂奥利司他(Orlistat)组和GSK126+Orlistat组,细胞孵育48 h后,CCK-8法检测各组细胞存活率,计算两药联合指数(CI),油红O染色观察各组细胞中脂滴形成情况,检测各组细胞中TG水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,RT-qPCR法检测各组细胞中凋亡基因Caspase-1、Caspase-3、Caspase-7和Caspase-9及干性基因CD133、CD24和CD44 mRNA表达水平。结果:GSK126呈浓度依赖性抑制胰腺癌细胞增殖。与对照组比较,GSK126组3种细胞凋亡率和凋亡基因mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),GSK126组SW1990细胞中VEGFA和PANC-1细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显降低(P<0.05),3种细胞中CD133及CFPAC-1和SW1990细胞中CD24 mRNA表达水平均明显升高(P<0.01)。与对照组比较,GSK126组3种细胞中脂滴数量明显增加,TG水平和FASN mRNA表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),其他脂代谢相关基因也有不同程度升高。与对照组、GSK126组和Orlistat组比较,GSK126+Orlistat组细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),经计算两药CI均<1,具有协同作用。与对照组、GSK126组和Orlistat组比较,GSK126+Orlistat组细胞中脂滴数量明显减少;与对照组和GSK126组比较,GSK126+Orlistat组细胞中TG水平明显降低(P<0.01),凋亡基因和干性基因mRNA表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与对照组、GSK126组和Orlistat组比较,GSK126+Orlistat组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:GSK126在抑制胰腺癌细胞增殖的同时可诱发细胞内脂代谢重编程,削弱了其抗癌效果,联合使用FASN抑制剂Orlistat可部分逆转该效应,协同抑制细胞增殖,明显增强细胞凋亡并降低干性基因表达。

EZH2抑制剂影响膀胱癌细胞活性及侵袭能力的研究

目的:探讨EZH2抑制剂GSK126对膀胱癌细胞活性及侵袭能力的影响。方法:通过膀胱癌细胞活性实验以及小鼠膀胱癌模型验证GSK126对膀胱癌细胞活性及小鼠膀胱癌肿瘤组织生长的影响,通过RT-PCR和蛋白质印迹法检测膀胱癌细胞上皮间质标记蛋白表达量来验证GSK126对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。结果:细胞活性实验证实GSK126可以有效抑制膀胱癌细胞的活性和小鼠膀胱癌组织的生长。病理检查显示GSK126降低了小鼠膀胱癌组织的侵袭能力。体外实验显示,GSK126升高CDH1、UPK3KA的表达量,降低CDH2、ZEB1的表达量。结论:EZH2抑制剂GSK126在体内及体外实验中可抑制膀胱癌细胞的活性,降低膀胱癌细胞浸润和侵袭能力。

EZH2抑制剂联合顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨EZH2抑制剂UNC1999联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法传代培养人肺癌A549细胞系,取生长良好的传代细胞分为对照组、联合用药组、顺铂组和UNC1999组。所有组均给予RPMI 1640培养液及10%的胎牛血清培养,对照组不加药液,联合用药组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L UNC1999药液及2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;UNC1999组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的UNC1999药液;采用MTT比色法检测各组细胞增殖抑制率中IC50及联合指数(CI)。Western印迹法检测各组相关凋亡蛋白及细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK的表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,UNC1999组、顺铂组、联合用药组细胞增殖均受到不同程度抑制(P<0.05)。各组细胞增殖抑制作用存在剂量-时间依赖关系,且UNC1999与顺铂存在协同作用。UNC1999组、顺铂组、联合用药组与对照组比较细胞凋亡差异显著(P<0.05)。UNC1999组、顺铂组、联合用药组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显升高,p-ERK蛋白表达明显降低,联合用药组Bcl-2表达低于对照组(P<0.05)。结论 EZH2特异性抑制剂UNC199可能通过抑制MAPK-ERK细胞通路起到抑制肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,与顺铂单药或联合均具有协同效应。

EZH2抑制剂对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

目的探讨EZH2(enhancer of zeste homolog 2)抑制剂对宫颈癌HeLa细胞增殖与转移能力的抑制作用。方法将EZH2抑制剂GSK343作用于体外培养的人宫颈癌HeLa细胞,用MTT及克隆形成率实验检测细胞生长和增殖的变化,细胞划痕实验测定细胞迁移能力的变化,Western blot检测上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达;同时以等体积GSK343溶剂DMSO为对照。结果 MTT结果显示,GSK343对HeLa细胞的生长具有明显抑制作用,呈时间依赖性;克隆形成和细胞划痕实验显示,GSK343能显著抑制HeLa细胞的增殖及迁移能力;Western blot结果显示,GSK343处理后细胞上皮标志蛋白E-cadherin表达明显增高,间质标志蛋白N-cadherin表达明显减低。结论 EZH2抑制剂GSK343可抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖与迁移,其机制之一可能是通过抑制HeLa细胞上皮间质转化过程来实现的。

EZH2抑制剂与吉非替尼联合应用在EGFR-TKIs耐药肺癌细胞中的作用研究

背景与目的肺癌是危害身体健康的常见恶性肿瘤之一。随着表观遗传学的发展,研究者发现Zeste基因增强子同源物基因2(enhancer of Zeste homolog 2, EZH2)在肺癌中高表达且其表达量与预后息息相关,与此同时EZH2抑制剂也被发现能够提升肿瘤细胞对多种抗肿瘤药物的敏感性。本研究的目的在于探讨EZH2抑制剂与吉非替尼(gefitinib)联合应用,对耐吉非替尼细胞的增殖、凋亡及迁移的影响。方法以PC9吉非替尼敏感细胞和PC9/AB2吉非替尼耐药细胞为研究对象,应用CCK-8及EdU实验检测联合用药对于细胞活性及增殖的影响;通过划痕及Transwell小室检测联合用药对于细胞迁移能力的影响;并应用流式细胞学检测联合用药对于细胞凋亡的影响;并通过Western blot观察联合用药对EZH2及表皮生长因子(epidermal growth factor receptor, EGFR)信号通路相关蛋白的作用。结果在吉非替尼耐药细胞PC9/AB2细胞中,联合EZH2抑制剂GSK343与吉非替尼能够显著抑制耐药细胞的活性,降低细胞的迁移能力并诱导耐药细胞的凋亡。同时,联合用药也能够显著抑制EZH2表达及EGFR蛋白的磷酸化。结论 EZH2抑制剂GSK343与吉非替尼联合应用能够克服PC9/AB2对吉非替尼的耐药作用,此研究也提示协同治疗在肺癌EGFR-TKIs耐药逆转中具有一定的作用。

EZH2抑制剂GSK126对Neuro-2a细胞增殖分化的影响及其可能机制

神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）是常见的儿童恶性肿瘤,在手术、放化疗及介入等多种手段综合治疗下,总体疗效仍然极差。近年来研究发现,果蝇zeste基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2,EZH2）能抑制相关抑癌基因,明显增加神经母细胞瘤发生、发展的风险。GSK126是一种新型的选择性EZH2抑制剂,其在实体瘤方面的药效探究目前相对较少。

EZH2抑制剂DZNeP对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响

目的探讨EZH2抑制剂DZNeP对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响。方法取对数生长期乳腺癌细胞MCF-7、MDA—MB-231，经2．5、5、10、20μm0L／LDZNeP处理后（设不加DZNeP仅添加完全培养基组为对照组），采用四甲基偶氮唑盐比色法检测各组24、48、72h的增殖抑制率，Annexin V-FITC／PI流式细胞术检测各组24、48h的凋亡率，收集20μm0L／LDZNeP处理72h的MCF-7、MDA．MB-331细胞，采用Western印迹检测磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B（PBK／Akt）通路和Wnt/β-连接素（β-catenin）通路中的蛋白变化。结果DZNeP在2．5～20μmoL／L范围内可抑制MCF-7和MDA—MB-231细胞增殖，且与对照组相比增殖抑制率升高（P〈0．05），该抑制效应呈浓度和时间依赖性；与对照组相比，DZNeP处理组的凋亡率均升高（P〈0．05），DZNeP各浓度处理48h的凋亡率均高于24h（P〈0．05）；P13K／Akt通路中，与对照组相比，20仙m0L／LDZNeP处理72h后MCF-7、MDA—MB-231细胞的PTEN水平均升高，Akt水平均降低（P〈0．05）；而在Wnt／β—catenin通路上，20μmol／LDZNeP处理72h后两细胞株中的B—catenin、CyclinD1和C-myc水平均降低（P〈0．05）。结论DZNeP可抑制人乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡，可能与抑制肿瘤恶性行为相关的PBK／Akt、WnT/β-catenin通路有关，在乳腺癌治疗上有一定应用前景。

EZH2抑制剂EPZ-6438对胃癌细胞侵袭和转移的作用研究

目的探讨EZH2抑制剂EPZ-6438对胃癌细胞侵袭和转移的作用。方法通过Transwell筛选侵袭力高的胃癌细胞HGC-27作为研究对象,根据前期MTT实验选择EPZ-6438的作用浓度为0、5、10、15μmol/L,用Transwell试验和细胞划痕实验检测EPZ-6438对胃癌细胞HGC-27侵袭和转移的影响。Western Blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin以及基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达。结果Transwell试验和细胞划痕实验表明,随着EPZ-6438浓度的增加,与对照组相比,胃癌细胞HGC-27的侵袭和转移能力明显下降。Western Blot实验结果表明,与对照组相比,胃癌细胞HGC-27中E-cadherin的表达升高,而N-cadherin和Vimentin的表达降低,MMP-2和MMP-9的表达也呈浓度梯度降低。结论EZH2抑制剂EPZ-6438能有效抑制胃癌细胞HGC-27的侵袭和转移,其可能是通过抑制胃癌细胞HGC-27的上皮间质转化(EMT)来实现的。

Zeste同源物2增强子及其抑制剂在肿瘤及自身免疫性疾病中的研究进展

Zeste同源物2增强子(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)属于多梳蛋白家族(polycomb group,PcG)的重要成员,是构成多梳抑制蛋白复合物2(polycomb repressive complex 2,PRC2)的催化亚基之一,其通过对组蛋白H3上第27位赖氨酸进行三重甲基化来调控下游靶基因的表达,也可通过非PRC2依赖方式调控基因表达。EZH2功能强大,参与细胞增殖、凋亡等,并且在肿瘤以及自身免疫疾病的发生发展中发挥重要作用。本文阐述了EZH2的结构和在不同疾病模型中的作用机制,以及在基础实验及临床试验中靶向EZH2治疗的研究进展。未来,EZH2小分子抑制剂不仅可能应用于肿瘤治疗,还有望成为治疗自身免疫疾病的新方法。

Zeste基因增强子同源物2抑制剂减轻氧糖剥夺/再灌注诱导的神经元氧化应激和铁死亡

目的探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)抑制剂GSK126在神经元缺血-再灌注损伤中的作用及机制。方法采用海马神经元HT22细胞制备氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型。细胞分为正常对照组(Control组)、OGD/R模型组(OGD/R组)和OGD/R模型+低、中、高浓度EZH2抑制剂组(OGD/R+GSK1260.5、1、5μmol/L组)。采用CCK-8法、流式细胞术检测各组HT22细胞损伤,相应试剂盒检测细胞氧化应激指标活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比值。通过荧光探针C11 BODIPY 581/591和FerroOrange检测细胞内铁死亡指标脂质过氧化物(Lipid ROS)和Fe^(2+)含量。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印记法(Western blot)实验检测细胞EZH2、NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达。结果与Control组比较,OGD/R组HT22细胞活力降低,细胞死亡率升高,细胞内ROS水平升高,MDA含量增加,GSH/GSSG比值减少,Lipid ROS、Fe^(2+)含量增加,EZH2的mRNA和蛋白表达升高,NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达均降低(P值均<0.05)。与OGD/R组比较,OGD/R+GSK1260.5、1、5μmol/L组HT22细胞活力均升高,细胞死亡率均下降,细胞内ROS水平均下降,MDA含量均减少,GSH/GSSG比值均增加,Lipid ROS、Fe^(2+)含量均减少,EZH2的mRNA和蛋白表达均降低,NRF2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达均升高(P值均<0.05)。结论EZH2抑制剂GSK126可减轻OGD/R诱导的神经元细胞损伤,其机制可能与NRF2/HO-1通路抑制氧化应激和SLC7A11/GPX4通路抑制铁死亡有关。

EZH2及其抑制剂在非小细胞肺癌研究中的进展

肺癌是危害人类健康的常见肿瘤之一,5年生存率仅为15%。目前为止,许多研究发现,表观遗传学在肺癌的发生和发展中起十分重要的作用。Zeste增强子同源物2 (EZH2)是多梳蛋白抑制复合体2(PRC2)的核心成分,能够通过转甲基作用使其对应组蛋白H3第27位点赖氨酸发生三甲基化而抑制靶基因的表达。研究发现EZH2在肺癌等多种恶性肿瘤中呈现高表达且与患者预后密切相关。EZH2主要通过促进肿瘤血管生成、沉默肿瘤抑制基因、抑制肿瘤细胞凋亡等机制在癌症进展中发挥作用。EZH2抑制剂能够增加肿瘤细胞对于化疗药物的敏感性,目前已经开展了EZH2抑制剂相关的临床试验。本文就EZH2和EZH2抑制剂在非小细胞肺癌(NSCLC)研究中的最新进展作一综述。

EZH2抑制剂tazemetostat治疗恶性肿瘤研究进展

tazemetostat(EPZ-6438)是组蛋白甲基转移酶EZH2可口服的直接抑制剂,对多种恶性肿瘤的抗肿瘤活性和预后效果均表现良好。目前FDA已批准tazemetostat上市,批准的适应证为不适用于手术切除的转移性或晚期上皮样肉瘤,是首个获批的EZH2抑制剂。本文主要综述tazemetostat在治疗淋巴瘤和软组织肉瘤等方面的研究进展。

抑制EZH2表达对宫颈癌细胞凋亡的影响及机制

目的观察抑制人类Zest同源增强子(EZH2)表达对宫颈癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法选择人宫颈癌细胞系Siha和C33A细胞,采用MTT法确定EZH2抑制剂3-去氮腺嘌呤(DZNep)在两种细胞中的半数抑制浓度(IC_(50))。将两种细胞分为DMSO组、1/2 IC_(50)组和IC_(50)组,分别以DZNep终浓度0、3、6μmol/L处理Siha细胞各组,以0、2、4μmol/L处理C33A细胞各组。培养48 h后收集各组细胞,采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,采用Western blotting法检测EZH2蛋白、抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-X基因长片段(Bcl-xL)、促凋亡蛋白Bcl-2家族细胞凋亡相互作用因子(Bim)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果在Siha、C33A细胞中,1/2 IC_(50)组、IC_(50)组早期凋亡率均高于DMSO组,IC_(50)组早期凋亡率均高于1/2 IC_(50)组(P均<0. 05)。IC_(50)组EZH2蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05); IC_(50)组Bcl-xL蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组,Bim和Caspase-3蛋白表达均高于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05)。结论利用DZNep抑制宫颈癌细胞EZH2的表达后,能够诱导宫颈癌细胞早期凋亡,其机制可能与下调Bcl-xL蛋白表达并上调Bim和Caspase-3蛋白表达有关。

EZH2在恶性血液病中的表达及临床意义的研究进展

EZH2是一种参与基因表观遗传调控的甲基转移酶,其在多种肿瘤中均存在异常表达。随着EZH2在血液系统恶性肿瘤中研究的不断深入,发现EZH2参与多种恶性血液病的发生发展,在血液系统恶性肿瘤中可能扮演着致癌及抑癌基因的双重角色。近年来,EZH2抑制剂的不断涌现为今后血液系统恶性肿瘤的治疗提供了一个新的选择。本文将对EZH2在各种血液系统肿瘤中的表达及临床意义的最新研究进展作一综述。

DZNep对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨EZH2抑制剂DZNep对裸鼠Eca109细胞移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响。方法:将Eca109细胞接种于15只裸鼠右侧背部皮下构建裸鼠移植瘤模型后分为3组,每组5只,其中2组分别腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-FU)、DZNep治疗2周,另外1组腹腔注射生理盐水作为对照组。观察肿瘤生长情况,采用Western blot检测肿瘤组织中EZH2、SAHH、组蛋白甲基化相关蛋白及mTOR/p70S6K信号通路相关蛋白、Caspase-3、E-cadherin的表达情况,并通过TUNEL法检测肿瘤组织中细胞的凋亡,计算细胞凋亡率。结果:DZNep组肿瘤块质量小于对照组(P<0.05)。与对照组比较,DZNep组肿瘤组织中Caspase-3和E-cadherin表达水平增高,细胞凋亡率升高(P<0.05)。另外,与对照组相比,DZNep组H3K27me3表达降低,PTEN表达升高,mTOR和p-p70S6K表达均下降(P<0.05)。结论:DZNep可抑制食管鳞癌移植瘤增长,并诱导肿瘤细胞凋亡;其机制可能是通过对EZH2的抑制增强PTEN的表达,从而抑制mTOR/p70S6K信号通路的激活。

EZH2与乳腺癌及其抑制剂研究

乳腺癌作为女性最常见的肿瘤,其生存率和生存质量往往不能令人满意。目前,众多研究表明乳腺癌的发生、发展机制受到表观遗传修饰的高度影响。果蝇zest基因增强子同源物2(EZH2)作为一种组蛋白甲基转移酶,通过催化组蛋白H3第27位赖氨酸残基(H3K27)的三甲基化参与细胞周期调控、分化和沉默相关靶基因的转录,进而促进肿瘤的发生。目前发现EZH2在多种肿瘤中过表达并与肿瘤的侵袭和预后密切相关,且对EZH2抑制剂的研究已进入临床试验阶段。因此,本文对EZH2在乳腺癌中的作用机制及EZH2抑制剂的研究现状作一综述,旨在为乳腺癌的临床治疗提供参考依据。

组蛋白甲基化酶抑制剂对人淋巴瘤Raji细胞生存、凋亡及细胞周期的影响

目的研究组蛋白甲基化酶Zeste基因增强子同源物2 (enhancer of zeste homolog 2, EZH2)的3种抑制剂(UNC1999、DZNep及GSK343)对人B细胞非霍奇金淋巴瘤Raji细胞的影响。方法 PCR扩增EZH2基因16(Y641)和18(A677)外显子,Sanger测序检测其突变情况;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测正常成年人淋巴细胞及Raji细胞EZH2的表达;使用不同浓度的UNC1999、DZNep及GSK343处理Raji细胞,CCK-8技术检测Raji细胞的生存情况;流式细胞术检测Raji细胞的凋亡情况和细胞周期变化;Western blot检测药物处理后EZH2及H3K27 me3的表达。结果 Sanger测序显示Raji细胞不携带EZH2基因Y641和A677突变位点。Western blot显示,相比正常成年人淋巴细胞,Raji细胞EZH2蛋白高表达。CCK-8法结果显示UNC1999、DZNep及GSK343对Raji细胞均有抑制生存的作用, DZNep抑制能力最弱。流式细胞术凋亡检测显示UNC1999、DZNep及GSK343促进Raji细胞的凋亡,UNC1999作用强于GSK343与DZNep;3种抑制剂均阻滞Raji细胞于G_1/G_0期,UNC1999组细胞周期阻滞最显著。Western blot显示UNC1999和GSK343抑制EZH2组蛋白甲基化酶的活性,降低H3K27 me3的表达。结论 EZH2抑制剂可通过降低H3K27 me3的表达抑制Raji细胞生存,促进细胞凋亡,改变细胞周期。UNC1999作用效果优于GSK343及DZNep,且EZH2抑制剂对Raji细胞的作用不依赖于EZH2的突变。

新型苯并吗啉-8-甲酰胺衍生物的合成及抗肿瘤活性

以6-溴N-(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲基)苯并吗啉-8-甲酰胺为原料,经N-磺酰化和Suzuki偶联反应两步合成17个新型的6-芳基取代N-磺酰基苯并吗啉-8-甲酰胺衍生物(3a~3q),其结构经1 H NMR、13 C NMR和MS(EI)表征。采用Alpha LISA法对化合物进行EZH2(WT)酶活性检测;采用MTT法测试了化合物对非小细胞肺癌细胞A549和人类B细胞淋巴瘤细胞SU-DHL-4的细胞增殖抑制作用。结果表明:化合物3j的浓度为1μmol·L^(-1)时,对EZH2抑制率为68%;对A549细胞和SU-DHL-4细胞的IC 50值分别达到10.4μmol·L^(-1)和2.8μmol·L^(-1)。

组蛋白甲基转移酶EZH2调控脓毒症诱导的T细胞功能障碍的作用及分子机制

目的探讨组蛋白甲基转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)调控脓毒症T淋巴细胞功能失调的作用及机制。方法按随机数字表法将24只雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、脓毒症模型组〔盲肠结扎穿孔术(CLP)+二甲基亚砜(DMSO)组〕及EZH2选择性抑制剂干预组(CLP+GSK126组),每组8只。采用CLP法制备脓毒症小鼠模型;假手术组小鼠不结扎穿刺盲肠,其余操作同CLP+DMSO组。CLP+DMSO组及CLP+GSK126组小鼠术后立即分别腹腔注射DMSO或GSK126(10 mg/kg)。术后24 h处死小鼠取肠系膜淋巴结,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞EZH2表达、T淋巴细胞凋亡率、细胞增殖标志物ki-67抗原阳性T淋巴细胞(ki-67^(+))比例、γ-干扰素阳性T淋巴细胞(IFN-γ^(+))比例、程序性死亡受体-1阳性T淋巴细胞(PD-1+)比例及程序性死亡配体-1阳性T淋巴细胞(PD-L1^(+))比例。结果与假手术组相比,CLP+DMSO组小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞EZH2表达升高。与CLP+DMSO组相比,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结CD3+比例升高(0.70±0.02比0.50±0.07,P<0.01),表明抑制EZH2可增加脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞数量;同时,CLP+GSK126组淋巴结CD4^(+)及CD8^(+)细胞中ki-67^(+)比例显著上升(CD4^(+):0.74±0.05比0.63±0.04,CD8^(+):0.82±0.06比0.70±0.04,均P<0.05),表明抑制EZH2可增加脓毒症小鼠淋巴结增殖活性较高的T淋巴细胞比例;另外,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞凋亡率与CLP+DMSO组比较差异无统计学意义〔CD4^(+):(21.53±2.87)%比(20.48±3.21)%,CD8^(+):(8.34±1.02)%比(7.71±1.38)%,均P>0.05〕,表明抑制EZH2对脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞凋亡无明显影响。与CLP+DMSO组相比,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结IFN-γ^(+)CD4^(+)、IFN-γ^(+)CD8^(+)比例也显著增加(IFN-γ^(+)CD4^(+):0.31±0.11比0.14±0.06,IFN-γ^(+)CD8^(+):0.30±0.10比0.13±0.06,均P<0.05),表明抑制EZH2可增强脓毒症小鼠淋巴结T淋巴细胞IFN-γ分泌能力;同时,CLP+GSK126组小鼠肠系膜淋巴结PD-1+CD8^(+)比例较CLP+DMSO组显著下降(0.092±0.006比0.135±0.004,P<0.01),表明抑制EZH2可降低脓毒症小鼠淋巴结CD8^(+)细胞PD-1的表达量,但对PD-L1^(+)比例无明显影响。结论EZH2参与了脓毒症诱导的T淋巴细胞功能障碍的调控,该作用可能部分通过调节PD-1表达介导。