蚯蚓纤溶酶的分离纯化及其部分酶学性质的研究

以野生环毛蚓 (Pheretima)为材料 ,经匀浆抽提、热变性、硫酸铵分步沉淀、SephadexG 75凝胶过滤和DEAE 纤维素离子交换柱层析等纯化步骤 ,得到纯度较高的蚯蚓纤溶酶 (EFE) ,具有强烈的溶解血纤维蛋白的作用。同时对酪蛋白和BAEE也具有较强的水解作用 ,但对ATEE无水解活性。实验表明蚯蚓纤溶酶能被苯甲磺酰氟强烈抑制 ,说明该酶是丝氨酸蛋白酶、属胰蛋白酶类。金属离子Na+、K+、Mg2 +对此酶有一定的抑制作用 ,Hg2 +对EFE有强烈抑制作用 ,而Ca2

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及抗栓活性研究

目的摸索蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶的抗血栓活性。方法采用分步盐析、透析、凝胶色谱和亲和色谱法分离纯化蚯蚓纤溶酶 ;此酶的体内抗栓活性检测采用动静脉旁路血栓形成抑制实验法。结果分离纯化得到的蚯蚓纤溶酶比活高 ,为 16 0 5IU/mg ;蚯蚓纤溶酶的体内血栓形成抑制效果比尿激酶作用显著。 结论该法分离纯化工艺简单 ,特异性好 ,纯化的纤溶酶比活高 ;

蚯蚓纤溶酶的纯化及pH值、温度和胰蛋白酶对其纤溶活性的影响

目的纯化并鉴定蚯蚓纤溶酶 ,研究pH、温度和胰蛋白酶对其纤溶活性的影响。方法以赤子爱胜蚓为材料 ,采用硫酸铵盐析、DEAESepharoseCL 6B离子交换色谱、SephadexG 75凝胶过滤和制备电泳等分离技术纯化蚯蚓纤溶酶 ;利用纤维平板和聚丙烯酰胺凝胶电泳研究pH、温度和胰蛋白酶对蚯蚓纤溶酶纤溶活性的影响。结果分离得到纤溶酶 4种单一组分 :EFE 1、EFE 2、EFE 3、EFE 4 ;分子量分别为 2 70 0 0、2 80 0 0、2 30 0 0、330 0 0 ;4种组分对温度的适应范围较广 ;pH值对其纤溶活性的影响不尽相同 ,但都在pH低于 1.5时纤溶活性完全丧失 ;胰蛋白酶对纤溶酶 4种组分均无降解作用 ,对其纤溶活性无影响。

蚯蚓纤溶酶组分的分离纯化和分析

通过以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基的亲和层析 ,从蚯蚓 (大平二号 ,即赤子爱胜蚓 )纯化出的纤溶酶是一组非均一的纤维蛋白水解酶 .经DEAE 纤维素离子交换和制备电泳进一步分离纯化 ,得到 12个单一组分 .这些组分的等电点 (pI)按照它们在聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)图谱上的顺序从 4 0开始依次降低 ;SDS PAGE证明 ,除3、 4外 ,其余组分均只含一种多肽链 ,分子质量在 2 2～ 34ku之间 ;用shiff试剂和酚 硫酸染色 ,显示 1、 2、 6 5和 7是糖蛋白 ,其中 7的糖含量最高 ;以BAEE、ChromozymUK和ChromozymPL为底物测定 ,7的纤溶酶活性最高 .

赤子爱胜蚓五种纤溶酶组分的分离纯化及对纤维蛋白原酶解的初步研究

经硫酸铵盐析沉淀和ＰＡＧＥ制备电泳，从赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａｆｏｅｌｉｄｅ）粗品中分离纯化出五种纤溶酶组份（Ⅰ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ），在ＰＡＧＥ中均呈现单一带。组份Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ能将纤维蛋白原中α、β、γ链依次降解，对α链亲和力最大。组份Ｘ不能降解４３．５ＫＤ、４０ＫＤ、２４．５ＫＤ片段。组份Ⅰ对α链有较高亲和力而对γ链无降解作用。

蚯蚓纤溶酶基因P_(239)的原核表达、纯化及活性测定

通过RT PCR方法从蚯蚓 (Lumbricusbimastus)中获得蚯蚓纤溶酶基因 ,命名为P2 3 9,含有 85 2个核苷酸 ,成熟肽编码 2 3 9个氨基酸 ,通过Genbank序列同源性比较 ,与已知的蚯蚓纤溶酶有一定的同源性 ,为首次获得的新基因。随后构建了 pBV2 2 0 /P2 3 9重组质粒 ,在大肠杆菌DH5α中进行原核表达 ,再经亲和层析柱纯化复性 ,其产物经活性测定 ,确定不仅具有激酶作用 ,而且具有直接溶栓活性。

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及临床作用研究进展

蚯蚓纤溶酶是从蚯蚓中分离的一种丝氨酸蛋白水解酶,有抗凝溶血栓、抗癌抗肿瘤、抗炎、神经修复等作用,在临床上是预防和治疗血栓疾病的有效药物。本文对蚯蚓纤溶酶的分离纯化与药理作用加以概述,为临床蚯蚓溶栓药物的研究提供依据。

高活力蚯蚓纤溶酶的纯化及性质研究

由电泳得知赤子爱胜蚓ＥｉｓｅｎｉａＦｏｅｌｉｄｅ有６种纤溶酶同工酶。经纯化从中得到一种具强纤溶活性的单组分酶。收率为粗酶粉总活力的１９．１％。该酶分子量为３００００Ｄ，比活为６６６７Ｕ／ｍｇ，在ｐＨ４～１１及２５℃～５５℃温度范围内稳定。

蚯蚓纤溶酶的分离纯化

用硫酸铵分级盐析， 透析除盐及 Ｄ Ｅ Ａ Ｅ—纤维素、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－ ２５ 和 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－ ５０ 三种柱层析方法从蚯蚓组织提取液中分离纯化一种单一组分的纤溶酶。

蚯蚓纤溶酶新组分的分离纯化及部分性质

采用以大豆胰蛋白酶抑制剂为配基的亲和色谱分离蚯蚓纤溶酶,以DEAE-纤维素-52离子交换柱色谱和制备电泳纯化各单组分。结果表明新组分8、9、10都是能水解纤维蛋白的糖蛋白。组分8是一种纤溶酶原激活剂,有2个亚基,Mr为25.5k和17.8k;组分9仅一条肽链,Mr为33.6k;组分10含有Mr为18.7k和10.9k的2个亚基。组分9、10均兼有纤溶酶原激活活性和直接纤溶活性。

尖吻蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化及氨基酸序列测定

目的:从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化出高纯度的纤溶酶并对其进行初步性质研究和氨基酸序列分析。方法:采用DEAE-Sepharose FF离子交换和两次Superdex75PG凝胶过滤,从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出可直接溶解纤维蛋白原的蛋白酶。结果:分离到的纤溶酶相对分子质量为25kD,HPLC分析纯度在97%以上,氨基酸序列分析其N末端为MSTEF QRYME IVVNHS MVKKY NGDSD KIKAW。结论:采用此工艺可从尖吻蛇毒中分离出高比活的纤溶酶,为进一步研究其药理作用奠定了基础。

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及其动力学性质研究

目的 :建立一种高效的蚯蚓纤溶酶 (EFE)的分离纯化技术 ,并研究其特性。方法 :蚯蚓经组织匀浆、缓冲液抽提与选择性热变性 ,再经抑制剂 1,6 -己二胺 (HD)偶联的 Sepharose4B亲和层析 ,DEAE-Sepharose离子交换层析。结果及结论 :分离纯化得到具有强烈纤溶活性的酶组分 (EFE- F1 、2 ,EFE- F3)。其中 EFE- F3对合成底物 S- 2 2 88和 Chrom ozym P的 Km分别是 0 .0 1mm ol/L和 0 .0 2 mm ol/L ,HD的 Ki为1mmol/L;该酶热稳定性强 ,能抗 4mol/L

豆豉纤溶酶的研究进展

豆豉纤溶酶是由豆豉枯草芽孢杆菌分泌的一种具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶。该文对豆豉枯草杆菌的筛选、发酵、酶的提取、活性测定、理化性质以及动物溶栓药效试验进行了综述。

以壳聚糖为基质对蚯蚓纤溶酶进行亲和层析

蚯蚓纤溶酶(Earthworm fibrinolytic enzymes)有多种同工酶,分离纯化相对比较困难.我们采用壳聚糖作为基质,大豆胰蛋白酶抑制剂为配体,戊二醛为偶联剂,分别研究了酸性和碱性条件下对蚯蚓纤溶酶的纯化效果.实验表明经壳聚糖为载体所制备的亲和吸附剂对蚓激酶具有较高的分离纯化选择性.并且在酸性条件下提取比在碱性条件下提取所得同工酶要少.

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及性质鉴定

以赤子爱胜蚓为材料 ,经过硫酸铵盐析、DEAE SepharoseCL 6B离子交换层析、SephadexG 75凝胶过滤和制备电泳分离得到四种纤溶酶组分 .经PAGE鉴定四种组分为单一组分 ;SDS PAGE测定其分子质量分别为 2 7、2 8、2 3和33ku ;等电点均在 4 .0以下 ;经甲苯胺蓝染色后都出现糖蛋白的阳性反应 ;用苯酚 硫酸法测定其中性糖含量分别为 8.4 %、13.5 %、9.1%、6 .8% ;纤维平板法测得四种组分的活性存在明显差异 ;四种组分都具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用 .pH值对四种组分纤溶活性稳定性的影响各不相同 .四种组分对温度的适应范围较广 .

豆豉纤溶酶的研究进展

对豆豉枯草杆菌的筛选、发酵、酶的提取、活性测定、理化性质以及动物溶栓药效试验进行了综述。

蚯蚓纤溶酶基因的克隆与序列分析

目的:获取蚯蚓纤溶酶(EFE)的基因,并对其进行序列分析。方法:从赤子爱胜蚓中提取总RNA,然后利用RT-PCR技术扩增EFE的基因,并将其插入pUCm-T载体,经PCR和酶切鉴定后进行序列测定及分析。结果:DNA序列分析表明,所克隆的EFE基因全长为738bp,其中编码区段为735bp,共编码245个氨基酸残基,成熟肽为238个氨基酸残基。与GenBank中已报道的粉正蚓的EFE序列F-Ⅲ-2的同源性最高,两者在核苷酸序列上有2处不同,即第137位(T→C)和第632位(G→T),密码子也因而分别由GTC、GGT变为GCC、GTT,导致第46位、211位的氨基酸残基分别由缬氨酸、甘氨酸变为丙氨酸和缬氨酸。结论:从赤子爱胜蚓中成功克隆了1条EFE基因F245。序列测定及同源性分析表明,蚯蚓纤溶酶F245与已报道的多条EFE基因序列具有高度同源性,且具备完整的编码区。该序列的克隆为用基因工程的方法生产单一成分的高酶活性EFE奠定了基础。

豆豉纤溶酶的研究进展

综述了含豆豉纤溶酶基因的枯草杆菌的筛选,酶的分离提取、酶学性质、活性测定,豆豉纤溶酶基因的克隆、表达以及动物溶栓药效试验的研究进展。

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分序列的测定

以新鲜蚯蚓为原料，经过保温抽提、乙醇沉淀、DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析、Lysine-Sepharose4B亲和层析以及SDS-PAGE制备电泳等纯化步聚，得到一种纯度达95％以上的蚯蚓纤溶酶．该酶具有强烈的溶解纤维蛋白的作用及蛋白酶活性，平板法测得其比活性为90OUK单位／毫克蛋白，TAME法测得其比活性为2500O单位／毫克蛋白．酶学性质研究表明其最适反应温度为65℃，最适反应PH值为8．5．该酶的分子量为33kD，等电点为pH3．5．还对该酶进行了氨基酸组成分析，并测定了其N端部分序列．

蚯蚓纤溶酶基因的cDNA克隆及其序列分析

从粉正蚓成体中提取总RNA,以寡核苷酸Oligo(dT)20为引物合成cDNA第一条链;用RT PCR的方法扩增蚯蚓纤溶酶的cDNA,将其克隆到pUCm T载体上进行DNA序列测定.结果表明,所克隆的蚯蚓纤溶酶cDNA长度为747bp,其中编码区段为738bp,共编码246个氨基酸.将该序列与GenBank中其它的4种蚯蚓纤溶酶序列(LumbricusrubellusEFE III 1、Lumbricusrubelluslumbrokinase 3(1)precursor、Lumbricusbimastuslumbroki nase、Lumbricusrubelluslumbrokinase 1T4precursor)相比,同源性分别为99%,97%,89%,88%;与同源性最高的序列相比,本序列有7个碱基、3个氨基酸与该序列不同.