源于地龙蛋白的抗氧化肽鉴定与构效关系

为探究外源蛋白酶预酶解处理对地龙蛋白胃肠消化程度和胃肠消化后抗氧化活性的影响。该研究利用五种蛋白酶制备了不同的地龙蛋白酶解物,然后通过体外胃肠模拟消化探究这些酶解物的水解度、分子量分布和体外抗氧化活性的变化。五种蛋白酶酶解物中,碱性蛋白酶酶解物的水解度最高,为40.8%,其对DPPH、ABTS自由基的清除能力分别为27.36、175.46μmol TE/g,ORAC值为0.70μmol TE/mg。碱性蛋白酶酶解物经胃肠消化后的水解度、DPPH自由基清除率、ORAC值相比于地龙蛋白直接胃肠消化所得产物(EWP)分别提高了94.06%、72.21%及120.00%。GHEWP中鉴定出10823条分子量<3 ku的肽,通过bioware.ucd.ie进行活性阈值评分筛选出活性评分最高的11个肽进行合成,验证活性,其中ATSGFFVY、HCFVLY、HLASGWY、HRYSDF、HYANMY的综合抗氧化能力较好,量子化学计算结果表明:ATSGFFVY、HCFVLY、HRYSDF、HYANMY的活性位点可能分别位于Tyr-8、Tyr-6、Tyr-3、Tyr-2上;HLASGWY的活性位点可能位于Trp-6上。该研究表明碱性蛋白酶预酶解可提高地龙蛋白的消化程度,增强其胃肠消化产物的抗氧化活性。

基于NO-cGMP通路探讨地龙蛋白对糖尿病大鼠勃起功能障碍的干预作用及机制

目的探讨地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍(DMED)大鼠的干预作用及其机制。方法60只大鼠随机选取10只作为空白组,其余50只通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型,8周后使用阿朴吗啡(APO)诱导筛选符合DMED症状的大鼠模型,将DMED大鼠随机分为模型组、西地拉非组及地龙蛋白低、中、高剂量组,相应药物干预4周后,检测大鼠平均颈动脉压(MAP)和阴茎海绵体最大内压(ICPmax)以评估大鼠勃起功能,试剂盒检测阴茎海绵体组织SOD活性及NO、cGMP、MDA水平,RT-qPCR法检测阴茎海绵体组织eNOS、cGMP mRNA表达,免疫组化和Western blot法检测eNOS蛋白表达,HE染色观察阴茎海绵体病理结构的改变。结果与空白组比较,模型组大鼠血糖、阴茎海绵体组织MDA水平升高(P<0.01),体质量、ICPmax/MAP、阴茎海绵体组织SOD活性及NO、cGMP水平、阴茎海绵体组织eNOS mRNA和蛋白表达均降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组以上指标均有改善(P<0.01)。空白组阴茎海绵体组织结构正常;模型组阴茎海绵体组织肌纤维、胶原纤维断裂,拧结明显;各给药组阴茎海绵体组织病理损伤较模型组均有不同程度的改善。结论地龙蛋白具有改善糖尿病大鼠勃起功能障碍的作用,其机制可能与抑制氧化应激、上调大鼠阴茎海绵体NO-cGMP通路表达有关。

红曲地龙蛋白压片糖果降脂保肝作用探析

目的:探究新型食品红曲米地龙蛋白压片糖果的降脂保肝作用。方法:将高脂血症小鼠模型随机分为模型对照组、辛伐他汀组(10 mg·kg^(-1))、压片糖果低剂量组(0.15 g·kg^(-1))、压片糖果高剂量组(0.30 g·kg^(-1)),每组10只。正常对照组、模型对照组给予0.9%生理盐水,辛伐他汀组给予辛伐他汀溶液,压片糖果组给予不同剂量的受试物溶液,灌胃体积均为10 mL·kg^(-1),每天1次,连续6周。考察各组小鼠血清生化指标、肝指数、肝脏生化指标及氧化指标。结果:与模型对照组相比,辛伐他汀组和压片糖果低、高剂量组的总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、三酰甘油(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low Density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)含量明显下降、高密度脂蛋白胆固醇(High Density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C)含量明显上升(P<0.05或P<0.01);辛伐他汀组和压片糖果高、低剂量组的肝脏指数及谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(Alanine Transaminase,ALT)活性较之模型组显著下降(P<0.05或P<0.01),各剂量组肝组织中TC、TG、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量明显减少,超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)含量明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论:红曲地龙蛋白压片糖果可调节血脂水平和脂质代谢紊乱,减少肝脏氧化应激损伤,具有降脂保肝作用。

地龙蛋白肽的成分分析及对血管紧张素转化酶活力的影响

本文探讨了地龙蛋白肽的氨基酸组成及对血管紧张素转化酶(ACE)活力的影响。采用中医中药的方法将地龙匀浆、浸泡于60℃水浴中1 h,提取活性成分;通过紫外分光光度法测定了地龙中蛋白质的含量;采用凝胶过滤层析法提纯地龙中的活性蛋白并进行体外ACE抑制活性试验,收集活性峰行SDS-PAGE电泳及高效液相色谱法(HPLC)测定地龙蛋白肽的相对分子量及氨基酸的组成。结果表明,地龙蛋白肽含有18种氨基酸,其中亮氨酸和谷氨酸的含量最高,同时含有人体必需的8种游离氨基酸。提示中药地龙中含有抑制ACE的活性物质。本研究为从中药地龙中开发防治高血压病的药物或保健品提供了可靠的实验依据。

乐果和杀虫双污染对蚯蚓体内蛋白质含量的影响

近年来,土壤环境受到越来越严重的污染,其中一个很重要的原因是农药的滥用造成的,目前农药对土壤动物(尤其是蚯蚓)的影响受到极大重视并成为研究热点。为评价土壤的农药污染程度,选用乐果和杀虫双及其二者复合对蚯蚓进行染毒试验,采用滤纸法研究不同浓度农药污染对赤子爱蚯蚓体内蛋白质含量的影响。结果表明:蚯蚓体内蛋白质含量在乐果污染24 h和48 h均比对照显著增加(P<0.05),随着乐果浓度的升高,蚯蚓体内蛋白质含量呈现出先增加后降低的趋势,而随杀虫双浓度的升高,蛋白质含量的影响没有明显的规律性;不同浓度处理之间差异显著(P<0.05),同一浓度处理24 h和48 h之间有极显著的差异(P<0.01);固定乐果浓度(60 mg/kg)分别和不同浓度杀虫双处理24 h和48 h,蚯蚓体内蛋白质含量随着杀虫双浓度的升高,均呈现出升高—降低—升高的锯齿型变化曲线,各复合处理之间有显著差异(P<0.05);回归分析结果表明,蚯蚓体内蛋白质含量与乐果和杀虫双浓度存在一定剂量-效应关系,其关系曲线均为抛物线型,乐果对蚯蚓体内蛋白质含量的影响高于杀虫双。因此可利用蚯蚓体内蛋白质含量的变化较好的指示乐果对蚯蚓的毒性作用,对杀虫双的毒性作用指示效果较乐果差。

蚯蚓体表液的组成及其减粘脱土机理分析

蚯蚓的体表液利于减粘脱土。本文利用现代测试仪器,结合生物化学分析技术,研究了蚯蚓体表液和泥鳅分泌液的组成;并应用土壤力学和生物化学等方面的理论,初步探讨了蚯蚓体表液减粘脱土的机理。

地龙降压蛋白对自发性高血压大鼠血压及血管紧张素Ⅱ含量的影响

目的初步探讨地龙降压蛋白对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertension rat,SHR)的降压作用及对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)含量的影响。方法应用专利技术从中药地龙中提取地龙降压蛋白,并测定其体外ACE抑制活性。单次静脉注射地龙降压蛋白,颈动脉插管法观察SHR血压的动态变化。选择16周龄SHR32只随机分为SHR模型组、地龙降压蛋白低剂量组、地龙降压蛋白高剂量组、卡托普利组,同时以同源性Wistar大鼠8只作为正常对照组,药物干预28d,用无创尾动脉套袖法测量大鼠血压变化;放射免疫分析法测定大鼠血浆及肾脏局部AngⅡ含量。选择昆明种小鼠60只,以不同剂量腹腔注射给药测定地龙降压蛋白的半数致死量。结果①地龙降压蛋白对ACE的比抑制活力为2.54;②单次及多次给药,地龙降压蛋白均可明显降低SHR血压(P<0.05);③药物干预后,与SHR模型组比较,地龙降压蛋白组血浆AngⅡ含量显著降低(P<0.05),而肾脏局部AngⅡ虽有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05);④地龙降压蛋白对昆明小鼠的半数致死量>20g/kg。结论地龙降压蛋白对SHR有降压作用,其降压机制可能与降低血浆及肾脏局部组织中AngⅡ含量有关。

两种温度条件下杀虫单对赤子爱胜蚓蛋白含量SOD和AChE活性的影响

为评价土壤的农药污染程度,选用杀虫剂杀虫单对赤子爱胜蚓(Eiseniafoetida)进行染毒试验,采用滤纸法研究两种温度下农药污染对赤子爱胜蚓的毒理和其体内蛋白含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乙酰胆碱酯酶(AChE)酶活力的影响。结果发现,杀虫单单一作用时,在10℃和20℃两种温度下,蚯蚓死亡率分别为20%和30%;随杀虫单浓度的增大,蚯蚓体内蛋白含量出现不同程度的升高;SOD活性随农药浓度的升高整体表现为下降趋势,其降低率分别为32.2%和21.2%,但规律不很明显;时间和浓度对SOD的影响达到极显著(P<0.01);农药对蚯蚓体内AChE活力的抑制作用不明显,这与该农药是较弱的胆碱酯酶抑制剂有关,且随暴露时间的延长,AChE活力表现出一定的恢复现象。试验结果表明,温度对蚯蚓死亡率及蛋白含量、SOD、AChE酶的活性有一定影响,可通过对比两种温度下的蚯蚓体内酶活性的大小来进行生物监测和环境影响评价。

呋喃丹对赤子爱胜蚓体内蛋白含量、SOD和TChE活性的影响

选用杀虫剂呋喃丹对赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)进行染毒试验,研究农药污染对赤子爱胜蚓的致死率和体内蛋白含量、SOD和TChE活力的影响。结果表明:当蚯蚓受到低浓度呋喃丹胁迫时,其体内蛋白含量和TChE的活性均表现为升高趋势,SOD活性表现为降低;当受到高浓度呋喃丹胁迫时,其体内蛋白含量和TChE活性表现为不同程度的降低,SOD却表现为升高;其剂量-效应关系曲线均为抛物线型。可利用蛋白含量、SOD和TChE活性的变化来指示呋喃丹对赤子爱胜蚓的毒性作用。

蚯蚓提取物中蛋白质含量测定方法的研究

目的寻找能够精确反映蚯蚓提取物中蛋白质含量的测定方法。方法采用改良Lowry法和考马斯亮蓝染料结合法(Bradford法)测定蚯蚓提取物蛋白质含量;分别使用2法测定标准牛血清白蛋白(BSA)水溶液在碱性蛋白酶水解前后的蛋白质含量。结果改良Lowry法的测定结果明显高于Bradford法。BSA水溶液酶解前,2法测定的蛋白质含量相当;使用改良Lowry法,BSA水溶液酶解前后的蛋白测定值相近;而使用Bradford法测定BSA水溶液蛋白质含量时,酶解后的测定值较酶解前出现大幅下降。结论在测定多肽含量多的供试品中蛋白质含量时,改良Lowry法测定更为精确。蚯蚓提取物中存在大量的多肽成分,所以对其进行蛋白质含量测定时,改良Lowry法能够更加精确、真实地反映蚯蚓提取物的蛋白质含量。

蚯蚓毒素及其去除方法的初步研究

目的 研究蚯蚓毒素的来源及其成分 ,探索其去除方法。方法对蚯蚓应激分泌液进行透析、可见及紫外分光光度法检测透析袋内外液组分、电泳分析蛋白组分、动物体内试验检测毒性。结果蚯蚓应激分泌液的蛋白组分显示剧毒性 (最小致死量为 0 .2 42mg/kg)。PAGE分离主要有两条带 ;蚯蚓对不同刺激产生的应激分泌液成分相同。结论蚯蚓应激分泌液的蛋白组分有毒 ,用加盐或微电流刺激方法可去除毒素。

改良Lowry法和Bradford法测定蚯蚓提取物中蛋白质含量的比较(英文)

目的寻找精确反映蚯蚓提取物中蛋白质含量的测定方法。方法采用改良Lowry法和考马斯亮蓝染料结合法(Bradford法)测定蚯蚓提取物蛋白质含量;再使用两法测定标准牛血清白蛋白(BSA)水溶液在碱性蛋白酶水解前与后的蛋白质含量。结果在测定蚯蚓提取物中蛋白质含量时,改良Lowry法的测定结果明显高于Bradford法。未进行酶解的BSA水溶液,两法测定的蛋白质含量相当;使用改良Lowry法,BSA水溶液酶解前与后的蛋白测定值相近;而使用Bradford法时,测定BSA水溶液酶解后蛋白质含量的测定值较酶解前出现大幅下降。结论测定多肽含量多的生物样品中蛋白质含量时,改良Lowry法更为精确。由于蚯蚓提取物中大量多肽成分的存在,故对测定其蛋白质含量时,改良Lowry法能够更加精确、真实地反映蚯蚓提取物的蛋白质含量。

土壤中Cu和Pb单一及复合污染对蚯蚓体内蛋白含量和SOD活性的影响

采用蚯蚓毒性试验方法,以赤子爱胜蚓(Eisenia Foetida)为试验蚓种,研究了土壤中重金属Cu和Pb单一及复合污染对赤子爱胜蚓体内蛋白含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,为重金属污染土壤的生物学诊断和风险评价提供科学依据。试验结果表明,Cu和Pb单一作用时,对蚯蚓体内的蛋白含量和SOD活性呈现不同变化。单独添加Cu处理时,随着Cu浓度的增大,蚯蚓体内蛋白含量呈现轻微升高趋势,SOD活性表现出下降趋势;随着暴露时间的延长,蚯蚓体内蛋白含量均降低;单独添加Pb处理时,随着Pb浓度的增大,蚯蚓体内蛋白含量呈现轻微降低趋势,SOD活性表现出升高趋势,延长暴露时间,未观察到蚯蚓体内的SOD活性有明显变化规律。以不同浓度Cu作为背景与Pb复合时,Cu和Pb的复合效应与暴露时间和不同浓度的组合密切相关,时间不同,浓度不同,对蚯蚓体内蛋白含量和SOD活性的影响也就不同。与单一Pb作用相比,与Cu复合使蚯蚓体内SOD酶活性有所升高,说明这两种重金属复合后使蚯蚓受到的环境胁迫作用增强。

地龙中蛋白质的提取工艺研究

目的确定地龙中的蛋白质含量的最佳提取工艺。方法以地龙中的蛋白质含量为评价指标,采用考马斯亮兰法检测地龙中有效成分蛋白质含量,在确定地龙的最佳提取次数的基础上,选择三因素(浸泡时间、加水量、提取时间),三水平的正交试验方法,并结合得膏率,优化地龙的提取工艺。结果地龙的最佳提取工艺条件是适量的地龙药材加10倍量的水,浸泡40min,煎煮3次,第1次90min,第2,第3次分别为60min。结论该工艺操作方法简单,提取率高,适宜于大批量生产。

猪粪养殖蚯蚓的营养成分测定及作为家禽蛋白饲料的安全性评价

为寻找替代鱼粉的动物源性蛋白质资源,采用不同C/N比猪粪腐熟的堆料养殖蚯蚓并加工成蚯蚓粉,检测蚯蚓粉的营养成分,与鱼粉的营养成分分析对比,并对其作为家禽蛋白饲料进行安全性评价。结果表明:蚯蚓粉的粗蛋白含量为62.33%~65.93%,氨基酸含量为54.2%~62.91%,必需氨基酸与总氨基酸的比值为55.48%~59.75%;蚯蚓粉中4种重金属(铜、铁、锌和总砷)、2种毒素(黄曲霉毒素B_1和玉米赤霉烯酮)和3种抗生素(青霉素钠、阿莫西林和恩诺沙星)含量均符合饲料卫生标准。研究结果提示蚯蚓粉是可替代鱼粉的高蛋白动物性原料。

蚯蚓钙结合蛋白的分离纯化及性质的研究

以赤子爱胜蚓（ＥｉｓｅｎｉａＦｏｅｔｉｄａ）为材料分离纯化了钙调素（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ，ＣａＭ），并得到一种新的钙结合蛋白（Ｎｅｏ－ＣａｌｃｉｕｍＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ，ＮＣＢＰ）经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳鉴定，这两种蛋白均表现均一。ＣａＭ分子量为１８．９ｋＤ，ＮＣＢＰ为１６ｋＤ，等电点分别为３．６和４．３，两种蛋白具有不同的肽谱。研究证明蚯蚓ＣａＭ具有与其他来源ＣａＭ所特有的性质，对环核苷酸磷酸二酯酶有明显的激活作用，电泳行为受Ｃａ２＋的影响出现ＣａＭ特征性电泳行为，ＮＣＢＰ亦有类似性质。ＣａＭ和ＮＣＢＰＮ－端均为Ｇｌｙ，ＣａＭＣ－末端为Ｍｅｔ。经氨基酸组成分析表明蚯蚓ＣａＭ及ＮＣＢＰ和其他动物ＣａＭ一样，不含Ｃｙｓ和Ｔｒｐ。其中Ｐｈｅ／Ｔｙｒ比分别为８∶１和７∶２。

蚯蚓中3～30 kD抗菌肽的分离及抗菌效果研究

从蚯蚓体内分离纯化30 kD以下的抗菌肽,并研究其抑菌效果.通过电击诱导蚯蚓产生抗菌肽、超滤浓缩脱盐以及截取3～30 kD的抗菌肽、用阳离子交换分离除去较多杂蛋白、凝胶过滤层析进一步精确分离提纯得到3~30 kD的蚯蚓抗菌肽,有H1和H2两个蛋白浓度较高的峰值.测得其蛋白质量浓度分别为6.82、7.46 mg/μL,其相对分子质量分别在5 856～7 823 kD和14 40～20 00.抑菌活性测定结果表明,H1和H2都有较好的抑菌效果,其中H1对草枯杆菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌、大肠杆菌有明显的抑菌效果,H2对巴氏杆菌、大肠杆菌和草枯杆菌也有明显的抑菌效果,H1的抑菌活性比H2高.

地龙提取液中蛋白质的稳定性研究

目的:对影响地龙提取液中蛋白质稳定性的因素进行研究。方法:通过考马斯亮蓝法建立了地龙提取液中蛋白质的含量测定方法,并考察了温度、pH值、无机盐及有机溶剂等因素对提取液中蛋白质稳定性的影响。结果:在30℃、pH值为7的条件下,提取液中蛋白质的含量最高,而加入无机盐或有机溶剂后蛋白质含量均有所降低。结论:提取液的最佳保存条件为30℃、pH值7,且提取过程中应尽量减少无机盐和有机溶剂的使用。

长期不同施肥下太湖地区黄泥土蚯蚓的多样性、蛋白质含量与氨基酸组成的变化

水稻土在不同施肥管理下的土壤质量及其生态系统功能的变化是当前土壤学和农业生态学的关注领域。对太湖地区一个15a的长期不同施肥处理下稻田进行了蚯蚓群落的调查采样,并测定了蚯蚓蛋白质含量和氨基酸组成。供试水稻土中共检出7种蚯蚓。长期不同施肥措施影响了蚯蚓的群落结构,单施化肥下农田蚯蚓的种类和数量明显减少,多样性指数和丰富度明显降低,且蚯蚓总氨基酸的含量和大部分种类氨基酸含量降低,同时蚯蚓中分子量小于25kd的蛋白质含量降低,而分子量33kd附近的蛋白质含量明显增加;相反,长期化肥配合秸杆还田和配施猪粪趋向于提高蚯蚓蛋白质含量或氨基酸含量。看来,农田中蚯蚓不但在种群变化上,而且在体内生命活性物质组成上均响应稻田不同施肥措施下的土壤环境变化。

地龙降压蛋白对自发性高血压大鼠血管紧张素及内皮素含量的影响

目的:初步探讨地龙降压蛋白对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertension rat,SHR)的降压效果及对血浆血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、内皮素(endothelin,ET)含量的影响。方法:选择16周龄雄性SHR32只随机分为SHR模型组、地龙降压蛋白低剂量组、地龙降压蛋白高剂量组、卡托普利组,同时以同源性Wistar大鼠8只作为正常对照组,药物干预4周。用无创尾动脉套袖法测量大鼠血压;放射免疫分析法测定血浆AngⅡ、ET含量。结果:地龙降压蛋白可明显降低SHR血压;与Wistar组比较,SHR模型组血浆中AngⅡ、ET含量明显升高(P<0.05);药物干预后,与SHR模型组比较,地龙降压蛋白高、低剂量组及卡托普立组血浆中AngⅡ、ET水平显著降低(P<0.05)。结论:地龙降压蛋白对SHR有降压作用,其降压机制可能与降低SHR血浆AngⅡ、ET含量有关。