蚯蚓纤溶酶的纯化及pH值、温度和胰蛋白酶对其纤溶活性的影响

目的纯化并鉴定蚯蚓纤溶酶 ,研究pH、温度和胰蛋白酶对其纤溶活性的影响。方法以赤子爱胜蚓为材料 ,采用硫酸铵盐析、DEAESepharoseCL 6B离子交换色谱、SephadexG 75凝胶过滤和制备电泳等分离技术纯化蚯蚓纤溶酶 ;利用纤维平板和聚丙烯酰胺凝胶电泳研究pH、温度和胰蛋白酶对蚯蚓纤溶酶纤溶活性的影响。结果分离得到纤溶酶 4种单一组分 :EFE 1、EFE 2、EFE 3、EFE 4 ;分子量分别为 2 70 0 0、2 80 0 0、2 30 0 0、330 0 0 ;4种组分对温度的适应范围较广 ;pH值对其纤溶活性的影响不尽相同 ,但都在pH低于 1.5时纤溶活性完全丧失 ;胰蛋白酶对纤溶酶 4种组分均无降解作用 ,对其纤溶活性无影响。

赤子爱胜蚓五种纤溶酶组分的分离纯化及对纤维蛋白原酶解的初步研究

经硫酸铵盐析沉淀和ＰＡＧＥ制备电泳，从赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａｆｏｅｌｉｄｅ）粗品中分离纯化出五种纤溶酶组份（Ⅰ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ），在ＰＡＧＥ中均呈现单一带。组份Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ能将纤维蛋白原中α、β、γ链依次降解，对α链亲和力最大。组份Ｘ不能降解４３．５ＫＤ、４０ＫＤ、２４．５ＫＤ片段。组份Ⅰ对α链有较高亲和力而对γ链无降解作用。

高活力蚯蚓纤溶酶的纯化及性质研究

由电泳得知赤子爱胜蚓ＥｉｓｅｎｉａＦｏｅｌｉｄｅ有６种纤溶酶同工酶。经纯化从中得到一种具强纤溶活性的单组分酶。收率为粗酶粉总活力的１９．１％。该酶分子量为３００００Ｄ，比活为６６６７Ｕ／ｍｇ，在ｐＨ４～１１及２５℃～５５℃温度范围内稳定。

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及性质鉴定

以赤子爱胜蚓为材料 ,经过硫酸铵盐析、DEAE SepharoseCL 6B离子交换层析、SephadexG 75凝胶过滤和制备电泳分离得到四种纤溶酶组分 .经PAGE鉴定四种组分为单一组分 ;SDS PAGE测定其分子质量分别为 2 7、2 8、2 3和33ku ;等电点均在 4 .0以下 ;经甲苯胺蓝染色后都出现糖蛋白的阳性反应 ;用苯酚 硫酸法测定其中性糖含量分别为 8.4 %、13.5 %、9.1%、6 .8% ;纤维平板法测得四种组分的活性存在明显差异 ;四种组分都具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用 .pH值对四种组分纤溶活性稳定性的影响各不相同 .四种组分对温度的适应范围较广 .