人食管癌Eca-109细胞膜抗原筛选的初步研究

目的 从人食管癌Eca 10 9细胞入手 ,寻找能引起CTL免疫反应的肿瘤抗原 ,筛选出高效肿瘤抗原的大致范围。方法 采用敏感的序列特异性引物 聚合酶链反应 (PCR SSP)来确定Eca 10 9细胞HLA基因分型 ,用HLA血清学分型技术 (Terasaki改良的微量细胞毒试验 )筛选健康志愿者 ;用MTT法测定致敏T细胞的细胞毒活性。结果 Eca 10 9细胞的HLA的基因分型为A 0 3 ,A 2 4;B 3 5 ,B 3 7;DRB1 0 1,DRB1 12 ;DRB3 ;筛选到一例表型为A0 3杂合子的健康志愿者。根据MTT检测 ,Eca 10 9细胞小于 10KD膜蛋白免疫原性较未使用去垢剂的总膜蛋白的免疫原性高 ,小于 3KD膜蛋白的免疫原性最高。结论 Eca 10 9细胞膜蛋白中存在能引起特异性的抗肿瘤CTL免疫反应的肿瘤抗原 ,其中小于

人食管癌Eca-109细胞膜蛋白分离纯化方法的研究

目的 建立人食管癌细胞株Eca 10 9细胞膜蛋白分离和初步纯化方法。方法 使用改良的Neville法提取细胞膜 ,在pH 6.3的条件下 ,用去垢剂TritonX 10 0和辛基 β 葡糖苷把细胞膜上的蛋白溶解下来 ,以超滤法纯化膜蛋白并分组。 结果 在pH6.3的条件下 ,适当的去垢剂与膜蛋白之比 (即mg去垢剂 /mg膜蛋白 ) ,使用辛基 β 葡糖苷时为 6∶1;使用TritonX 10 0时为 2∶1。超滤法将膜蛋白分为 <3KD、3～ 10KD、<10KD、10～ 3 0KD、3 0～ 10 0KD、>10 0KD共 6个组。结论 为进一步研究食管癌Eca 10

α-细辛醚上调细胞色素C及Caspase-3表达影响食管癌Eca-109细胞的生物学行为

目的:分析α-细辛醚上调细胞色素C(cytochrome C,cytC)及Caspase-3表达对食管癌Eca-109细胞生物学行为的影响。方法:将食管癌Eca-109细胞随机等量分为4组,即低、中及高剂量(分别给予25、50及100 mg/L的α-细辛醚),另随机取等量细胞加入等体积培养液作为空白组,培养48 h后通过平板克隆实验检测4组细胞增殖情况,Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况,RT-qPCR及Western Blot法检测细胞中cytC及Caspase-3 mRNA及蛋白表达。结果:(1)细胞克隆数在空白组最高,低剂量组显著高于高剂量组;凋亡率在空白组最低,低剂量组显著低于高剂量组。(2)4组细胞迁移至小室下的细胞数空白组>低剂量组>中剂量组>高剂量组。(3)CytC及Caspase-3蛋白在高剂量组表达显著高于空白组及低剂量组,且中剂量组表达高于空白组。(4)CytC及Caspase-3 mRNA的表达:高剂量组>中剂量组>低剂量组>空白组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:α-细辛醚抑制Eca-109细胞增殖及侵袭,并且可能通过上调cytC及Caspase-3表达促进调亡。

对映-贝壳杉烷型二萜化合物Pseurata H对人食道癌ECA-109细胞生长的影响

为了研究对映-贝壳杉烷型二萜化合物Pseurata H对人食道癌ECA-109细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用,利用倒置显微镜观察法和CCK-8检测Pseurata H对ECA-109细胞生长的影响;利用考马斯亮蓝染色法和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染法检测药物对细胞的张力纤维损伤和细胞核形态的影响.结果显示,用浓度分别为3.125μmol/L、6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L的Pseurata H作用ECA-109细胞24 h后,ECA-109细胞生长均受到抑制,Pseurata H对ECA-109细胞的半抑制浓度值(IC 50)为3.22μmol/L,当浓度6.25μmol/L的药物作用细胞24 h后,细胞数量减少、形态开始变圆脱落、微丝减少且核仁凝结,随着浓度增加,现象越明显.由此可见,二萜化合物Pseurata H在体外能抑制食道癌ECA-109细胞生长,具有时间-剂量依赖效应.

右美托咪定对食管癌Eca-109细胞LINC00982表达及生物学行为的影响

目的:探讨右美托咪定对食管癌Eca-109细胞LINC00982表达及生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:以0、25、50、100μg/L右美托咪定处理的Eca-109细胞分别为对照组和右美托咪定低、中、高浓度组。pcDNA、pcDNA-LINC00982分别转染至Eca-109细胞,作为pcDNA和pcDNA-LINC00982组;si-NC、si-LINC00982分别转染至Eca-109细胞后加入100μg/L右美托咪定处理24 h,作为右美托咪定+si-NC组和右美托咪定+si-LINC00982组。分别应用CCK-8法、流式细胞术、平板克隆形成实验、划痕和Transwell实验检测各组细胞增殖、凋亡、克隆形成、迁移及侵袭情况;采用Western blot检测各组细胞Bax、E-cadherin、Bcl-2和N-cadherin蛋白的表达。采用qRT-PCR检测各组细胞LINC00982的表达。结果:与对照组比较,右美托咪定低、中、高浓度组Eca-109细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Bax和E-cadherin蛋白以及LINC00982表达水平升高,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,划痕愈合率和Bcl-2、N-cadherin蛋白表达水平降低(P均<0.05);与pcDNA组比较,pcDNA-LINC00982组Eca-109细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Bax和E-cadherin蛋白表达水平升高,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,划痕愈合率和Bcl-2、N-cadherin蛋白表达水平降低(P均<0.05);与右美托咪定+si-NC组比较,右美托咪定+si-LINC00982组Eca-109细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax、E-cadherin蛋白表达水平降低,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数增多,划痕愈合率和Bcl-2、N-cadherin蛋白表达水平升高(P均<0.05)。结论:右美托咪定可能通过上调LINC00982的表达而抑制食管癌细胞增殖、迁移及侵袭,并促进细胞凋亡。

β-榄香铜酸对人食管癌细胞Eca-109的抑制作用

目的探究β-榄香铜酸对人食管癌细胞Eca-109增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制。方法使用不同浓度的β-榄香铜酸(0、20、40、60μmol/L)处理Eca-109细胞,首先进行MTT、平板克隆、细胞划痕、transwell迁移、transwell侵袭实验检测β-榄香铜酸对Eca-109的细胞增殖、迁移、侵袭的影响;之后在60μmol/L浓度组使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)干预探索其作用机制。使用试剂盒检测Eca-109细胞中Fe^(2+)、ROS、lipid ROS、GSH、MDA含量,使用Western blot实验检测Eca-109细胞中GPX4、PTGS2和4-HNE的蛋白表达。结果β-榄香铜酸可呈剂量依赖性抑制Eca-109的细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭,激活Eca-109中铁死亡通路蛋白PTGS2和4-HNE,导致GPX4失活,出现铁依赖性的脂质过氧化。Ferrostatin-1可抑制整个进程,从而减少Eca-109细胞的铁死亡。结论β-榄香铜酸可通过铁死亡通路抑制人食管癌细胞Eca-109,有望成为潜在抗食管癌的药物。

微RNA-205与人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R放射抗性的相关性

目的探讨人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R中微RNA(miR)-205的表达水平与放射抗性的相关性。方法取人食管鳞状细胞癌细胞株Eca-109,采用多次逐渐递增剂量的射线照射建立人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R;另取Eca-109细胞,待细胞培养至融合度达到50%~70%时将miR-205 mimics转染入Eca-109细胞,形成Eca-109 miR-205过表达细胞。根据照射剂量将Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞分别分为0 Gy组、2 Gy组、4 Gy组、6 Gy组、8 Gy组、10 Gy组。用倒置显微镜观察Eca-109和Eca-109R细胞的形态,细胞计数试剂盒-8实验检测Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞的存活率;细胞克隆形成实验检测Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞的增殖情况;反转录聚合酶链式反应检测Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞中miR-205的表达水平。结果Eca-109细胞形态均一,大小一致,大多呈片状或梭状,折光性良好;Eca-109R细胞可见少量多角形细胞,伴有颗粒感,折光性差。在0 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞与Eca-109细胞的存活率和细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。在2、4、6 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞的存活率和细胞增殖能力显著高于Eca-109细胞(P<0.05)。在8 Gy组,Eca-109R细胞的存活率和细胞增殖能力显著高于Eca-109细胞(P<0.05);Eca-109 miR-205过表达细胞与Eca-109细胞的存活率和细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。在10 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞与Eca-109细胞的存活率和细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。在0 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞中miR-205的相对表达量显著高于Eca-109细胞(P<0.05)。在4 Gy组,Eca-109R细胞中miR-205的相对表达量显著高于Eca-109细胞(P<0.05)。4 Gy组的Eca-109细胞中miR-205的相对表达量显著高于0 Gy组中Eca-109细胞(P<0.05);4 Gy组的Eca-109R细胞中miR-205的相对表达量显著高于0 Gy组的Eca-109R细胞(P<0.05)。结论miR-205的表达与人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R的放射抗性具有相关性,过表达miR-205可提高食管癌细胞的放射抗性。

8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞生长相关基因表达的影响

目的探讨８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人Ｅｃａ－１０９细胞与生长相关基因表达的影响。方法体外培育的人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞受８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后，用原位杂交、免疫组织化学及ＲＮＡ、蛋白质斑点印迹技术研究了与细胞生长相关的几种基因的表达变化。结果８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可减弱ＥＧＦＲ、Ｈ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ、突变型ｐ５３等基因的表达，增强野生型ｐ５３基因表达和ｐ２１ＷＡＦ１蛋白的表达。结论８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可通过影响有关信号传递和细胞周期进程基因表达而抑制细胞生长。

丹皮酚体内外抗人食管癌Eca-109细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的研究丹皮酚(paeonol,Pae)在体内外对人食管癌细胞Eca-109的抑瘤作用及其对细胞凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)体外试验法和灌胃给药体内抗肿瘤试验。光镜及电镜观察各组的肿瘤组织的形态学变化。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡指数。结果丹皮酚在体外对Eca-109细胞有明显的细胞毒作用,半数抑制浓度(IC50)为0.342mmol·L-1;体内灌胃给予丹皮酚25、50、100和200mg·kg-1对裸鼠移植人食管癌Eca-109的抑制率分别为10.67%、23.54%、27.91%和34.46%;顺铂5mg·kg-1组抑瘤率为58.71%;丹皮酚在100mg·kg-1剂量下与顺铂5mg·kg-1联合用药抑制率为77.91%。光镜下用药组可见较多凋亡的肿瘤细胞。透射电镜下可见肿瘤细胞核染色质浓缩边聚、胞质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等典型的凋亡表现。用药组凋亡指数较对照组明显增加。结论丹皮酚在体内外具有抑制人食管癌Eca-109细胞增殖及诱导其凋亡作用。

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞周期及凋亡的影响

目的 :观察 8 Br cAMP和槲皮素 (quercetin)对Eca 10 9细胞周期及凋亡的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C组 :不加任何药物 ,只加入新培养液培养。 3组在同等条件下继续培养 4 8h。采用流式细胞仪检测细胞的周期 ,采用TUNEL法检测细胞凋亡百分率 ,采用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞DNA降解情况。结果 :2实验组细胞中G2 M期细胞比例较对照组显著上升 (P <0 .0 1)。细胞凋亡百分率 :2实验组显著高于对照组 (P <0 .0 1) ;Br组和Q组相比 ,差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。DNA琼脂糖凝胶电泳中Br组和Q组皆呈DNA“梯样型”带 ,对照组未呈现DNA降解。结论 :8 Br cAMP和槲皮素皆可阻滞Eca 10 9细胞于G2 M期 ,并进一步诱导Eca 10 9细胞凋亡。

苦马豆素对人食道癌Eca-109细胞体外生长的抑制试验

探讨苦马豆素 (SW)对人食道癌 Eca-10 9细胞生长的抑制作用 ,以揭示 SW治疗食道癌的作用机制。选用不同剂量的 SW与食道癌Eca- 10 9细胞共同培养不同时间后 ,用 MTT法观察 SW对食道癌 Eca- 10 9细胞生长的抑制作用 ;细胞 DNA经特异性荧光染色后 ,用流式细胞仪分析细胞周期变化。结果 :SW对食道癌Eca- 10 9细胞生长的半数抑制浓度 IC50 <2 .5μg/ m L;细胞周期分析 ,Eca- 10 9细胞 G1期细胞增多 ,S期细胞减少。结果表明 :SW可通过抑制人食道癌 Eca- 10 9细胞系生长达到抑制肿瘤的目的。

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38和Caspase-3表达的影响

目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞凋亡中P38、Caspase 3表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分为 3组 :①对照组 :只加DMEM(Sigma)培养液 (含体积分数 10 %胎牛血清 )培养 4 8h。②Br组 :终浓度为 2× 10 -5mol/L 8 Br cAMP的培养液培养 4 8h。③Q组 :终浓度为 4 3μmol/L槲皮素的培养液培养 4 8h。对以上 3组细胞以TUNEL法染色计数细胞凋亡率。以免疫组化方法观察 3组细胞的P38MAPK IR和Caspase 3 IR反应性。结果 :Br组及Q组细胞凋亡率高于对照组 ;Br组及Q组细胞的P38MAPK IR高于对照组 ;Br组及Q组细胞的Caspase 3 IR亦高于对照组。P38MAPK IR与Caspase 3 IR呈正相关。P均 <0 .0 5。结论 :P38MAPK及Caspase 3参与了 8 Br cAMP及槲皮素诱导的Eca 10

α-细辛醚对食管癌Eca-109细胞线粒体凋亡通路的影响

目的探讨α-细辛醚对人食管癌Eca-109细胞线粒体凋亡通路Cyt-c、Smac及Caspase3 mRNA和蛋白表达水平的影响。方法体外培养的人食管癌Eca-109细胞设为阴性对照组和α-细辛醚组,α-细辛醚终浓度分别为25,50,100μg·m L^(-1),培养48 h后使用荧光倒置显微镜观察细胞凋亡形态改变,采用TRIzol法提取细胞总RNA,实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞Cyt-c、Smac及Caspase3 mRNA的表达,Western blotting检测其蛋白表达,选取β-actin进行相对定量分析。结果α-细辛醚组细胞形态发生明显凋亡改变;与阴性对照组比较,α-细辛醚组细胞Cyt-c、Smac及Caspase3mRNA和蛋白的表达量均明显增加(P<0.05)。结论α-细辛醚可通过调节线粒体凋亡途径相关基因Cyt-c、Smac及Caspase3的表达增加诱导Eca-109细胞凋亡。

枸杞多糖诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的实验研究

目的研究枸杞多糖诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡作用及其作用机制。方法利用MTT染色在普通光镜下观察细胞凋亡形态学变化并观测枸杞多糖对肿瘤细胞的抑制率;通过流式细胞仪分析人食管癌细胞Eca-109凋亡率、细胞周期变化;DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测肿瘤细胞凋亡的DNA水平变化;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测细胞内钙离子浓度变化。结果经枸杞多糖作用后的人食管癌细胞Eca-109出现核固缩、凋亡小体、新月状浓染区等细胞凋亡形态学改变,各剂量LBP组的肿瘤细胞均表现生长抑制,且具有剂量依赖性,1000μg/mlLBP处理组的抑制率达96.02%。DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的梯形电泳条带。药物处理组的肿瘤细胞更多地被阻止于G2/M期,各剂量组均出现明显的凋亡变化,最大凋亡率可达21.3%。各剂量药物处理组的肿瘤细胞内的Ca2+浓度明显高于对照组(P<0.01)。结论枸杞多糖可明显抑制人食管癌细胞Eca-109的生长增殖,诱导细胞凋亡,并能改变该肿瘤细胞周期分布,阻止细胞周期于G2/M期。

α-细辛醚对Eca-109细胞凋亡及XIAP、caspase-3表达的影响

目的:观察α-细辛醚对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及XIAP、caspase-3表达的变化,探讨α-细辛醚的可能作用机制。方法:Eca-109细胞分为5组,分别给予5-氟尿嘧啶(阳性对照组),25、50、100 mg/Lα-细辛醚(α-细辛醚低、中、高剂量组)处理,或仅给予等体积的培养液(空白对照组)。培养48 h后,行AO/EB染色,荧光倒置显微镜下观察细胞形态,用MTT法、Annexin-V-PI法分别检测细胞增殖和凋亡,用Western blot、实时荧光定量PCR分别检测空白对照组、α-细辛醚中剂量组及高剂量组XIAP、caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平。结果:与空白对照组比较,α-细辛醚低、中、高剂量组及阳性对照组细胞的增殖率降低、凋亡率升高(P均<0.05)。与空白对照组比较,α-细辛醚中、高剂量组XIAP mRNA及蛋白的表达均降低,caspase-3 mRNA及蛋白的表达均升高(P均<0.05)。结论:α-细辛醚可下调XIAP的表达、上调caspase-3的表达,从而抑制Eca-109细胞增殖、促进其凋亡。

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响

目的 :探讨 8 Br cAMP及槲皮素等分化诱导剂对Eca 10 9细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响。 方法 :将培养的Eca 10 9细胞分为 3组 :①加 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②加槲皮素组 (Q组 ) ;③不加任何药物对照组 (C组 )。同时培养 4 8h ,将野生型DNApolβ的cDNA ,EGFRcDNA ,野生型 (wt)p5 3cDNA及c myccDNA分别制备了生物素 /地高辛标记的探针进行原位杂交和RNA斑点印迹阵列。另进行POLB ,XRCC1,VEGF及PCNA的免疫组化染色及免疫斑点印迹阵列。结果 :Br组和Q组的DNApolβ ,EGFR ,c myc基因表达下调而wtp5 3基因表达上调。POLB ,XRCC1,PCNA及VEGF免疫斑点印迹减弱。 8 Br cAMP及槲皮素显著下调Eca 10 9细胞的DNApolβ基因表达及相关癌基因表达 ,同时上调抑癌基因的表达。作为POLB的异二聚体XRCC1及恶性细胞生物标志的PCNA及VEGF表达下调。结论 :分化诱导剂下调Eca 10 9细胞DNApolβ基因表达 ,提示Eca 10 9细胞的polβ基因是高表达的 ;功能调整后的polβ通过相关基因表达的改变尤其是wtp5

槲皮素诱导人食管癌Eca-109细胞发生自噬及其作用的研究

目的明确槲皮素(quercetin,QUE)处理人食管癌Eca-109细胞后是否发生自噬及自噬在QUE抑制细胞增殖中的作用。方法用不同剂量(0、12.5、25、37.5和50μg/m L)QUE处理人食管癌Eca-109细胞24 h后,MTT检测细胞增殖率;激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬标志蛋白LC3荧光强度;Western blot分别检测LC3和Beclin-1的表达情况。自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)预处理2 h后,以不同剂量QUE(0、12.5、25、37.5和50μg/m L)处理人食管癌Eca-109细胞24 h,MTT检测细胞增殖。结果 QUE显著抑制了Eca-109细胞的增殖,并呈剂量效应关系(P<0.05)。与对照组相比,随着QUE剂量的增加,激光共聚焦显微镜观察到在细胞内LC3荧光逐渐增强,LC3和Beclin-1蛋白表达逐渐升高。自噬抑制剂预处理后,MTT结果显示QUE+CQ组的细胞增殖率明显低于QUE单独处理组(P<0.05)。结论 QUE既可以抑制人食管癌Eca-109细胞增殖,又可以诱导细胞发生保护性自噬。抑制自噬能够增加槲皮素对肿瘤细胞的抑制作用。

^(125)I放射性粒子对体外培养的食管癌Eca-109细胞株克隆形成的影响

目的:研究125I放射性粒子对体外培养的人食管癌Eca-109细胞克隆形成率的影响。方法:取高糖型DMEM培养的对数生长的人食管癌Eca-109细胞,制成单细胞悬液,细胞计数并稀释,接种于35mm直径培养皿。设置A组:对照组(不加粒子),B组:低剂量实验组(加入0.2mCi125I粒子1枚),C组:中剂量实验组(加入0.4mCi125I粒子1枚),D组:高剂量实验组(加入0.8mCi125I粒子1枚),37℃、5%CO2恒温培养箱进行培养,于培养后第1-7日进行各组克隆计数并计算克隆形成率。结果:1周后A、B、C、D各组克隆形成率分别为72.73%、57.84%、34.41%、22.35%,实验组各组细胞克隆形成率均低于对照组,差别有统计学意义(P<0.05);C组与B组,D组与B组比较,有显著统计学意义(χ2=10.73,P<0.01;χ2=24.02,P<0.01);D组与C组比较,差别无统计学意义(χ2=3.16,P>0.05)。结论:125I放射性粒子可以降低体外培养的人食管癌Eca-109细胞克隆形成率。

熊果酸诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的作用及机制

目的研究熊果酸(Ursolicacid,UA)抑制人食管癌Eca-109细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用及机制。方法MTT比色法检测熊果酸对Eca-109细胞的增殖抑制作用;透射电镜观察经熊果酸处理后Eca-109细胞超微结构的改变;流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率;Westernblot法检测P27kip1蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果20～50μmol/L熊果酸对Eca-109细胞具有显著的抑制作用(P<0.01);电镜下,18.32～36.65μmol/L熊果酸处理过的Eca-109细胞可见典型的凋亡形态及坏死形态;流式细胞检测显示细胞凋亡率及G0/G1期细胞随着熊果酸浓度的增加而增多,S期细胞逐渐减少;Westernblot检测结果提示熊果酸能使Bcl-2表达下降而Bax、P27kip1增加。结论熊果酸对人食管癌细胞系Eca-109具有显著的增殖抑制、诱导细胞凋亡作用。其作用与提高P27kip1蛋白的表达,将细胞阻滞在G0/G1期,下调Bcl-2的表达和增加Bax的表达有关。

汉防己甲素对人食管癌细胞株Eca-109放射增敏研究

目的研究汉防己甲素(Tet)在γ射线照射人食管癌细胞株Eca-109中的放射增敏作用,并探讨其机制。方法采用克隆形成分析法测定Tet对人食管癌细胞株Eca-109放射敏感性的影响,流式细胞术分析Eca-109细胞经放射线照射后细胞周期的再分布情况,Western blotting法分析周期相关蛋白表达以及分裂指数法分析Tet对照射后细胞分裂的影响。结果在Eca-109细胞中,Tet显著增加γ射线的杀伤作用,其增敏比为1.43;在γ射线照射后,细胞明显阻滞于G2期,Tet可以降低这种阻滞。Eca-109细胞在受到γ射线照射后其Cyclin B1与Cdc2蛋白表达水平明显降低,Tet可以逆转γ射线对Cyc-lin B1与Cdc2蛋白的表达的抑制作用。Tet可以促使阻滞于G2期的Eca-109细胞进人M期。结论 Tet能显著增加γ射线对人食管癌细胞的杀伤作用,其作用机制可能与Tet去除放射引起的G2/M期阻滞有关。