ECEL1基因PSCSI-GFP慢病毒载体的构建

目的设计并构建针对ECEL1基因的RNA干扰慢病毒载体。方法依照ECEL1基因为模板,设计RNA干扰靶点,根据选定的靶点序列,设计短发夹RNA(shRNA)干扰序列,在两端添加相应的限制性内切酶酶切位点,合成单链DNA oligo,退火缓冲液中配对形成双链DNA oligo。利用Age I和EcoR I双酶线性化GV115载体。把载体和DNA oligo相连接,其连接产物转化大肠杆菌感受态细胞,经PCR扩增并测序鉴定。再通过质粒抽提,转染,浓缩与纯化后获得重组的ECEL1基因RNAi慢病毒,用"HIV-1p24抗原ELISA法"测定样品滴度。选取检测合格的慢病毒感染人肝癌细胞(BEL-7404),并设置对照组,荧光观察感染率。并使用Real-time PCR法及Western blot检测人肝癌细胞(BEL-7404)中ECEL1基因敲减后mRNA和蛋白质的表达量。2组间比较采用两独立样本t检验。结果(1)根据ECEL1基因模板设计后,选定psc48784片段作为RNA干扰靶点,制备双链DNA oligo,PCR鉴定阳性重组子并测序,验证psc48784为正确的克隆。经过质粒抽提,转染以及浓缩纯化后,成功构建ECEL1基因RNAi慢病毒。物理检测与无菌检测合格。(2)通过HIV-1 p24抗原ELISA法测定ECEL1基因RNAi慢病毒样品病毒滴,测定样品病毒滴度为3×108TU/ml;表明已成功构建高滴度且合格的ECEL1基因RNA干扰慢病毒。(3)用ECEL1基因RNAi慢病毒感染人肝癌细胞(BEL-7404),荧光观察结果显示细胞感染效率达到80%,细胞状态稳定;使用Real-time PCR的方法及Western blot检测实验组人肝癌细胞(BEL-7404)中ECEL1基因在mRNA和蛋白质水平的表达量受到抑制(P值均<0.05),敲减效率达到70.5%。结论成功构建ECEL1基因PSCSI-GFP慢病毒载体并获得稳定高滴度的病毒样品,并获得稳定的ECEL1基因敲减的人肝癌细胞(BEL-7404)。

EXCEL在汽轮机变工况热力核算中的应用

利用Excel对汽轮机变工况进行计算 ,其计算过程与结果表明 ,采用此方法能使计算一目了然 ,易学易用 ,也方便调整文档和查看结果 ,适合高校的汽轮机课程教学工作。

唐爱平被资本青睐的电子表格

麦肯锡公司《软件业的成功奥秘》一书中提到软件企业进行收购业务以创造获胜的产品组合“的理念、前几天金蝶总裁徐少春在接受《科贸新观察》记者采访时也提到:“中国现在的软件企业太分散、无法形成强大的力量、随着加入WTO,中国软件企业间的合并和收购事件会越来越多。”本次我们就跟踪了最近发生的比较有代表性的软件企业收购事件。让我们从被收购方的角度了解这次收购的过程、希望从中吸取有益的经验。

2012年农化国际（FCl）贸易高峰论坛会在加纳开幕

5月8日一9日，由美国《农化国际》（FARMCHEMICALINTERNATIONAL）杂志举办的2012年加纳农化国际贸易高峰论坛及衣展会在加纳首都阿克拉国际会议中心举行，新安阳光加纳公司、山东滨农、山东侨昌、青岛海利尔、山东润科、江苏好收成、南京红太阳、安徽华星、深圳保诚、浙江禾本、浙江化工进出口、浙江世佳科技、印度ECEL等中国、印度、新加坡的50多家农药、化肥制造供应商和贸易商参展，加纳、尼日利亚等国上规模的农药进口商到场参观并就自己需求的产品同相关供应商、贸易商进行了洽谈。

VFP中的SQL和Excel技术

为了弥补VisualFoxPro(以下简称VFP)中报表功能的不足 ,给出了通过VFP中的SQL结构化查询命令 ,将VFP中的数据导入到Excel中的方法 ,解决了将VFP强大的数据查询和统计功能与Excel强大的计算和表格功能相结合的问题 .

弓形虫Ⅰ/Ⅱ型ROP16蛋白对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和周期及增殖的影响

为了探讨刚地弓形虫Ⅰ(RH)、Ⅱ(Me49)型ROP16蛋白对SH-SY5Y细胞凋亡、周期及增殖的影响,本研究通过表达Ⅰ、Ⅱ型ROP16蛋白(HBLV-ROP16Ⅰ、HBLV-ROP16Ⅱ)和空载(HBLV-NC)的慢病毒感染SH-SY5Y细胞以获得稳转株,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western-blot验证SH-SY5Y细胞内ROP16过表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,CCK-8法检测细胞增殖情况,RT-PCR和Western-blot分别对凋亡相关因子(Bax、p53、Bcl-2、Caspase-9)及细胞周期相关因子(p21、CDK6)的mRNA和蛋白表达水平进行检测。结果显示,相比于空白组(Control)和空载体组(HBLV-NC),过表达组(HBLV-ROP16Ⅰ、HBLV-ROP16Ⅱ)细胞的ROP的16 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),说明稳转株构建成功;过表达组细胞的凋亡比率、G1期细胞比率均显著升高(P<0.05),而细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡相关因子(Bax、p53、Caspase-9)及p21的mRNA及蛋白均高表达(P<0.05),而抗凋亡因子Bcl-2和促细胞周期G1/S转化因子CDK6的mRNA及蛋白均低表达(P<0.05)。相比于空白组,空载体组均无明显变化(P>0.05)。上述结果表明弓形虫Ⅰ、Ⅱ型ROP16蛋白可诱导SH-SY5Y细胞凋亡、细胞周期阻滞在G1期及抑制SH-SY5Y细胞增殖。