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Echinococcus Granulosus 14-3-3 Protein:A Potential Vaccine Candidate Against Challenge with Echinococcus Granulosus in Mice 被引量:20
1
作者 LI Zong Ji WANG Ya Na +1 位作者 WANG Qi ZHAO Wei 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2012年第3期352-358,共7页
Objective To investigate the protective immunity against Echinococcus granulosus in mice immunized with rEg14-3-3. Methods ICR mice were subcutaneously immunized three times with rEg14-3-3, followed by the challenge w... Objective To investigate the protective immunity against Echinococcus granulosus in mice immunized with rEg14-3-3. Methods ICR mice were subcutaneously immunized three times with rEg14-3-3, followed by the challenge with Echinococcus granulosus protoscoleces intraperitoneally and then sacrificed after six months of post-challenge to detect the proliferation of splenocytes by MTT assay, and to measure the secretion of IL-2, IL-4, IL-20, and IFN -y by ELISA. The rate of reduced hydatid cyst and the levels of IgE, igG and IgG subclasses in sera were examined. Results Mice vaccinated with rEg14-3-3 and challenged with protoscoleces revealed significant protective immunity of 84.47%. ELISA analysis indicated that the immunized mice generated specific high levels of IgG and the prevailing isotypes of IgG were IgG1 and IgG2a. Splenocytes from mice immunized with rEg14-3-3 showed a significant proliferation response. The secretion of IFN-V and IL-2 increased significantly in the vaccinated mice whereas there was no significant difference in IL-4 and IL-20 levels between vaccinated and control mice. Conclusion The results indicate that the rEg24-3-3 vaccine could induce a high level of protective immunity as a promising vaccine candidate to prevent cystic echinococcosis. 展开更多
关键词 Eg14-3-3 echinococcus granulosus VACCINE IMMUNOPROTECTION
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pTWIN1-EgAgB8/3自剪切融合蛋白原核表达载体的构建及表达 被引量:1
2
作者 张瑞妮 吾拉木·马木提 +1 位作者 于春洋 法蒂玛·木特力甫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期154-158,共5页
目的表达获得较纯的细粒棘球绦虫AgB8/3重组抗原(rEgAgB8/3)。方法根据GeneBank登陆号(AF362442)下载目的基因核酸序列,利用DNAman软件设计引物,对EgAgB8/3编码分泌型多肽片段的核酸序列进行PCR扩增,测序鉴定其正确性后定向连入原核表... 目的表达获得较纯的细粒棘球绦虫AgB8/3重组抗原(rEgAgB8/3)。方法根据GeneBank登陆号(AF362442)下载目的基因核酸序列,利用DNAman软件设计引物,对EgAgB8/3编码分泌型多肽片段的核酸序列进行PCR扩增,测序鉴定其正确性后定向连入原核表达质粒pTWIN1上,并转化至大肠杆菌ER2566,IPTG诱导表达CBD-intein1-EgAgB8/3融合蛋白后进行纯化,用SDS-PAGE电泳和western blot分析鉴定融合蛋白与目的蛋白rEgAgB8/3的表达量和纯度。结果成功克隆获得EgAgB8/3基因目的片段和具有蛋白自剪切功能的重组表达载体pTWIN1-EgAgB8/3,并鉴定其表达的融合蛋白主要以可溶形式存在;构建的重组载体中融合标签的几丁质结合域(CBD)和内含肽(intein1)分别使亲和层析纯化和融合标签自剪切一步完成。结论成功的构建重组表达载体pTWIN1-EgAgB8/3,获得高表达融合蛋白CBD-intein1-EgAgB8/3,并经简单后续处理即可获得含极少任何额外氨基酸的可溶性目的蛋白rEgAgB8/3,尽可能保证了其原有的结构和活性,为抗rEgAgB8/3特异性单克隆抗体的快速制备奠定了基础。 展开更多
关键词 棘球绦虫 egagb8/3 pTWIN1表达载体 诱导表达纯化 WESTERN BLOT
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新疆细粒棘球绦虫EgAgB8/3蛋白的生物信息学分析及意义 被引量:1
3
作者 马海梅 吾拉木.马木提 +3 位作者 张峰波 庞盼 赵慧 丁剑冰 《中国医药导报》 CAS 2017年第14期8-11,共4页
目的分析新疆细粒棘球蚴EgAgB8/3蛋白氨基酸序列,了解该蛋白特性,预测其抗原表位,为进一步研究和选择包虫病免疫学诊断与防治的最佳候选抗原提供理论依据。方法利用生物信息学方法推测EgAgB8/3蛋白氨基酸序列及理化性质,用不同的生物信... 目的分析新疆细粒棘球蚴EgAgB8/3蛋白氨基酸序列,了解该蛋白特性,预测其抗原表位,为进一步研究和选择包虫病免疫学诊断与防治的最佳候选抗原提供理论依据。方法利用生物信息学方法推测EgAgB8/3蛋白氨基酸序列及理化性质,用不同的生物信息学软件分析EgAgB8/3蛋白的特性及二级结构,并结合多参数预测其抗原表位。结果 EgAgB8/3抗原是由75个氨基酸残基组成的多肽,相对分子质量为8.58×10~3,等电点为8.5;蛋白特性分析显示EgAgB8/3蛋白α螺旋、β折叠、β转角和无规卷曲等二级结构特点,有3个β转角较好区域可作为表位所在参考区段;3种软件多参数综合分析预测,EgAgB8/3蛋白抗原表位集中在1~7(FVVVAHA)、6~19(HADDDDDEVTKTKK)、32~38(FQSDPLG)区段。结论运用生物信息学分析方法预测到EgAgB8/3抗原3个B细胞的优势表位,对进一步研究EgAgB8/3抗原性和研发更有价值的包虫病免疫诊断与防治靶标具有重要意义。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 egagb8/3 生物信息学 表位
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细粒棘球蚴感染小鼠早期阶段Tim-3表达的初步分析 被引量:4
4
作者 徐芳洁 印双红 +4 位作者 侯隽 方海瑞 蒋红群 吴向未 陈雪玲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1616-1621,1626,共7页
目的:了解Tim-3作为一个新型促炎因子,在细粒棘球蚴感染小鼠的早期阶段的表达水平。方法:原头蚴感染BALB/c小鼠后1、5、9、13天,取其腹腔巨噬细胞和脾细胞。采用流式细胞术(FCM)检测各时间点腹腔巨噬细胞、脾巨噬细胞、脾CD3+细胞Tim-3... 目的:了解Tim-3作为一个新型促炎因子,在细粒棘球蚴感染小鼠的早期阶段的表达水平。方法:原头蚴感染BALB/c小鼠后1、5、9、13天,取其腹腔巨噬细胞和脾细胞。采用流式细胞术(FCM)检测各时间点腹腔巨噬细胞、脾巨噬细胞、脾CD3+细胞Tim-3的表达水平。采用qRT-PCR法检测各时间点TLR4的mRNA水平。结果:细粒棘球蚴组与对照组小鼠CD3+脾细胞Tim-3表达无明显差别;小鼠脾脏巨噬细胞(9、13天)、腹腔巨噬细胞(5、9、13天)表面Tim-3表达水平较对照组有升高,与对照组有显著差异(P<0.05)。巨噬细胞数量无明显变化。小鼠感染细粒棘球蚴第1天时TLR4 mRNA的表达水平升高,并与对照组有显著差异(P<0.05)。结论:小鼠感染细粒棘球蚴早期,巨噬细胞Tim-3的表达升高,并可能通过下调TLR4的表达,抑制了巨噬细胞功能,从而抑制宿主的免疫杀伤,产生了免疫逃避作用。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 TIM-3 TLR4 巨噬细胞
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细粒棘球蚴重组14-3-3基因的表达、纯化及免疫学鉴定 被引量:7
5
作者 黄瑾 李宗吉 +5 位作者 张静 王淑静 王洁 张焱 高岭 赵巍 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第4期253-256,共4页
目的构建细粒棘球蚴14-3-3基因的重组质粒并原核表达、纯化该重组蛋白,对其免疫学特性进行初步鉴定。方法从重组质粒pGEM-T/Eg14-3-3中获取14-3-3基因,亚克隆于表达载体pET28a构建基因工程菌株,并表达、纯化重组蛋白,经Western blot、EL... 目的构建细粒棘球蚴14-3-3基因的重组质粒并原核表达、纯化该重组蛋白,对其免疫学特性进行初步鉴定。方法从重组质粒pGEM-T/Eg14-3-3中获取14-3-3基因,亚克隆于表达载体pET28a构建基因工程菌株,并表达、纯化重组蛋白,经Western blot、ELISA对该蛋白的免疫学特性进行初步研究。结果成功构建含目的片段14-3-3的基因工程菌株;ELISA检测显示,用表达、纯化的重组蛋白免疫小鼠,诱导产生了特异性抗体,Western blot鉴定该抗体能识别重组抗原及原头蚴、囊液、囊壁抗原。结论构建的pET28a/Eg 14-3-3菌株能高效表达14-3-3蛋白,初步鉴定该重组蛋白具有较好的抗原性和免疫原性。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 14—33蛋白 基因克隆 表达 纯化 免疫鉴定
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细粒棘球绦虫(中国大陆株)14-3-3重组蛋白的免疫保护力 被引量:6
6
作者 李宗吉 雄英 +1 位作者 孙俊峰 赵巍 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期676-679,706,共5页
目的探讨细粒棘球蚴Eg14-3-3重组蛋白的免疫保护性及其伴随的免疫反应。方法 ICR小鼠随机分为rEg14-3-3蛋白免疫组和PBS佐剂对照组,每隔2周背部皮下免疫1次,连续免疫3次。在第3次免疫后6周,用细粒棘球蚴活的原头蚴进行攻击感染,感染后2... 目的探讨细粒棘球蚴Eg14-3-3重组蛋白的免疫保护性及其伴随的免疫反应。方法 ICR小鼠随机分为rEg14-3-3蛋白免疫组和PBS佐剂对照组,每隔2周背部皮下免疫1次,连续免疫3次。在第3次免疫后6周,用细粒棘球蚴活的原头蚴进行攻击感染,感染后24周杀鼠取脾,分离培养脾细胞,MTT检测淋巴细胞增殖率,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、IL-10和IL-4水平,同时检获棘球蚴包囊数并计算减囊率,用ELISA法测定血清中IgG及其亚型和IgE水平。结果与佐剂对照组比较,rEg14-3-3蛋白免疫组小鼠的免疫保护力为84.47%,rEg14-3-3蛋白免疫组小鼠血清IgG、IgG1、IgG2a抗体水平高于对照组(P<0.05);IgE略低,但两组间差异无统计学意义;淋巴细胞增殖实验结果显示rEg14-3-3免疫组小鼠脾淋巴细胞特异抗原刺激后增殖显著,免疫组淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2分泌水平显著高于对照组,而IL-4、IL-10在两组间差异无统计学意义。结论 rEg14-3-3蛋白能诱导小鼠产生高水平的免疫保护力,是潜在的疫苗候选抗原分子。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 rEg14-3-3 疫苗 免疫保护力 IL-2 IFN-γ IL-10 IL-4 IgG IGE
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细粒棘球蚴重组抗原B诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的研究 被引量:6
7
作者 单骄宇 纪卫政 +4 位作者 吐尔洪江.吐逊 李亮 张传山 林仁勇 温浩 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期111-116,共6页
目的观察细粒棘球蚴重组抗原B(rAgB)体外诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从小鼠股骨中分离出骨髓细胞,进行小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)的诱导,培养并获得CD11c+树突状细胞。应用倒置显微... 目的观察细粒棘球蚴重组抗原B(rAgB)体外诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从小鼠股骨中分离出骨髓细胞,进行小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)的诱导,培养并获得CD11c+树突状细胞。应用倒置显微镜和扫描电镜观察树突状细胞形态,采用流式细胞术检测其表面标志物;用混合淋巴细胞反应(MLR)观察树突状细胞对T淋巴细胞的增殖能力。培养至第6天,收集未成熟树突状细胞进行流式细胞术检测;另向部分未成熟树突状细胞中加脂多糖(LPS)刺激24 h后,收集成熟树突状细胞,进行流式细胞术检测。在获得的未成熟树突状细胞中分别加入RPMI 1640完全培养液(为阴性对照组)、重组小鼠γ干扰素(rmIFN-γ,1 000 U/ml,为IFN-γ组)和rAgB(终浓度15μg/ml,为rAgB组),培养24 h后,通过细胞免疫组织化学和蛋白质印迹(Western blot-ting)检测各组树突状细胞IDO的表达情况。结果获得纯度为80%的CD11c+树突状细胞,在倒置显微镜和扫描电镜下均观察到典型树突状细胞。经LPS刺激的成熟树突状细胞的CD40、CD80和主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子I-A/I-E的阳性表达率与未成熟树突状细胞的相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。MLR结果显示,诱导形成的树突状细胞具有刺激T淋巴细胞增殖的能力。细胞免疫组织化学方法检测结果显示,阴性对照组、阳性对照组和rAgB组的IDO阳性表达率分别为(4.544±1.752)%、(20.464±4.452)%和(11.148±1.966)%,3组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blotting结果表明,3组IDO蛋白与相应甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)蛋白的灰度值之比分别为(0.229±0.085)、(0.794±0.114)和(0.573±0.129),其中rAgB组与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),与IFN-γ组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论细粒棘球蚴重组抗原B在体外具有诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的功能。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴重组抗原B 树突状细胞 吲哚胺2 3-双加氧酶 免疫耐受
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重组BCG-EgG1Y162蛋白免疫小鼠对细粒棘球蚴感染中Tim-3因子表达的影响 被引量:3
8
作者 李玉娇 沙桐 +5 位作者 张峰波 赵慧 杨妍 刘斌 王红英 丁剑冰 《新疆医科大学学报》 CAS 2019年第1期1-5,共5页
目的探讨重组BCG-EgG1Y162蛋白免疫小鼠后,感染包虫病的小鼠免疫细胞Tim-3因子的动态改变和表达。方法采用实验小鼠30只,随机分为2组,实验组用BCG-EgG1Y162疫苗免疫小鼠,对照组注射生理盐水,各免疫1次。免疫第10周后,用细粒棘球蚴进行... 目的探讨重组BCG-EgG1Y162蛋白免疫小鼠后,感染包虫病的小鼠免疫细胞Tim-3因子的动态改变和表达。方法采用实验小鼠30只,随机分为2组,实验组用BCG-EgG1Y162疫苗免疫小鼠,对照组注射生理盐水,各免疫1次。免疫第10周后,用细粒棘球蚴进行小鼠腹腔内注射,在免疫后的第24周采血,用实时荧光定量PCR法分别检测15例正常对照组小鼠和15例实验组小鼠外周血中Tim-3、Galectin-9的表达,同时用酶联免疫吸附(ELISA)法检测2组血清中可溶性Tim-3、Galectin-9及IFN-γ、IL-12和IL-4的水平。流式细胞仪检测小鼠脾细胞悬液中Tim-3、CD4^+T、CD8^+T、CD4^+T/CD8^+T细胞的表达。结果经实时荧光定量PCR检测结果显示:正常对照组的小鼠在感染包虫后体内的Tim-3和Galectin-9mRNA水平显著升高,实验组小鼠在经过BCG-EgG1Y162疫苗免疫后,体内的Tim-3和Galectin-9水平显著降低与正常对照组相比差异有统计学意义(P <0.05)。ELISA实验检测显示:实验组小鼠血清中存在的可溶性Tim-3和Galectin-9水平,与正常对照组相比,水平显著降低;流式细胞仪检测也发现免疫组存在Tim-3降低。结论小鼠在经过BCG-EgG1Y162疫苗免疫后,在细粒棘球蚴持续性感染中能够明显纠正Tim-3、Galectin-9的高表达,进一步影响Th1/Th2的相关转录因子T-bet/GATA-3和细胞因子IFN-γ、IL-12和IL-4的水平的改变,从而纠正Th1/Th2免疫细胞失衡的现象,抑制感染的进一步发展。 展开更多
关键词 BCG-EgG1Y162 Tim-3因子 细粒棘球蚴
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我国细粒棘球绦虫新疆分离株AgB8/3亚基克隆表达及其检测囊型包虫病价值分析 被引量:2
9
作者 高春花 崔刚 +3 位作者 汪俊云 杨玥涛 石锋 朱慧慧 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期966-969,共4页
目的评价重组细粒棘球蚴AgB8/3亚基检测囊型包虫病价值。方法从新疆源细粒棘球蚴原头节中提取总RNA,通过RT-PCR扩增目的基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,IPTG诱导表达,用亲和层析法纯化重组蛋白,用ELISA... 目的评价重组细粒棘球蚴AgB8/3亚基检测囊型包虫病价值。方法从新疆源细粒棘球蚴原头节中提取总RNA,通过RT-PCR扩增目的基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,IPTG诱导表达,用亲和层析法纯化重组蛋白,用ELISA方法评价其诊断价值并与本课题组制备的重组AgB8/1和AgB8/2进行比较。结果酶切鉴定及测序分析表明,成功构建细粒棘球蚴pGEX-3X-AgB8/3重组质粒,并在原核细胞用IPTG成功诱导目的蛋白表达。rAgB8/3检测囊型包虫病患者血清的敏感度为55.9%(66/118);检测泡型包虫病患者血清阳性率为44.12%(15/34);59份其它寄生虫病患者血清中除3份囊尾蚴病人血清阳性外,其他均为阴性;50份健康者血清全部为阴性,总特异度为87.4%(125/143)。rAgB8/3检测的敏感度与rAgB8/1相当(P>0.05)而低于rAgB8/2(P<0.05);rAgB8/3检测的特异度与rAgB8/1和rAgB8/2均无统计学差异(P>0.05)。结论成功构建新疆源细粒棘球蚴pGEX-3X-AgB8/3重组质粒并在原核细胞表达,rAgB8/3检测囊型包虫病结果与rAgB8/1无统计学差异。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 AgB8/3亚基 基因克隆和表达 ELISA
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新疆细粒棘球蚴免疫诊断抗原B亚单位3基因的克隆及序列分析 被引量:1
10
作者 马海梅 陈洁 +3 位作者 古力帕丽.麦曼提依明 陈璐 丁剑冰 吾拉木.马木提 《新疆医科大学学报》 CAS 2011年第3期236-239,共4页
目的确定细粒棘球蚴抗原B亚单位3(EgAgB8/3)的特性并为研究其免疫功能奠定基础。方法根据已报道的编码EgAgB8/3的基因序列(AF362442)设计引物,进行基因扩增,利用DNAstarProtean软件对该抗原进行分析。结果成功克隆到EgAgB8/3基因,扩增... 目的确定细粒棘球蚴抗原B亚单位3(EgAgB8/3)的特性并为研究其免疫功能奠定基础。方法根据已报道的编码EgAgB8/3的基因序列(AF362442)设计引物,进行基因扩增,利用DNAstarProtean软件对该抗原进行分析。结果成功克隆到EgAgB8/3基因,扩增片段为207 bp;序列比对结果显示,新疆细粒棘球蚴EgAgB8/3基因与GenBank登录号为AF362442序列完全一致,同源性为100%。对该抗原分析认为具有潜在的抗原表位位点。结论细粒棘球蚴EgAgB8/3在对包虫病的免疫诊断上是较好的候选抗原,并为研究该蛋白的免疫功能及建立以EgAgB8/3抗原为主的包虫病终末宿主免疫诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 抗原B8/3 聚合酶链反应(PCR)
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细粒棘球蚴病患者Tim-3/Galectin-9对Th17/Treg的影响作用 被引量:1
11
作者 张峰波 李玉娇 +3 位作者 沙桐 赵骁 陈志强 丁剑冰 《新疆医科大学学报》 CAS 2020年第7期852-857,共6页
目的探讨人细粒棘球蚴感染中T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3/半乳糖凝集素-9(Tim-3/Galectin-9)与Th17/Treg关系。方法收集28例细粒棘球蚴感染患者(CE组)以及30例健康体检人员(正常对照组)外周血,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细粒棘球蚴... 目的探讨人细粒棘球蚴感染中T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3/半乳糖凝集素-9(Tim-3/Galectin-9)与Th17/Treg关系。方法收集28例细粒棘球蚴感染患者(CE组)以及30例健康体检人员(正常对照组)外周血,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细粒棘球蚴感染患者外周血白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)、转化生长因子β(TGF-β)的水平,实时定量PCR检测Tim-3 mRNA、Galectin-9 mRNA以及Th17转录因子(RORγt)和Treg细胞转录因子(FOXP3),并进行相关性分析。结果细粒棘球蚴感染患者CD4^+T细胞上Tim-3表达水平高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);与正常对照组相比,CE组患者外周血中TGF-β、IL-10含量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。CE组患者血清中Galectin-9水平高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。而转录因子Foxp3在CE患者外周血单个核细胞(PBMC)中水平高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Tim-3^+CD4^+T和Galectin-9分别与TGF-β和IL-10呈正相关(P<0.05)。Tim-3mRNA、Galectin-9 mRNA分别与FOXP3呈正相关(P<0.05)。结论Tim-3/Galectin-9参与了细粒棘球蚴感染患者的免疫应答,Tim-3/Galectin-9可能通过改变Treg细胞转录因子及细胞因子,促进Th17/Treg细胞平衡改变,导致细粒棘球蚴持续感染。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴感染 Tim-3/Galectin-9 TH17/TREG
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细粒棘球蚴中国大陆株重组14-3-3蛋白基因的克隆和序列分析 被引量:6
12
作者 黄瑾 赵嘉庆 +5 位作者 王娅娜 丁淑琴 王健 李宗吉 张静 赵巍 《宁夏医学院学报》 2006年第2期93-95,98,共4页
目的对细粒棘球蚴中国大陆株14-3-3蛋白(E.g-14-3-3Pc)基因进行克隆及序列分析,为进一步重组抗原的表达奠定基础。方法根据互联网GeneBank中检索到的E.g-14-3-3Pc序列设计一对PCR 引物,用RT-PCR方法以细粒棘球蚴总RNA为模板扩增出目的... 目的对细粒棘球蚴中国大陆株14-3-3蛋白(E.g-14-3-3Pc)基因进行克隆及序列分析,为进一步重组抗原的表达奠定基础。方法根据互联网GeneBank中检索到的E.g-14-3-3Pc序列设计一对PCR 引物,用RT-PCR方法以细粒棘球蚴总RNA为模板扩增出目的DNA片段,并克隆于载体pGEM-T,测定其核苷酸序列。结果成功克隆出E.g-14-3-3Pc基因片段,测序证明克隆基因确为E.g-14-3-3Pc。结论成功构建细粒棘球蚴pGEM-E.g 14-3-3菌株。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 14-3-3蛋白 重组抗原 序列分析
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细粒棘球绦虫14-3-3zeta蛋白的生物信息学分析 被引量:1
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作者 符瑞佳 吕刚 +1 位作者 尹飞飞 梁培 《分子诊断与治疗杂志》 2015年第3期151-155,175,共6页
目的应用生物信息学技术对细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)14-3-3zeta蛋白的结构和功能进行预测和分析,为进一步的实验研究提供依据。方法利用美国国家生物技术信息中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息学研... 目的应用生物信息学技术对细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)14-3-3zeta蛋白的结构和功能进行预测和分析,为进一步的实验研究提供依据。方法利用美国国家生物技术信息中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY,http://expasy.org/)提供的各种有关基因和蛋白序列、结构信息分析的工具,并结合其它生物信息学分析软件,对该蛋白质的结构和功能进行预测和分析。结果该基因全长为771 bp,编码256个氨基酸,其编码的蛋白相对分子量理论预测值和等电点分别是29.4 kDa和5.04。预测该蛋白无信号肽和跨膜区,二级结构含8个α-螺旋和12个β-折叠股,氨基酸序列中有9个潜在抗原表位。结论初步认识了细粒棘球绦虫14.3-3zeta蛋白的基本特征,为深入研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 14-3-3zeta蛋白 生物信息学 结构 功能
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细粒棘球绦虫EGR-03347基因的原核表达及其对小鼠免疫效果的初步研究 被引量:2
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作者 县锦雯 王炜烨 +5 位作者 王芸菲 张艳艳 马勋 孟季蒙 王正荣 薄新文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期873-879,共7页
为了阐明细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因(EGR-03347)生物学功能及其免疫原性,本研究通过分析已发表细粒棘球绦虫原头蚴高通量mRNA测序数据,从中筛选出细粒棘球绦虫脂肪酸代谢主要的调控基因之一—EGR-03347,将其克隆于原核表达载... 为了阐明细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因(EGR-03347)生物学功能及其免疫原性,本研究通过分析已发表细粒棘球绦虫原头蚴高通量mRNA测序数据,从中筛选出细粒棘球绦虫脂肪酸代谢主要的调控基因之一—EGR-03347,将其克隆于原核表达载体pET-32a中,构建的重组质粒经诱导、纯化后通过SDS-PAGE及western blot检测。结果显示,重组EGR-03347蛋白(rEGR-03347)以包涵体的形式存在,分子量约47 ku;western blot结果显示,纯化的蛋白可与犬棘球蚴阳性血清特异性结合,具有较好的反应原性。将纯化的rEGR-03347与弗氏佐剂等体积混合并乳化后对小鼠经皮下多点注射(50μg/只),共免疫4次,分别于首免后不同时间采血分离血清,经ELISA检测小鼠血清抗体水平;同时采用qPCR方法检测首免后不同时间小鼠脾细胞因子(IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-γ)的转录水平。结果显示,随着免疫次数的增加,免疫组小鼠血清抗体水平逐渐升高,且在首免后56 d,即第4次免疫后抗体水平达到峰值,与对照组(PBS及佐剂组)相比差异极显著(p<0.01)。qPCR结果显示,rEGR-03347可诱导小鼠产生IFN-γ、IL-4和IL-10细胞因子,其中免疫后14 d~56 d rEGR-03347可致Th1型细胞因子IFN-γ的表达上调,免疫后56 d,可诱导Th 2型细胞因子IL-4和IL-10的表达上调,表明rEGR-03347可诱导小鼠产生Th1和Th2两种类型的免疫反应。综上,本研究首次初步证明细粒棘球绦虫EGR-03347具有作为诊断抗原及疫苗候选抗原的潜力,为后期其诊断方法及疫苗研发提供了参考依据。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 3-羟基酰基-CoA脱氢酶 原核表达 蛋白纯化 细胞因子
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包虫囊液干预的肝细胞Foxp3与IFITM3表达变化及其与干扰素刺激蛋白相关性分析
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作者 杨雨阳 蒙克嘎勒 +3 位作者 阿不来提·阿合买提 屈晴 齐新伟 单骄宇 《山东医药》 CAS 2022年第17期1-6,共6页
目的观察包虫囊液干预的肝细胞核转录因子Foxp3、干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)表达变化并分析其与干扰素刺激蛋白IFITM1、IFITM2、IFIT3、ISG15的相关性。方法从包虫病羊肝脏包囊中抽取囊液,将人肝癌细胞HepG2分为高浓度组、中浓度组、... 目的观察包虫囊液干预的肝细胞核转录因子Foxp3、干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)表达变化并分析其与干扰素刺激蛋白IFITM1、IFITM2、IFIT3、ISG15的相关性。方法从包虫病羊肝脏包囊中抽取囊液,将人肝癌细胞HepG2分为高浓度组、中浓度组、低浓度组及对照组,分别加入1∶10、1∶100和1∶1000浓度比例的囊液及不加囊液,采用Western blotting法及荧光定量PCR法检测各组干预后及低浓度组在干预后0、12、24、36、48、60、72 h细胞中的Foxp3、IFITM3及相关干扰素刺激蛋白IFITM1、IFITM2、IFIT3、ISG15蛋白及mRNA表达,采用Spearman分析Foxp3、IFITM3与IFITM1、IFITM2、IFIT3、ISG15的相关性。结果不同囊液浓度干预下,IFITM1、IFITM2、IFITM3、Foxp3、ISG15蛋白及mRNA表达随着干预囊液浓度降低逐渐升高,IFIT3蛋白表达中浓度组>低浓度组、高浓度组(P均<0.05),IFIT3 mRNA高、中、低浓度组差异无统计学意义。低囊液浓度干预下各时点IFITM1、IFITM2、IFIT3蛋白表达随囊液干预时间延长而降低,IFITM3、ISG15蛋白表达随囊液干预时间延长先升高后降低,Foxp3蛋白表达随囊液干预时间延长而升高;IFITM2、IFIT3、ISG15 mRNA表达随囊液干预时间延长而降低,IFITM3、IFITM1 mRNA表达随囊液干预时间延长先升高后降低,Foxp3 mRNA表达随囊液干预时间延长而升高。Spearman相关分析结果显示,不同囊液浓度干预下Foxp3表达与IFITM3表达呈正相关(P=0.004);Foxp3 mRNA、IFITM3蛋白及mRNA表达与IFITM1、IFITM2、ISG15 mRNA表达均呈正相关(P均<0.05),与IFIT3 mRNA表达无相关性;Foxp3蛋白表达与IFITM1、ISG15蛋白表达呈正相关(P均<0.05),与IFITM2和IFIT3蛋白表达无相关性。低囊液浓度干预下各时点Foxp3表达与IFITM3表达呈负相关(P均<0.05);Foxp3表达与IFITM1、IFITM2、IFIT3、ISG15表达呈负相关;IFITM3表达与IFITM1、IFITM2、IFIT3、ISG15表达呈正相关(P均<0.05)。结论在低浓度包虫囊液干预下,HepG2细胞IFITM1、IFITM2、IFITM3、Foxp3及ISG15表达升高,且Foxp3表达与IFITM3表达呈正相关;随着囊液干预时间的延长,HepG2细胞IFITM1、IFITM2、IFITM3、IFIT3、ISG15表达降低、Foxp3的表达升高,且Foxp3表达与IFITM3表达呈负相关。 展开更多
关键词 包虫囊液 干扰素诱导跨膜蛋白3 核转录因子Foxp3 细粒棘球蚴感染 干扰素刺激基因
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细粒棘球蚴囊液通过WASP/Arp2/3/F-actin通路抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的初步研究
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作者 贺飞明 董丹 +4 位作者 陈宇婷 蔺珂 廖原 吴向未 陈雪玲 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2022年第2期231-235,共5页
目的 探讨细粒棘球蚴囊液(EgCF)通过成核促进因子Wiskott-Aldrich综合征蛋白(WASP),肌动蛋白相关蛋白(Arp)2/3复合体和肌动蛋白丝(F-actin)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响。方法 分离C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,分为对照组(Con... 目的 探讨细粒棘球蚴囊液(EgCF)通过成核促进因子Wiskott-Aldrich综合征蛋白(WASP),肌动蛋白相关蛋白(Arp)2/3复合体和肌动蛋白丝(F-actin)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响。方法 分离C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,分为对照组(Control),囊液(2.0 mg·mL^(-1))处理24 h组,囊液处理48 h组,囊液处理96 h组。流式细胞术检测细粒棘球蚴囊液对小鼠巨噬细胞吞噬能力的影响,Western blot检测WASP,Arp2的蛋白表达水平;激光共聚焦观察Arp2和F-actin蛋白表达及Arp2与F-actin的共定位与细胞骨架变化。结果 与对照组相比,囊液处理48 h和96 h后巨噬细胞吞噬能力显著降低(P<0.01);WASP,Arp2蛋白表达水平显著降低(P<0.01);免疫荧光结果显示,Arp2,F-actin平均荧光强度下降,Arp2与F-actin共定位程度下降,细胞伪足伸出不明显。结论 细粒棘球蚴囊液诱导小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力降低,与WASP、Arp2/3复合体和F-actin共同参与的细胞骨架异常重排有关。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 巨噬细胞 WASP/Arp2/3复合体/F-actin 吞噬作用
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细粒棘球绦虫三磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆、表达及其分子特征的生物信息学分析 被引量:3
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作者 王家海 王凝 +5 位作者 胡丹丹 钟秀琴 宋星桔 古小彬 汪涛 杨光友 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1629-1637,共9页
三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解途径中的关键酶,现已发现该酶可作为一些寄生虫的疫苗候选分子和药物靶标。然而,有关绦虫三磷酸甘油醛脱氢酶的研究报道较少。为探究细粒棘球绦虫GAPDH(EgGAPDH)的分子特征与应用价值,克隆细粒棘球绦... 三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解途径中的关键酶,现已发现该酶可作为一些寄生虫的疫苗候选分子和药物靶标。然而,有关绦虫三磷酸甘油醛脱氢酶的研究报道较少。为探究细粒棘球绦虫GAPDH(EgGAPDH)的分子特征与应用价值,克隆细粒棘球绦虫的GAPDH基因,并以生物信息学方法对其进行系统的分析。结果显示:EgGAPDH基因全长1 011bp,编码336个氨基酸。EgGAPDH是由4个结构相同的单体蛋白(O、P、Q、R)组成的一个同源四聚体,每个单体蛋白质含有3个活性中心,即NAD+绑定区域(aa 4-151和aa 315-336)、催化结合区域(aa 156-314)和一个酶活性位点(aa 149-156)。通过对EgGAPDH的氨基酸序列的抗原表位预测得到了16个B细胞抗原表位和9个T细胞结合位点;Western blot显示原核表达的重组EgGAPDH能与感染细粒棘球蚴的小鼠血清发生特异性结合;以纯化的重组EgGAPDH蛋白为抗原通过ELISA法检测17份细粒棘球蚴小鼠阳性血清,阳性检出率为100%。试验结果表明:成功克隆并表达细粒棘球绦虫的EgGAPDH基因,EgGAPDH蛋白具有3个酶功能区域和多个免疫结合位点,Western blot和ELISA结果显示,该蛋白质可能具有作为抗细粒棘球蚴的药物靶标和疫苗候选分子的潜力。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) 分子特征
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细粒棘球绦虫GAPDH蛋白的生物信息学分析及其重组表达纯化和酶活性检测 被引量:1
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作者 吴巨龙 王绚 +4 位作者 吕刚 苏娟 逯召莲 孙萃萍 景涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期125-129,共5页
目的以生物信息学预测细粒棘球绦虫甘油醛3-磷酸脱氢酶(EgGAPDH)编码基因及其编码蛋白的结构和功能,利用大肠杆菌原核表达系统高效表达EgGAPDH重组蛋白,体外检测其酶活性。方法运用各软件对EgGAPDH的理化性质、保守功能域、系统发生树... 目的以生物信息学预测细粒棘球绦虫甘油醛3-磷酸脱氢酶(EgGAPDH)编码基因及其编码蛋白的结构和功能,利用大肠杆菌原核表达系统高效表达EgGAPDH重组蛋白,体外检测其酶活性。方法运用各软件对EgGAPDH的理化性质、保守功能域、系统发生树和二级结构、三级结构等方面进行分析后,将EgGAPDH基因亚克隆于表达载体pET30a(+),转化入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,表达、纯化重组蛋白,并利用底物3-磷酸甘油醛测定重组蛋白EgGAPDH的酶催化活性。结果 EgGAPDH cDNA序列长度为1 011bp,编码一个336个氨基酸的蛋白。该GAPDH蛋白理论相对分子质量为36 128.3Da,等电点为8.44,具有GAPDH蛋白家族的两个功能结构域,富含6种类型的特定功能位点。成功构建的原核表达载体pET30a(+)-EgGAPDH在E.coli BL21(DE3)中高效表达,且发现表达产物主要以可溶形式分布于裂解上清,制备甘油醛3-磷酸脱氢酶纯品并通过酶活检测显示其具有高效酶活性。结论 EgGAPDH基因可在原核系统中获得有酶催化活性的高效表达,为进一步研究其在糖代谢中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 甘油醛3-磷酸脱氢酶 生物信息学 原核表达 酶活性检测
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棘球绦虫感染犬粪抗原检测研究新进展 被引量:6
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作者 张瑞妮 吾拉木.马木提 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期398-402,共5页
棘球绦虫(Echinococcus spp.)感染的犬目前是人畜棘球蚴病主要传染源,因此对感染犬的动态监测、合理驱虫治疗是预防和彻底消灭包虫病流行的关键性措施之一。近年来,为了克服槟榔碱导泻法鉴定虫种和虫卵以及检测血清特异性循环抗原及抗... 棘球绦虫(Echinococcus spp.)感染的犬目前是人畜棘球蚴病主要传染源,因此对感染犬的动态监测、合理驱虫治疗是预防和彻底消灭包虫病流行的关键性措施之一。近年来,为了克服槟榔碱导泻法鉴定虫种和虫卵以及检测血清特异性循环抗原及抗体等方法的不足,各实验室开始应用ELISA双抗夹心法,试图建立棘球绦虫感染犬粪抗原的快速检测系统。本文对犬感染棘球绦虫的特异性粪抗原检测技术的最新进展作一综述。 展开更多
关键词 棘球绦虫 ELISA双抗夹心法 抗体 egagb8 3重组蛋白
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甘氨鹅脱氧胆酸对体外细粒棘球蚴原头节活力及ROS影响 被引量:1
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作者 汤光耀 姜玉峰 +8 位作者 吕海龙 李佳洁 杨仁坦 秦文娟 马斌 马容基 王麟尧 陈琳 许雅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期595-598,共4页
目的研究甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid,GCDCA)对体外细粒棘球蚴原头节活力及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法将细粒棘球蚴原头节分为对照组及GCDCA处理组(500、1 500、2 500μmol/L),应用体外培养技... 目的研究甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid,GCDCA)对体外细粒棘球蚴原头节活力及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法将细粒棘球蚴原头节分为对照组及GCDCA处理组(500、1 500、2 500μmol/L),应用体外培养技术,通过伊红染色法每天定时在光学显微镜下观察原头节的活力并记录存活和死亡数目。使用试剂盒检测不同浓度GCDCA处理24h后各组原头节体内caspase-3酶活性变化;DCFH-DA染色法荧光显微镜观察GCDCA作用24h后原头节内ROS水平变化。结果 500、1 500、2 500μmol/L GCDCA处理后均可导致原头节活力减弱,且最高浓度组在第7d时原头节全部死亡。500、1 500、2 500μmol/L GCDCA组作用原头节24h后caspase-3酶活性与对照组相比明显升高(F=555.162,P<0.05)。500、1 500、2 500μmol/L GCDCA作用原头节24h后原头节内ROS水平与对照组相比明显升高(F=216.901,P<0.05)。结论 GCDCA能抑制体外原头节生长,促使原头节死亡,可能与活化caspase-3及提高原头节内ROS水平相关,具体机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 甘氨鹅脱氧胆酸 细粒棘球蚴原头节 CASPASE-3 活性氧
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