阿拉山口口岸地区多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶亚基1基因序列分析

目的分析阿拉山口口岸多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶亚基1(ND1)基因序列。方法使用ND1基因Cest引物对2014年捕获鼠类进行多房棘球蚴初筛,对阳性样品扩增ND1基因全长序列,利用Blast分析序列同源性、Mega 6.0软件构建分子遗传进化树,使用DNAStar软件分析其跨膜结构、信号肽、B细胞抗原表位等。结果阿拉山口口岸1.57%的野鼠感染多房棘球蚴,其线粒体ND1基因全长894 bp,编码297个氨基酸,与日本的多房棘球蚴AB018440和AB720065同源性最高,为100%。结论阿拉山口口岸地区野鼠存在多房棘球蚴感染,其序列信息为该地区多房棘球蚴的科学监控提供依据。

多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶1基因分析及PCR检测方法

目的扩增多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶亚基1（NADH dehydrogenase suhunit1，ND1）基因全序列，测序并进行同源性比较。建立检测多房棘球蚴感染的PCR方法，应用于人和动物感染多房棘球蚴的快速检测和鉴定。方法根据多房棘球绦虫线粒体DNA全序列，设计引物扩增ND1基因并进行测序，获得多房棘球蚴ND1基因全序列。对该序列与其它常见棘球绦虫的NDI基因序列进行同源性分析。结果多房棘球蚴线粒体ND1基因序列与国外报告的多房棘球绦虫的同源性达到98．8％，与细粒棘球绦虫的同源性为86．2％，与少节棘球绦虫的同源性为84．6％，与伏氏棘球绦虫的同源性为87．0％。结论多房棘球蚴线粒体ND1基因与其他棘球绦虫相应基因存在显著差异。PCR方法可以用于多房棘球蚴感染的快速检测和鉴定。

多房棘球蚴主要卵抗原p40-1的原核表达、多克隆抗体制备及其组织定位

初步确定MEAp40-1的基因特征及其组织分布特征。根据WormBase数据库中多房棘球蚴MEAp40-1序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术扩增MEAp40-1编码基因并构建重组表达质粒pET-28a-MEAp40-1,IPTG诱导表达并用His-Ni亲和层析柱纯化,制备多克隆抗体。通过间接ELISA方法检测多克隆抗体效价,应用免疫荧光技术定位MEAp40-1在原头蚴中的分布。通过生物信息学分析发现,多房棘球绦虫表达3种不同的MEAp40(MEAp40-1~3),分别分布在不同染色体上。系统进化树显示,每个多房棘球绦虫MEAp40基因与其相应的细粒棘球绦虫的同源基因组成一支。多房棘球绦虫MEAp40-1编码基因全长945 bp,编码314个氨基酸。7种绦虫的MEAp40-1蛋白很保守,均存在α晶体结构域,并且位于该结构域中的协同分子伴侣结合位点也非常保守。MEAp40-1重组蛋白大小约为37 ku,其多克隆抗体效价可达1∶409 600,可识别虫体中的MEAp40-1天然蛋白。MEAp40-1蛋白主要分布在多房棘球蚴后端,而头节、囊壁等其他部位均未见表达。结合以上研究结果,推测MEAp40-1蛋白在绦虫中的生物学功能保守,可能与多房棘球绦虫原头蚴的发育有关。