多房棘球绦虫Em14-3-3抗原编码基因在BCG中的表达

目的:研究多房棘球绦虫Em14-3-3抗原编码基因在BCG中的表达。方法:将重组质粒pBCG-Em14-3-3用电穿孔法导入BCG构建rBCG,将含有重组子的细菌培养至对数生长期,在收菌前3天每天45℃热诱导30min,然后对表达产物作SDS-PAGE及免疫印迹分析。结果:多房棘球绦虫pBCG-Em14-3-3在BCG中成功表达了Em14-3-3重组蛋白,在相对分子量为27KDa处可见明显的表达蛋白带,其表达量占菌体总蛋白量的11%。结论:多房棘球绦虫pBCG-Em14-3-3能在BCG中高效表达,且能与鼠血清抗体发生特异结合,提示rBCG-Em14-3-3疫苗表达的Em14-3-3重组蛋白具有特异的抗原性。

多房棘球绦虫EmⅡ/3抗原编码基因在大肠杆菌和BCG中的表达

目的研究多房棘球绦虫EmⅡ/3外源基因在大肠杆菌和BCG中的表达。方法将重组质粒pBCG-EmⅡ/3转入感受态大肠杆菌Top10和用电穿孔法导入BCG构建rBCG,将含有重组子的细菌培养至对数生长期,然后45℃热诱导,分别对表达产物作SDS-PAGE及免疫印迹分析。结果多房棘球绦虫pBCG-EmⅡ/3在BCG中成功表达了EmⅡ/3重组蛋白,在相对分子量为65 kDa处可见明显的表达蛋白带,其表达量占菌体总蛋白量的9%,且能与鼠血清抗体发生特异结合,而在大肠杆菌中没有外源蛋白表达。结论多房棘球绦虫pBCG-EmⅡ/3能在BCG中表达,Western blot结果提示rBCG-EmⅡ/3表达的EmⅡ/3重组蛋白具有特异的抗原性。

多房棘球绦虫重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3在大肠埃希菌BL21(DE3)表达效率的研究

目的研究多房棘球绦虫(Em)重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达效率。方法通过PCR扩增EmⅡ/3和Em14-3-3抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接EmⅡ/3和Em14-3-3,得到EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;将该融合基因定向克隆于含有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因的高效原核表达载体pGEX-1λT,经酶切鉴定后以IPTG诱导表达EmⅡ/3-Em14-3-3/GST融合蛋白;SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。结果PCR成功扩增出2 554 bp的EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;双酶切证实EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因插入pGEX-1λT中,成功构建了pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3重组质粒;SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒转化宿主菌在IPTG诱导下高效表达了能被活动性泡球蚴病鼠血清识别的EmⅡ/3-Em14-3-3/GST融合蛋白,分子质量单位119 ku。结论多房棘球绦虫EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因在大肠埃希菌中获得了高效融合表达,表达出的EmⅡ/3-Em14-3-3重组蛋白具有特异的抗原性。