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重组Echistatin融合基因工程菌高密度发酵工艺优化 被引量:4
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作者 杨利军 杨涛 +4 位作者 解军 张娟 赵志强 罗佳 牛勃 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期84-86,共3页
目的优化大肠杆菌表达重组蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin,Ecs)融合基因工程菌的发酵工艺。方法在15L发酵罐内,研究培养基、培养条件和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响,并考察工程菌中重组质粒的遗传稳定性。结果工程菌在pH7·4... 目的优化大肠杆菌表达重组蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin,Ecs)融合基因工程菌的发酵工艺。方法在15L发酵罐内,研究培养基、培养条件和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响,并考察工程菌中重组质粒的遗传稳定性。结果工程菌在pH7·4的2×YT培养基中诱导4h,菌体湿重可达75g/L,目的蛋白表达量约占总蛋白的35%,所构建的重组质粒在BL21宿主菌中传代稳定。结论优化了Ecs融合基因工程菌的发酵和表达条件,为规模化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 蛇毒锯鳞蝰素 大肠杆菌 发酵
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基因重组Echistatin发酵工艺的优化 被引量:2
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作者 杨利军 杨涛 +2 位作者 解军 赵志强 牛勃 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期66-69,共4页
目的:利用基因工程方法对一种蛇毒锯鳞蝰素蛋白的发酵纯化工艺进行优化,以提高目的蛋白的产量和纯度。方法:对工程菌进行发酵培养并诱导表达,研究不同的培养基、不同补料方式、溶解氧浓度、培养和诱导时间对工程菌产量和目的蛋白表达量... 目的:利用基因工程方法对一种蛇毒锯鳞蝰素蛋白的发酵纯化工艺进行优化,以提高目的蛋白的产量和纯度。方法:对工程菌进行发酵培养并诱导表达,研究不同的培养基、不同补料方式、溶解氧浓度、培养和诱导时间对工程菌产量和目的蛋白表达量的影响,利用几丁质亲和层析纯化Ecs融合蛋白,通过合适温度和pH裂解融合蛋白得到Ecs纯品,并鉴定和检测Ecs活性。结果:经过高密度发酵优化后,菌体湿重可达110g/L,目的蛋白表达量约占总蛋白的40%;亲和层析纯化后,得到Ecs单体,得率为68mg/L发酵液。生物学活性分析显示,重组Ecs能有效抑制血小板的聚集,其活性与天然Ecs相似。结论:通过发酵和纯化工艺优化,大大提高了目的蛋白产量,为进一步规模化研究和生产奠定了基础。 展开更多
关键词 蛇毒锯鳞蝰素 大肠杆菌 发酵 纯化
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蛇毒锯鳞蝰素融合蛋白的发酵与纯化 被引量:2
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作者 杨利军 杨涛 +4 位作者 程牛亮 解军 牛勃 王国亮 杨琦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期95-98,共4页
研究大肠杆菌表达重组蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin,Ecs)融合蛋白的发酵和纯化工艺。将Ecs基因插入表达载体pTXB1,转化E.coliBL21(DE3)构建工程菌。对工程菌进行补料分批培养并诱导表达,研究培养基、培养和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白... 研究大肠杆菌表达重组蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin,Ecs)融合蛋白的发酵和纯化工艺。将Ecs基因插入表达载体pTXB1,转化E.coliBL21(DE3)构建工程菌。对工程菌进行补料分批培养并诱导表达,研究培养基、培养和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响,几丁质亲和层析纯化Ecs融合蛋白,经DTT裂解后,检测Ecs活性。发酵后菌体湿重可达75g/L,融合蛋白表达量约占总蛋白的35%,重组质粒在BL21宿主菌中传代稳定。亲和层析纯化后,得到Ecs单体,得率为28mg/L发酵液。生物学活性分析显示,重组Ecs能有效抑制血小板的聚集,其活性与天然Ecs相似。优化了Ecs融合基因工程菌的发酵和纯化条件,为规模化生产奠定基础。 展开更多
关键词 蛇毒锯鳞蝰素 大肠杆菌 发酵 纯化
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rhIL-6大肠杆菌高效表达的影响因素及其产品中试的研究 被引量:4
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作者 杨吉成 盛伟华 张云 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 1999年第1期23-27,共5页
研究自构建的重组人白细胞介素- 6(rhIL-6)基因工程菌株高效表达的影响因素及其rhIL-6产品中试工艺。方法:①将rhL-6-PBV重组质粒转化至RRI、JM103和 DH5 a不同宿主菌中,在M9CA和 LB培养... 研究自构建的重组人白细胞介素- 6(rhIL-6)基因工程菌株高效表达的影响因素及其rhIL-6产品中试工艺。方法:①将rhL-6-PBV重组质粒转化至RRI、JM103和 DH5 a不同宿主菌中,在M9CA和 LB培养基中,42℃诱导培养不同时间(3~6 h),观测 rhIL-6不同表达效率。②采用 10 L发酵罐诱导培养,经破菌-洗包-溶包初步纯化后,再经三步柱层析纯化,提取rhIL-6。结果:①rhIL-6在DH5 a大肠杆菌中(SDH-945株)表达效率高;可达 39%,用 M9CA培基,42℃诱导培养 5h可使表达效率提高到41%,②SDH-945菌株在5批 10L M9CA发酵诱导培养 5 h,rhIL-6表达效率可达 35. 87±2. 65%。经初步纯化后,rhIL-6的纯度达 74. 87±3. 68%,再经三步柱层析后,纯度可达 95%以上,比活性达 4 × 108 U/mg,总得率稍低可达 23.1%.结论:①SDH-945工程菌株在 M9CA培养基巾,42℃诱导培养 5 h,rhIL-6表达效率最佳。②10 L发酵和纯化工艺可获高效价、高比活性、高纯度的rhIL-6合格生物制品。 展开更多
关键词 hIL-6 大肠杆菌 高效表达 发酵 纯化
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重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵及表达产物的纯化
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作者 应莲芳 梁凌宇 +2 位作者 杨军 高雪峰 蒋琳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第7期519-521,共3页
目的建立重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵和目的蛋白纯化工艺。方法在三角烧瓶中,探讨不同的诱导剂浓度和培养基对菌体密度和目的蛋白表达量的影响;在10L发酵罐中,探讨诱导时间、补料方式、溶氧量对菌体密度和目的蛋白表达量的影响。... 目的建立重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵和目的蛋白纯化工艺。方法在三角烧瓶中,探讨不同的诱导剂浓度和培养基对菌体密度和目的蛋白表达量的影响;在10L发酵罐中,探讨诱导时间、补料方式、溶氧量对菌体密度和目的蛋白表达量的影响。根据目的蛋白的理化特性建立纯化工艺。结果重组HEV抗原工程菌在10L发酵罐分批补料培养中,采用0·1mmol/L的IPTG诱导4h,目的蛋白表达量约为25%,目的蛋白产率约为2·88g/L,且以包涵体形式存在。经过对包涵体粗纯、复性、纯化,SDS-PAGE分析,纯度可达95%以上。结论建立了周期短、产率高且稳定可靠的发酵及纯化工艺,为重组HEV抗原的大规模生产奠定了基础。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒抗原 工程菌 发酵 纯化
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