肝癌中烯酯酰辅酶A水解酶1的表达及其亚细胞定位

目的探讨烯酯酰辅酶A水解酶1(enoyl coenzyme A hydratase 1,Ech1)表达变化在肝癌中的意义及Ech1的亚细胞定位与肿瘤恶性生物学行为的关系。方法应用免疫组化法检测20例正常肝组织和30例原发性肝癌组织中Ech1的表达;应用亚细胞分离法检测Ech1在Hca-F和FEch1下调细胞的四种不同亚细胞组分中的表达。结果 Ech1在原发性肝癌中的表达高于正常肝组织,差异有统计学意义(P<0.05);Ech1表达与患者年龄、AFP值及是否伴有肝硬化或伴有病毒性肝炎差异无统计学意义(P>0.05)。Ech1在Hca-F和FEch1下调细胞的四种亚细胞组分中表达均定位于细胞质和细胞膜,并且细胞质表达强于细胞膜,细胞核和细胞骨架部分中不表达。结论 Ech1在肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织,提示其可能与肝癌的发生、发展有关;体外培养细胞中Ech1表达调控对其亚细胞定位的改变没有影响,Ech1对肿瘤恶性生物学行为的影响可能不是通过其亚细胞定位改变而实现的。

Ech1的表达下调对小鼠肝癌淋巴道转移的影响及其可能机制

目的:探讨Ech1表达下调对小鼠肝癌淋巴道转移率的影响,及其与肿瘤相关蛋白Anxa7的相互关系。方法:将Ech1基因表达下调的Hca-F细胞植入小鼠足垫,28天后观察小鼠成瘤及转移情况。在Ech1基因表达下调的Hca-F细胞和对照Hca-F细胞中,通过Western blot检测Anxa7表达变化,同时在Anxa7表达下调Hca-F细胞和对照Hca-F细胞中通过Western blot检测Ech1表达变化。结果:下调Ech1基因的表达,使肿瘤细胞体内淋巴结转移率明显降低。Ech1表达下调后,肿瘤转移相关蛋白Anxa7表达增加;Anxa7表达下调后,Ech1蛋白表达下降。结论:肿瘤细胞Ech1基因表达水平与小鼠肝癌淋巴道转移密切相关,Ech1和Anxa7在Hca-F肿瘤淋巴道转移中可能相互作用。

Ech1基因表达下调对小鼠肝癌细胞株Hca-F黏附能力的影响

目的在蛋白质水平检测Ech1在小鼠肝癌高低淋巴道转移Hca—F细胞／Hca—P细胞中的表达及其对Hca-F细胞黏附能力的影响。方法采用荧光差异双向凝胶电泳（2DDIGE）和质谱技术定量分析鉴定Ech1在Hca—F细胞和Hca-P细胞中的表达；构建pGPU6／GFP／Neo--shRNA—Ech1质粒，稳定转染至Hca-F细胞中，并通过实时荧光定量PCR和Westemblot验证Ech1表达下调效果，检测Ech1基因表达下调后对细胞外基质和淋巴结的黏附能力。各组细胞间的差异采用单因素方差分析。结果Ech1在Hca-F细胞的表达明显高于其在Hca-P细胞表达;Ech1表达下调细胞株构建成功，Ech1基因表达下调后，降低Hca-F细胞对细胞外基质纤维连接蛋白和I型胶原成分的黏附能力，降低其对体内淋巴结的黏附能力。Hca-F组与pGPU6／GFP/Neo-shRNA-Ech1组黏附吸光度值的差异有统计学意义，层黏连蛋白和I型胶原吸光度值分别为1．42±0．26和1．14±0．07与1．01±0．27和0．90±0．09，P值均〈0．05。结论抑制Ech1基因和蛋白的表达，可以降低小鼠肝癌细胞株Hca—F细胞的黏附能力。