中国人单胺氧化酶A基因的EcoRV酶切位点多态性与帕金森病的相关性

目的 :探讨多巴胺代谢酶—单胺氧化酶 A基因EcoRV酶切位点多态性与帕金森病 (Parkinsondisease,PD)遗传易感性的关系。 方法 :选择PD病人 2 87例 (包括发病年龄小于等于 5 0岁的早发型PD和发病年龄大于5 0岁的晚发型PD)和正常对照 16 4例 ,利用PCR RFLP技术分析了单胺氧化酶 A(MAO A)EcoRV酶切位点多态性在PD病人与正常对照之间分布频率的差异。结果 :MAO A基因EcoRV酶切位点在总体对照组和总体PD病人之间的分布没有显著差异 ;根据发病年龄分组后 ,不管是早发PD病人还是晚发PD病人 ,与对照组相比等位基因和基因型频率均无显著性差别。按性别分组后发现 ,男性PD和对照组的基因型频率或是等位基因频率存在显著性差异。 结论 :研究结果支持MAO A基因多态性与PD相关的假说 ,而且表明此关系与PD发病年龄和性别有关。

双创造酶切位点聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测MGMT基因多态性的应用

目的建立简便易行、经济适用的MGMT基因4个单核苷酸多态性位点的检测方法。方法应用碱基错配创造酶切位点原理设计引物,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术判断MGMT基因四个SNP位点多态性。结果设计一对引物PCR扩增含MGMT84多态位点的DNA片段,另一对引物PCR扩增含MGMT基因143、160、178三个多态位点的DNA片段,使用4种限制性内切酶分别酶切判断4个位点多态性,PCR和酶切效果均较好。结论应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的MGMT四个多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点。

利用PCR-RFLP分析eNOS基因exon7BanⅡ酶切位点的遗传多态性

目的 :探讨内皮型一氧化氮合酶基因多态性与妊高征的相关性。方法 :应用PCR -RFLP技术检测了 12例正常女性的内皮型一氧化氮合酶基因第 7外显子。结果 :发现 12例正常女性中有 4例的基因型是eNOS/GG ,有 8例的基因型是eNOS/GT ,未检测到eNOS/TT型的个体。等位基因A1(eNOS/G)的频率为 66 7% ,等位基因A2 (eNOS/T)的频率为 33 3%。结论 :广东女性人群存在内皮型一氧化氮合酶第 7外显子BanⅡ酶切位点遗传多态性。

2型糖尿病与脂蛋白脂酶基因HindⅢ酶切位点的多态性

为探讨 2型糖尿病与脂蛋白脂酶基因HindⅢ多态性是否有关联。采用限制性片段长度多态性分析方法 ,对中国成都地区 2 4 8名 (健康成人 1 35名 ,2型糖尿病患者 1 1 3名 )汉族人的脂蛋白脂酶基因内含子 8HindⅢ酶切位点多态性及其与血脂、载脂蛋白水平的关联进行了研究。结果显示 ,2型糖尿病组血清TG、TC、apoB1 0 0、apoCⅡ、apoCⅢ、apoE水平及TG HDL C比值较对照组显著升高 (P <0 0 0 1 ) ,同时HDL C、apoAⅠ水平显著降低 (P <0 0 0 1 )。 2型糖尿病组H +H +基因型和H +等位基因频率较对照组显著升高 (分别为 0 6 37vs0 31 8,P <0 0 1和 0 770vs 0 5 4 8,P <0 0 1 )。结果提示 ,2型糖尿病与脂蛋白脂酶基因HindⅢ酶切位点多态性有一定关联。

吉林省地区朝鲜族和汉族健康人群LPL基因HindⅢ酶切位点多态性分布的研究

目的分析我国吉林省地区朝鲜族和汉族健康人群脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL)基因HindⅢ酶切位点多态性的分布。方法应用聚合酶链反应(polimerase chain reaction,PCR)等技术检测66例朝鲜族和90例汉族LPL基因多态性,并将其基因型和等位基因在两族人群中的分布进行统计学分析。结果朝鲜族人群LPL基因P+P+基因型,P+P-基因型和P-P-基因型频率分别为57.58%,33.33%和9.09%;汉族人群分别为73.33%,24.44%和2.22%,两组基因型的分布差异具有显著性(P=0.049)。朝鲜族人群P+等位基因和P-等位基因频率分别为74.24%和25.76%;汉族人群分别为85.56%和14.44%,两组等位基因的分布差异具有显著性(P=0.012)。结论 LPL基因HindⅢ酶切位点多态性在中国吉林省地区朝鲜族和汉族人群中的分布差异有显著性。

脂蛋白脂酶基因PvuⅡ酶切位点多态性与胰岛素抵抗关系的研究

目的旨在探讨脂蛋白脂酶基因第6内含子PvuⅡ酶切位点多态性与胰岛素抵抗、2型糖尿病的发生之间是否有关联。方法随机选取163例2型糖尿病患者作为病例组,106例正常人作为正常对照组,对第6号内含子PvuⅡ酶切位点进行多态性分析。结果病例组中P+P+组高密度脂蛋白胆固醇水平明显低于P-P-组,而血清三酰甘油、胰岛素抵抗指数指标水平高于P-P-组。结论PvuⅡ酶切位点多态性与2型糖尿病中胰岛素抵抗有关。

创造酶切位点PCR-RFLP检测PON2(rs12026)基因多态性

目的:建立简便易用的PON2基因单核苷酸多态(rs12026)的检测方法。方法:应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断PON2基因SNP位点多态性。结果:设计一对特异引物并PCR扩增含PON2多态位点的DNA片段,根据限制性内切酶BsmAI酶切结果判断PON2位点多态性,PCR和酶切效果均较好。结论:应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的PON2多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点。

pGH基因全序列ApaⅠ酶切位点多态性与生产性能的相关分析

本实验利用PCR-RFLP技术分析了约克夏和长白猪pGH基因ApaⅠ酶切位点多态性及其与生产性能的关系.结果表明,在pGH基因序列中共检测到5种基因型,4种等位基因,基因型频率和等位基因频率在2个猪品种间分布差异不显著;约克夏ApaⅠ酶切多态位点中,AC基因型个体在165日龄体重和70-165日龄日增重上显著高于AA基因型个体(P<0.1);但长白猪ApaⅠ多态位点不同基因型在这两个生产性状上的差异不显著.

扩增引进限制性酶切位点技术检测CYP2C9基因的多态性

建立了一种简便、快速、准确的检测CYP2C9基因Arg144Cys位点和Ile359Leu位点多态性的新方法.该方法采用与模板具有1个碱基错配的引物通过PCR在扩增产物中引进限制性酶切位点,即扩增引进限制性酶切位点(amp lification-created restriction sites,ACRS),其中通过上游引物在扩增Arg144Cys位点的片断中引入AvaⅡ切点,使得野生型基因CYP2C9*1和突变型基因CYP2C9*2的PCR产物中分别含有2个和1个AvaⅡ切点;通过下游引物在扩增Ile359Leu位点的片断中引入MvaⅠ切点,使得野生型基因CYP2C9*1和突变型基因CYP2C9*3的PCR产物中分别含有1个和2个MvaⅠ切点.将来自Arg144Cys位点和Ile359Leu位点的PCR产物各取一份测序,表明错配碱基成功引入PCR产物中.将包含Arg144Cys位点的PCR产物用AvaⅡ消化,将包含Ile359Leu位点的PCR产物用MvaⅠ消化,然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染进行基因分型.由于野生型基因和突变型基因的PCR产物中都至少含有1个酶切位点,能完全避免因限制性核酸内切酶失活或酶切不完全而导致的基因分型错误.

应用CRS-RFLP技术检测hOGG1c.326位点的单核苷酸多态性

目的 探讨创造酶切位点的限制性片段长度多态检测技术 (CRS RFLP)检测单核苷酸多态性的方法及其应用。方法 应用CRS RFLP检测技术 ,检测hOGG1c 3 2 6位点的单核苷酸多态性 ,并与未引入错配位点时的限制性片段长度多态检测结果进行比较。结果 CRS RFLP的检测结果与未引入错配位点时的限制性片段长度多态的检测结果一致。结论 CRS RFLP检测技术适用于已知单核苷酸多态位点的检测 ,具有较好的应用前景。

山羊MSTN基因EcoRV酶切多态性分析

采用限制性内切核酸酶EcoRV对山羊MSTN基因的676 bp扩增产物进行了PCR-RFLP多态性分析,检测到3种基因型,其酶切位点分别由2种共显性基因控制;对该片段的纯合型(AA、BB)分别测序发现,BB型在3783位的T→C。首次试验证实山羊MSTN内含子2(676 bp)区域存在多态性。

广东人群药物代谢酶CYP2C9基因374G>A位点多态性调查

目的调查广东人群CYP2C9基因第3外显子374G>A位点多态性。方法应用创造酶切位点PCR扩增跨越374G>A位点的DNA片断,用MluI酶切PCR产物,通过PAGE-银染判断基因型。结果在受检的532例广东人中,未检出A374突变等位基因即CYP2C9*14等位基因,所有个体的基因型均为野生型纯合子G374/G374。结论 CYP2C9*14等位基因为广东人群的稀有等位基因。

创造酶切位点与PCR-RFLP原理在基因多态检测中的应用探讨

目的:探讨创造酶切位点与PCR-RFLP原理在基因多态检测中的应用及其注意事项。方法:应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断多个基因多态性。结果:共对MGMT、ADH2、MTH-FR和PON2基因多种多态位点进行了实验研究,均成功完成检测。结论:应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的检测方法具备简便、经济、快速的特点,适宜推广应用。

碱基错配长PCR引物法检测CCNH基因rs3093816位点的多态性

目的:细胞周期蛋白H(CCNH)基因rs3093816位点的多态性与许多癌症的发生风险升高有关,但由于此位点缺少合适的限制性内切酶位点,使聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)的使用受到限制。因此,本研究拟建立碱基错配长PCR引物法用于检测CCNH基因rs3093816位点。方法:通过创造性酶切位点PCR-RFLP方法在CCNH扩增产物中引入新的酶切位点,然后利用Cvi Q I酶区分PCR产物。本研究同时设计了碱基错配长PCR引物和碱基错配相对短PCR引物,比较分析碱基错配长PCR引物是否更简便经济。结果:与短引物法相比,长引物占扩增总片段的比例越大,酶切产物越容易区分,凝胶电泳需要的时间越短。结论:成功建立了错配长PCR引物法检测CCNH基因rs3093816位点。

应用创造酶切位点法检测单碱基突变

应用引物错配技术结合单碱基突变位点而配合成一个酶切位点,使之成为可用PCR-RFLP方法分析的突变位点,是对单碱基突变位点进行基因型鉴定的有效而简捷的手段。本文以鸡胞外脂肪酸结合蛋白(Extracelluarfattyacidbindingprotein,EX-FABP)基因单碱基突变的基因型检测为例,探讨了应用创造酶切位点PCR(CreatedRe strictionSitePCR,CRS-PCR)检测单碱基突变基因型的思路、方法和策略。

昆明地区汉族人vWF基因多态性与急性脑梗死的相关性

目的探讨血浆血管性假性血友病因子(von Willebrand factor vWF)表达水平及其基因19内含子MspI(Major surface proteaseI)多态性与急性脑梗死的相关性。阐明vWF基因19内含子MspI多态性在昆明地区汉族人群中的分布。方法收集119例急性脑梗死(24h内)和117名昆明地区汉族健康人为对照,免疫比浊法检测血浆vWF表达水平;聚合酶链反应-限制性片段长度多态性结合MspI酶切技术进行vWF基因19内含子MspI多态性分析。结果急性脑梗死血浆vWF表达水平为(189.37%±89.55%)明显高于对照组(P<0.05)。昆明地区汉族人群中vWF基因19内含子MspⅠM+/M+、M+/M-和M-/M-基因型频率分布分别为0.047、0.377和0.576;M+/M-等位基因型频率分布分别为0.235、0.765。脑梗死组MspⅠ多态性M-/M-基因型频率高于对照组(P<0.05)。脑梗死组M+/M+、M+/M-和M-/M-型的循环vWF水平分别为(170.00%±78.67%)、(148.62%±62.58%)和(205.38%±92.68%),各基因型之间差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论血浆vWF表达水平及vWF基因19内含子MspⅠ多态性M-/M-基因型与急性脑梗死发生有显著相关性;昆明地区汉族人群中vWF基因19内含子MspⅠ等位基因M+和M-的分布与其他人群不同。

猪Pit-1基因的多态性研究

选取7个中国地方猪种和3 个国外引入猪种共473 头,应用PCR SSCP技术在7 个中国地方猪种中检测到1个Pit 1基因第4外显子上的突变;应用PCR RFLP技术在3个国外引入猪种中,扩增长度为1 747 bp的片段中检测到1个RsaⅠ限制性内切酶的多态酶切位点。遗传多态性分析结果表明:外显子4上的突变,在7个中国地方猪种中是A型等位基因和AA基因型频率占优势。其中沂蒙黑猪和巴马小型猪处于Hardy Weinberg平衡;北京黑猪、沂蒙黑猪、巴马小型猪、滇南小耳猪和香猪处于中度多态。RsaⅠ酶切多态位点的突变在3个国外引入猪种中也是A型等位基因和AA基因型频率占优势。其中大白猪和杜洛克猪处于Hardy Weinberg平衡;3 个国外引入猪种的多态信息含量均为中度多态。

昆明汉族急性脑梗死患者vWF基因多态性研究

目的阐明vWF基因19内含子MspI多态性在昆明地区人群中的分布;探讨vWF基因19内含子MspI多态性与急性缺血性脑梗死的关系。方法收集119例急性缺血性脑梗死患者(脑梗死组)和117名昆明地区健康人(对照组),应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析vWF基因19内含子MspI多态性。结果昆明地区汉族人群中vWF基因19内含子M+/M+、M+/M-和M-/M-基因型频率分别为0.034、0.470和0.496;M+和M-等位基因频率分别为0.269和0.731。脑梗死组中M+/M+、M+/M-和M-/M-基因型频率分别为0.059、0.286和0.655,M+等位基因和M-等位基因频率分别为0.202和0.798,其M+/M-基因型频率低于对照组,M-/M-基因型频率高于对照组。2组基因频率分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论昆明地区汉族人群中vWF基因19内含子MspⅠ酶切位点各基因型的分布与文献报道中的高加索人群差异较大,与中国地区其他民族人群也不尽相同。急性脑梗死的发生可能与vWF基因19内含子MspI多态性有关。

乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶及细胞色素P450 2E1基因多态性与酒精性肝病易感性的研究

酒精滥用和酒精依赖已成为当今世界日益关注的社会公共卫生问题。酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是指由于长期大量地摄入酒精而导致肝脏一系列病变。在西方国家,酒精性肝病是导致肝硬化的主要因素[1]。近年来,随着我国国民经济的发展,与饮酒相关的问题已成为我国面临的一大社会和医学问题,ALD的发病率迅速上升。

新疆塔吉克族健康人群脂蛋白脂酶Hind Ⅲ基因多态性研究

目的探讨脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL)基因HindⅢ酶切位点多态性在塔吉克族健康人群中的分布及其在不同民族间的分布差异。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术检测91例塔吉克族(男性36人,女性55人)LPL基因型并计算出其基因型频率及等位基因频率,并通过查阅文献[10-17]结合统计学软件进行了不同种族间的基因型分布差异比较。结果塔吉克族91例正常人群中H+H+,H+H-,H-H-基因型频率分别为62.64%,31.87%,5.49%,H+,H-等位基因频率分别为78.57%,21.43%。两组男女人群在基因型频率和等位基因频率上均无显著的统计学差异(P=0.652,P=0.187)。而与美国,法国,英国,韩国,印度等人群间比较,基因型和等位基因频率均存在极显著和显著差异(P<0.01,P<0.05),与广西和吉林人群比较差异无显著(P>0.05)。结论新疆塔吉克族人群中存在LPL基因HindⅢ酶切位点多态性在同族男女间无显著性差异,可在不同种族间存在着较大的差异,这种差异可能是导致某些疾病在不同种族间的发现率和临床表现存在显著不同的因素之一。