Eg5基因对膀胱癌T24细胞增殖和迁移的影响

目的通过RNA干扰阻断T24细胞中Eg5基因的表达,研究Eg5基因对T24细胞增殖和迁移的影响。方法 T24细胞株分为3组:干扰组、空白对照组、阴性对照组。化学合成针对Eg5的小干扰RNA,通过脂质体转染至T24细胞中,应用Western blot法检测转染后T24细胞中Eg5蛋白表达,采用台盼蓝拒染实验检测细胞死亡率,用噻唑蓝(MTT)比色分析法和平板克隆形成实验检测细胞增殖抑制率,通过细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。结果干扰组Eg5蛋白表达显著低于空白对照组和阴性对照组;干扰组细胞死亡率显著升高,与空白对照组及阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);干扰组的克隆形成率下降,与空白对照组和阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);MTT结果提示,干扰Eg5基因表达后,T24细胞的增殖率明显下降(P<0.05);划痕实验结果显示干扰组细胞迁移能力受到明显抑制(P<0.05)。结论 Eg5基因在膀胱移行细胞癌起重要作用,干扰Eg5基因能有效抑制T24细胞的增殖与迁移,促进细胞死亡,以Eg5为靶点有望成为膀胱癌基因治疗的新基因靶点。

S-三甲基-L-半胱氨酸对膀胱尿路上皮癌细胞Eg5基因表达和凋亡的影响

目的:体外观察纺锤体驱动蛋白Eg5抑制剂S-三甲基-L-半胱氨酸(STLC)对人膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞Eg5基因表达和凋亡的影响。方法:分别采用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐微量酶反应(MTT)比色法、TUNEL染色法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blotting法检测STLC对人膀胱癌BIU-87细胞的细胞周期、生长抑制率、凋亡指数、Eg5 mRNA及其蛋白相对表达水平的影响。结果:将STLC与BIU-87细胞共孵育,不同时间点收集细胞,可见随着STLC作用时间延长至16 h,细胞有丝分裂周期中G2/M期的BIU-87细胞明显增多(29.6%),且细胞发生凋亡的比例也有明显增加的趋势。统计分析显示,与0 h相比,STLC处理16 h时细胞凋亡比例升高,差异有统计学意义(P=0.020)。去除STLC后再培养,于不同时间点收集细胞,结果表明STLC去除后BIU-87细胞周期进程开始恢复,与去除1 h时G2/M期细胞比例(34.84%)相比,去除3 h后G2/M期细胞比例(24.9%)显著降低,差异有统计学意义(P=0.001);细胞凋亡比例差异也有统计学意义(P=0.049)。与对照组相比,STLC处理组细胞增殖抑制率和凋亡指数均显著升高,差异有统计学意义(P<0.001);与对照组相比,STLC处理组Eg5 mRNA和蛋白的表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:STLC可有效抑制Eg5基因表达并诱导人膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞凋亡,为膀胱尿路上皮癌的药物治疗提供了实验依据和理论基础。