Eg95基因疫苗不同免疫途径的体液免疫应答比较

目的:用构建的细粒棘球蚴 95 (Eg95 )抗原基因真核表达重组质粒 pc DNA3- Eg95 ,直接免疫小鼠 ,观察其所诱导的体液免疫反应。方法:碱裂解法大量提取重组质粒 ,采用肌肉注射、静脉注射、皮下注射 3种免疫途径和不同剂量的重组质粒免疫小鼠 ,用 EL ISA法测定小鼠血清抗体滴度。 结果:在相同剂量下 ,重组质粒免疫小鼠刺激机体产生抗体反应强度的免疫途径依次为肌肉、皮下和静脉注射 ,阳性反应率由高到低依次为皮下、肌肉和静脉注射。以肌肉注射方式免疫小鼠的抗体反应维持时间较长 ,主要产生 Ig G2 a为主的抗体。 结论 :用 pc DNA3-Eg95重组质粒

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗构建及鉴定

目的构建和鉴定细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合基因疫苗。方法自行设计引物,从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR分别扩增Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Eg95和EgA31,得到Eg95-EgA31融合基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,定向克隆到大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,构建重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,抽提质粒进行双酶切鉴定,电穿孔法转化两歧双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb),构建细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT-PCR扩增出约1 016bp的Eg95-EgA31融合基因;重组质粒用双酶切鉴定可切出预期大小片段,以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到约1016bp的Eg95-EgA31融合基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,为该疫苗的开发利用奠定了实验基础。

不同剂量包虫病基因工程亚单位疫苗EG95免疫牦牛后的抗体水平测定

为比较和评价不同剂量包虫病基因工程亚单位疫苗EG95免疫牦牛后的抗体差异,随机选择1岁左右的牦牛50头,平均分成A、B、C、D、E 5组,分别按照1、2、3、4、5头份剂量(每头份含EG9550μg)进行一免和二免(间隔28 d);免疫前及二免后15 d采血,应用间接ELISA法检测血清中的特异性抗体。结果显示:二免后A、B、C组的抗体阳性率分别为30%、40%、50%,与E组的90%存在显著性差异(P<0.05),D组阳性率为80%,与E组无显著性差异(P>0.05);A组和B组抗体合格率均为0,C、D、E组的抗体合格率分别为10%、40%、70%,E组抗体合格率明显高于其他组(P<0.05)。试验结果表明,采用EG95基因工程亚单位疫苗按5头份剂量免疫,间隔28 d后二免,对牦牛的免疫效果较为理想。

牛包虫病基因工程亚单位疫苗EG95免疫牦牛效果及安全性评价试验

为研究牛包虫病基因工程亚单位疫苗EG95对牦牛的免疫效果、安全性,并调查该疫苗在不同性别、不同年龄、不同海拔地区牦牛间存在的免疫差异性。对4月龄及以上牦牛以免疫剂量每次1头份,每头份含EG95 250μg进行首免、加免(28d后)、安全评价(免疫剂量每次2头份含EG95 500μg),在试验前、首免后28d及加免后28d分别对免疫效果组和对照组牦牛采血,应用间接ELISA法检测血清中特异性抗体。结果显示,首免后28d免疫抗体群体阳性率为71.33%,加免后28d免疫抗体群体阳性率为83.00%,相比首免免疫抗体群体阳性率提高11.67%,与对照组、免疫前比较差异显著(P<0.05)。安全试验组牦牛免疫后第1天有6头出现精神沉郁、采食量下降、体温升高、注射部局部肿胀等不同程度免疫应激反应,4d后均恢复正常。石渠县、康定市不同海拔地区试验牦牛在免疫抗体产生时间、群体阳性率等方面,无明显差异(P>0.05)。结果表明,该疫苗适用于不同海拔地区牦牛使用,安全并可产生较高的抗体水平,对4月龄及以上牦牛免疫程序基本为2次免疫,分别颈部皮下注射1头份,间隔期28d。

2021年甘孜州牦牛包虫病免疫效果的再评估

为比较2017年和2021年甘孜州地区牦牛免疫羊包虫病基因工程亚单位疫苗Eg95的效果和安全性,本研究对甘孜州三个县共1244头健康成年牦牛在首免后间隔28 d二免,二免后15 d统一采血并分离血清,应用牛包虫病ELISA抗体检测试剂盒检测Eg95特异性免疫抗体。结果得出:牦牛免疫包虫病基因工程亚单位疫苗Eg95的效果稳定,安全性较高。