miR-218-5p靶向EGLN3抑制肺腺癌增殖、迁移和侵袭

目的 微小RNA(microRNAs, miRNA)参与了多种癌症的发生发展,有研究证明微小RNA-218-5p(microRNA-218-5p, miR-218-5p)在癌症的发展中发挥着重要作用。然而,miR-218-5p影响肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)发展的具体机制尚未明确。方法 通过癌症基因组图谱(the cancer genome atlas, TCGA)数据分析肺腺癌组织中miR-218-5p的表达情况,实时荧光定量PCR(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测miR-218-5p和EGLN3在人肺正常细胞系和人肺腺癌细胞系中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-218-5p对AKT/mTOR信号通路关键蛋白表达的影响以及细胞中EGLN3的蛋白表达。使用生物信息学方法预测并通过荧光素酶报告基因检测证实miR-218-5p与EGLN3的靶向关系。细胞活力和细胞毒性检测(cell counting kit-8, CCK-8)、细胞克隆形成、细胞划痕、Transwell实验检测miR-218-5p与EGLN3对肺腺癌细胞功能的影响。结果 miR-218-5p在肺腺癌中低表达,过表达miR-218-5p可抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,并抑制AKT/mTOR信号通路的激活。miR-218-5p的下游靶基因EGLN3在肺腺癌中高表达。过表达EGLN3减弱了miR-218-5p过表达对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-218-5p靶向下调EGLN3抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,这些结果为肺腺癌的新治疗方法和检测手段的开发提供了新的参考依据。

EGLN3在肺腺癌中表达的Meta分析

目的 分析EGLN3在肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)中的作用。方法 (1)通过癌症基因组图谱(the cancer genome atlas, TCGA)数据库下载535例肺腺癌样本和59例正常样本,分析EGLN3在肺腺癌和正常肺组织中的表达差异;(2)使用R语言分析EGLN3的表达水平及其在肺腺癌中的临床意义;(3)通过Kaplan-Meier方法、单因素和多因素COX回归分析和生存预测列线图确定EGLN3的表达水平与肺腺癌预后的关系;(4)通过基因集富集分析(GSEA)筛选EGLN3相关的生物学途径;(5)细胞实验:通过蛋白质印迹法(WB)验证EGLN3在肺腺癌细胞中是否存在差异表达;对EGLN3基因进行过表达和干扰表达,采用CCK-8增殖实验、划痕实验和Transwell侵袭实验,明确表达水平对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 (1)EGLN3在肺腺癌组织中表达水平高于正常肺组织细胞;(2)EGLN3表达水平与肺腺癌病理分期相关,病理分期越高,对应EGLN3表达水平越高;(3)EGLN3表达水平与肺腺癌总生存期(OS)独立预后相关,EGLN3高表达肺腺癌较EGLN3低表达肺腺癌OS、疾病特异性生存期(DSS)和无进展间隔(PFI)差;(4)基因集富集分析预测EGLN3可能参与的信号通路包括激活MYC基因、上皮细胞-间充质转化(EMT)、DNA复制、细胞周期、mTORC1通路、G2/M检查点、E2F转录过程、P53信号通路等;(5)细胞实验:EGLN3在肺腺癌细胞中表达水平高于人支气管上皮样细胞;CCK-8增殖实验、划痕实验和Transwell侵袭实验显示,EGLN3过表达促进肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移,EGLN3干扰表达抑制肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移。结论 EGLN3在肺腺癌细胞中存在高表达,提示肺腺癌预后不良,可作为肺腺癌预后的预测因素。EGLN3表达可促进肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移。

EGLN3对口腔鳞状细胞癌患者的临床预后作用

目的:研究EGLN3基因对口腔鳞状细胞癌患者预后的影响意义。方法:通过二次分析口腔鳞状细胞癌基因表达数据集GSE42743,明确EGLN3基因在口腔鳞状细胞癌组织和其相应的正常口腔黏膜组织中的表达差异,探讨EGLN3(egl-9 family hypoxia inducible factor 3,egl-9家庭缺氧诱导因子3)基因与口腔鳞状细胞癌患者的年龄、性别、吸烟情况、肿瘤部位、T分期、PN分期(pathological N分期)、CN分期(clinical N分期)以及AJCC(American Joint Committee on Cancer,美国肿瘤研究联合委员会)分期、总生存期及口腔鳞状细胞癌特异性总生存期间的关系,并运用基因集富集分析方法进一步探讨EGLN3基因对口腔鳞状细胞癌细胞的具体作用机制。结果:EGLN3基因在口腔鳞状细胞癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.0001),高表达EGLN3的口腔鳞状细胞癌患者的T分期、CN分期(临床分期)、PN分期(病理分期)、AJCC分期方面明显劣于EGLN3低表达组口腔鳞状细胞癌患者(P=0.017,P=0.001,P=0.04,以及P=0.02),EGLN3低表达组口腔鳞状细胞癌患者的总生存期与口腔鳞状细胞癌特异性总生存期均显著优于EGLN3高表达组口腔鳞状细胞癌患者(两组P值均<0.0001)。GSEA(gene set enrichment analysis,基因集富集分析)分析提示EGLN3基因可能通过m TORC1、E2 F、MYC、NOTCH信号通路以及PI3 K-AKTm TOR、蛋白分泌、有丝分裂、细胞周期G2M检查点,糖酵解、胆固醇代谢、去折叠蛋白反应等多种生物学过程作用于口腔鳞状细胞癌细胞。结论:EGLN3基因是口腔鳞状细胞癌患者的独立预后不良因素。

rno-miR-9a-5p靶向Egln3调控嗜铬细胞瘤凋亡机制

[目的]探讨嗜铬细胞瘤抵抗细胞凋亡的潜在机制。[方法]顺铂处理或不处理嗜铬细胞瘤细胞PC-12后,通过蛋白质组学检测两者蛋白表达差异。通过siRNA敲低上述差异基因,检测嗜铬细胞瘤细胞PC-12的凋亡水平。[结果]顺铂处理后,BIM和Egln3蛋白表达量增高,Egln3的mRNA水平显著上升(P<0.05)。过表达Egln3后,BIM的表达显著上升。敲低Egln3后,BIM的表达显著下降。Egln3能够降低BIM的泛素化水平。敲低BIM和Egln3后嗜铬细胞瘤的凋亡水平显著上升(P<0.05)。过表达BIM和Egln3后,嗜铬细胞瘤的凋亡水平显著下降(P<0.05)。过表达rno-miR-9a-5p后,Egln3的表达水平下降。敲低rno-miR-9a-5p后,Egln3的表达水平上升。过表达rno-miR-9a-5p后,嗜铬细胞瘤凋亡水平上升(P<0.05);敲低rno-miR-9a-5p后,嗜铬细胞瘤凋亡水平下降(P<0.05)。[结论]rno-miR-9a-5p通过靶向Egln3及Egln3的mRNA,降低了Egln3的蛋白表达,抑制了蛋白酶体途径对促凋亡蛋白BIM的降解,随后增强了嗜铬细胞瘤细胞PC-12的凋亡水平。