EI24在消化道肿瘤中的研究进展

EI24(etoposide-induced gene 24)是由依托泊苷诱导的DNA损伤相关基因,可由p53基因直接激活。EI24蛋白主要定位于内质网膜上,是一种激活自噬的重要蛋白,参与细胞自噬形成。同时,EI24还参与细胞凋亡、增殖、耐药、炎症、细胞转移、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)等生物学过程。EI24的异常表达与包括食管癌、肝癌、结直肠癌等在内的多种消化道肿瘤密切相关,具有一定的临床诊治及预后价值。本文就近年来有关EI24在消化道肿瘤中的研究进展作一综述,以期为消化道肿瘤的基础研究及临床诊治提供理论依据。

一种利用荧光蛋白mNeonGreen2鉴定EI24蛋白拓扑结构的方法（英文）

方便且精准地检测跨膜蛋白拓扑结构,尤其是跨膜片段的氨基(N-)和羧基(C-)端的朝向,有利于发现新的蛋白质与蛋白质之间的相互作用,并进一步揭示蛋白质重要的生物学功能.自组装荧光蛋白已被广泛用于观察蛋白质与蛋白质之间的相互作用、标记细胞内源蛋白质并实现mRNA定位的可视化.本文扩展了自组装荧光蛋白的应用,将自组装荧光蛋白mNeonGreen2与定点标记技术相结合,以确定跨膜蛋白的拓扑结构.通过该方法,第一次清楚地证明了EI24的N端和C端均朝向细胞质方向.此外,该方法可用于确定定位于其他细胞器且结构尚未解析的跨膜蛋白的拓扑结构.

EI24在肿瘤中的研究状况

EI24(etoposide-induced gene 24)是一种由依托泊苷以依赖于p53的方式诱导的DNA损伤应答基因,可通过p53介导的凋亡途径抑制细胞生长,在多种恶性肿瘤中通过促进癌细胞凋亡发挥抑癌作用。EI24基因编码的位于内质网膜上的EI24蛋白,是一种重要的自噬蛋白,参与自噬小体的形成,促进自噬通量,从而在多种恶性肿瘤中发挥抑癌作用,但这也有利于促进依赖自噬维持生存的胰腺癌的生长。该基因定位于11q23-q24,是人类癌症中一个频繁突变的区域,其突变与肿瘤的恶性和侵袭性相关,在不同类型的肿瘤中。EI24的表达水平和所发挥的功能不同,EI24在乳腺癌、非小细胞肺癌、胰腺癌等大多数肿瘤中表达水平较正常组织低,并通过诱导凋亡、激活自噬、抑制上皮间质转化等功能以及基因突变在肿瘤的发生发展中发挥抑癌基因的作用。但在皮肤癌中,EI24的表达水平较正常组织高,并能促进皮肤癌的癌变,发挥癌基因的作用,其机制可能是与EI24结合的互作蛋白不同有关。本文就EI24的生物学功能及其在肿瘤中的作用做一综述。

雷州黑鸭EI24基因的遗传多态性及与产蛋性能的相关性分析

为了探讨依托泊苷诱导的2.4蛋白(etopositde-induced 2.4protein,EI24)基因在雷州黑鸭群体中的遗传多态性,分析与雷州黑鸭产蛋性状相关的潜在遗传标记位点,本试验以雷州黑鸭为研究对象,采用PCR扩增技术获得EI24基因的目的片段,通过直接测序法检测到突变位点,随后使用GraphPad Prism 6.0软件对产蛋性状和基因型与单倍型之间进行多重比较,分析EI24基因的SNP位点与雷州黑鸭产蛋性能的相关性。结果表明,EI24基因内含子5中发现7个SNP位点,其中,I5-17G>T、I5-59G>A>T、I5-159G>A、I5-110T>A和I5-256C>A位点与雷州黑鸭开产日龄显著相关;I5-166G>A和I5-385C>T位点与雷州黑鸭开产体质量极显著相关。单倍型分析发现,H1H4单倍型可作为雷州黑鸭群体筛选低开产日龄、高开产体质量、高产蛋量个体的综合最优单倍型。说明EI24基因多态性可为选育优势高产蛋量的雷州黑鸭提供有利的遗传标记。

原油降解菌株Pseudomonas.aeruginosa AS1生理生化性质及分类研究

原油降解菌株AS1筛选自延长油田油水样,对延长轻质原油具有良好降解能力,通过生理生化指标和16SrDNA基因序列分析进行了菌种鉴定,原油降解菌株AS1的16SrDNA基因序列与Pseu-domonas aeruginosa的相似度为99.1%,因而将其命名为P.aeruginosa AS1。该菌株的最适生长温度为37℃,能以延长轻质原油、液体石蜡为唯一碳源生长,并能合成鼠李糖脂类生物表面活性剂,该表面活性剂对柴油、煤油和原油等均有很好的乳化效果,在常温下形成EI24值为100%的乳状液。鉴于P.aerugi-nosa AS1的良好生物属性,该菌株有进一步进行微生物矿场试验的潜力。

依托泊苷诱导蛋白2.4调控iNKT细胞的发育和IFN-γ应答（英文）

iNKT细胞是一类特殊的固有样T淋巴细胞,在感染、肿瘤、自身性免疫疾病和代谢类疾病中都发挥重要的调控作用.揭示调控iNKT细胞发育、分化和功能的细胞分子机制,对于阐释iNKT细胞与疾病的关系以及寻求可能的治疗途径都具有重要的意义.依托泊苷诱导蛋白2.4 (Etoposide-induced protein 2.4,Ei24)可调控细胞生长、凋亡和自噬等多种生物学功能,但其对iNKT细胞的发育和功能的影响仍不清楚.本研究利用Cre/loxP重组酶系统成功构建T细胞中Ei24特异性敲除小鼠.敲除Ei24后,iNKT细胞在胸腺中的发育受到明显抑制,肝脏和脾脏等组织中的iNKT比例和数目明显减少.进一步研究发现,Ei24主要影响iNKT1和iNKT17 2个亚群,对iNKT2的调控作用相对较小.当腹腔注射iNKT细胞特异性活化抗原α-GC后,敲除Ei24后iNKT细胞的IFN-γ应答更低,但不影响i NKT细胞的IL-4应答.以上结果表明,Ei24可以调控iNKT细胞的发育与功能.

橙皮苷对模型小鼠肺纤维化的改善作用

目的探讨橙皮苷对模型小鼠肺纤维化(PF)的改善作用及作用机制。方法将60只小鼠随机分为正常对照组(灌胃,等体积生理盐水)、模型组(灌胃,等体积生理盐水)、橙皮苷低、高剂量组(灌胃,25 mg/kg、100 mg/kg),oe-EI24组(一次性尾静脉注射,16μg,0.8 mL)、oe-NC组(一次性尾静脉注射,16μg,0.8 mL),各10只。鼻饲博来霉素(0.1 U/25 mg,20μL)以复制PF小鼠模型,正常对照组小鼠鼻饲等体积生理盐水。建模14 d后各组小鼠给予相应药物,灌胃每天1次,连续7 d。采用苏木素-伊红染色、Masson染色,显微镜下观察小鼠肺组织形态,免疫组织化学法检测CollagenⅢ表达水平,Western blot法检测相应因子蛋白表达水平。结果与模型组比较,橙皮苷低、高剂量组小鼠肺萎陷较少,肺组织形态改善,胶原沉积和纤维化灶形成较少;炎性评分和肺纤维化评分均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,橙皮苷低、高剂量组小鼠肺组织中CollagenⅢ表达水平,CollagenⅠ、Vimentin、α-SMA蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与oe-NC组比较,oe-EI24组小鼠肺组织形态改善,胶原沉积和纤维化灶形成较少;炎性评分和肺纤维化评分、小鼠肺组织中CollagenⅢ表达水平,CollagenⅠ、Fibronection、α-SMA蛋白表达水平均显著降低,oe-EI24、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论橙皮苷可改善模型小鼠的肺纤维化程度,其机制与上调E-cadherin表达及下调CollagenⅠ、Fibronection、α-SMA表达有关。

含有WW结构域的泛素蛋白连接酶1降解依托泊苷诱导蛋白24并促进肝癌细胞增殖

目的筛选含有WW结构域的泛素蛋白连接酶1(WWP1)相互作用蛋白,探讨WWP1和依托泊苷诱导蛋白24(EI24)对肝癌细胞增殖的影响。方法利用酵母双杂交的方法筛选与WWP1相互作用的蛋白,并利用免疫共沉淀来进行相互作用验证。通过体内泛素化实验验证泛素连接酶WWP1与EI24酶和底物的关系。以慢病毒感染的方法建立WWP1和EI24稳定过表达或敲低表达的肝癌细胞系。通过细胞增殖实验、平板克隆实验和裸鼠成瘤实验检测WWP1和EI24对肝癌细胞增殖的影响。结果WWP1可以与底物EI24相互作用,并能够在体内将EI24泛素化降解。成功构建稳定过表达或敲低表达的WWP1和EI24的肝癌细胞系HepG2。在HepG2细胞中,过表达WWP1可以降低内源EI24的蛋白水平,而敲低WWP1可以使EI24蛋白水平增加。细胞计数盒8(CCK-8)法检测结果表明,在36 h时,WWP1过表达组和shWWP1组细胞的相对增殖活性分别为(347.00±8.15)%和(187.08±4.86)%,与对照组(270.33±15.01)%比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在36 h时,EI24过表达组和shEI24组细胞的增殖活性分别为(183.75±8.11)%和(317.33±9.60)%,与对照组(270.33±15.01)%比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。克隆形成实验结果显示,对照组、WWP1过表达组和shWWP1组的克隆形成数分别为(52±7)个/视野、(76±4)个/视野和(19±3)个/视野,WWP1过表达组细胞克隆形成明显增多(P<0.05),而敲低WWP1后细胞克隆形成较对照组减少(P<0.05)。对照组、EI24过表达组和shEI24组的克隆形成数分别为(38±4)个/视野、(10±3)个/视野和(69±7)个/视野。与对照组比较,过表达EI24使细胞克隆形成明显减少(P<0.05),敲低EI24的表达使细胞克隆形成明显增多(P<0.05)。裸鼠体内实验结果显示,经过4周同等条件喂养后,对照组、WWP1过表达组和shWWP1组的裸鼠移植肿瘤体积分别为(1400.00±43.71)mm3、(2636.67±290.45)mm3和(642.17±36.00)mm3,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、WWP1过表达组和shWWP1组的裸鼠移植肿瘤重量分别为(1.23±0.08)g、(2.05±0.17)g和(0.88±0.09)g,差异均有统计学意义(P<0.05)。WWP1过表达组细胞成瘤能力明显增强,shWWP1组成瘤能力明显减弱。对照组、EI24过表达组和shEI24组的裸鼠移植肿瘤体积分别为(1245.17±93.10)mm3、(662.17±60.88)mm3和(1986.67±226.75)mm3,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、EI24过表达组和shEI24组的裸鼠移植肿瘤重量分别为(1.15±0.04)g、(0.85±0.02)g和(1.73±0.05)g,差异有统计学意义(P<0.05)。EI24过表达组细胞成瘤能力明显减弱,shEI24组成瘤能力明显增强。结论WWP1可以靶向底物EI24进行泛素化降解,并促进肝癌细胞的增殖。