尿素包合法联用分子蒸馏法富集鱼油中EPA和DHA的研究进展

鱼油中的EPA和DHA是一类具有很高营养价值的功能因子,对心脑血管健康、大脑发育、改善视力、抗炎等都有积极的作用,因而获取高纯度的EPA和DHA逐渐成为众多研究者关注的热点问题之一。采用尿素包合法富集鱼油中的EPA和DHA,不仅原料成本低廉,而且操作简单,但是富集得到的鱼油质量不高;而分子蒸馏法可以较好地保护EPA和DHA的活性,提高鱼油的纯度。两种方法联用具有工艺成熟、原料成本低、操作简单等优势,是工业化生产高质量EPA和DHA较好的选择之一。因此,在总结富集纯化鱼油中EPA和DHA方法的同时,阐述了尿素包合法、分子蒸馏法及两种方法联用富集鱼油中EPA和DHA的研究进展,希望可以为未来工业化获取高质量的EPA和DHA提供一定的参考价值。

Fatty Acid Treatment with Pure Omega-3 Eicosapentaenoic Acid Ethyl Ester for Patients with Cardiovascular Diseases: Differences between Branded (EPADEL®) and Generic Products

Background: Omega-3 polyunsaturated fatty acids (PUFAs) have some protective benefits for patients with coronary artery and cerebrovascular diseases. Eicosapentaenoic acid (EPA) drugs are prescribed as branded (B: EPADEL?) or generic products but no data exist concerning the differences in treatment outcomes between these products. Methods and Results: We investigated the differences in the serum levels of EPA, docosahexaenoic acid (DHA) and arachidonic acid (AA), and the EPA/AA ratios through blood sampling six months after daily administration of 1800 mg of EPADEL? and a generic EPA drug was initiated for 96 patients with cardiovascular diseases. All patients received these PUFA treatments while continuing with baseline therapy. After 6 months of administration, EPADEL? produced better results than the generic (G) product (EPA;baseline: 59.4 ± 25.5 μg, B: 215.5 ± 58.8 μg, G: 199.7 ± 63.8 μg, B vs G, p < 0.0005;AA;baseline: 197.4 ± 44.6 μg, B: 158.3 ± 36.3 μg, G: 163.6 ± 38.9 μg, B vs G, p < 0.02, as mean ± SD). Conclusions: There were clear differences between EPA branded and the generic products. Further study is required to determine whether the benefits from the branded product justify the higher price compared to the generic drug cost.

二十碳五烯酸通过调节Nrf2通路抑制脂多糖诱导肾小球系膜细胞焦亡

目的:以核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)蛋白为切入点,基于Nrf2/NLRP3/GSDMD信号通路探究二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肾小球系膜细胞焦亡的调控作用,结合Nrf2激动剂(4-OI)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-bound oligomerized domain-like receptor protein 3,NLRP3)受体抑制剂(MCC950)探究EPA调控焦亡信号通路的机制。方法:LPS体外诱导肾小球系膜细胞(HBZY-1)焦亡模型,并根据不同药物处理分别设置空白对照组、LPS组、LPS+EPA组、LPS+EPA+4-OI组和LPS+EPA+MCC950组,其中LPS浓度为10μg/mL,EPA、4-OI和MCC950的浓度均为200μmol/L,按分组将药物同时加入培养板中处理48 h,利用CCK-8法、乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、TUNEL染色检测细胞损伤,ELISA检测细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-18释放量,蛋白免疫印迹法检测Nrf2、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达水平。结果:LPS与EPA共处理HBZY-1细胞的细胞活力实验表明,10μg/mL LPS刺激48 h显著降低了细胞活力(P<0.05),但20~200μmol/L EPA对其有明显的保护作用(P<0.05)。采用200μmol/L EPA进行后续实验发现,EPA可明显保护LPS造成的细胞损伤(P<0.01),减少炎性因子(P<0.01)、LDH的释放(P<0.01)和DNA的断裂并抑制焦亡信号通路的激活,促进Nrf2蛋白的表达(P<0.01)。结合4-OI、MCC950共处理发现4-OI可以促进EPA对焦亡的抑制作用(P<0.05),减少相关蛋白的表达以及因子的释放(P<0.05),并增强EPA对细胞的保护(P<0.01),而MCC950对EPA发挥的作用无显著影响。结论:EPA通过Nrf2抑制LPS诱导的HBZY-1细胞焦亡信号通路各分子的表达,发挥细胞保护作用。

轮枝霉(Diasporangiumsp.)产生EPA、AA发酵条件的初步研究

对本实验室分离的轮枝霉 (Diasporangiumsp )发酵产生含EPA、AA等多不饱和脂肪酸的条件 ,如碳源种类、氮源种类、pH、菌种的接种量和种龄、培养温度、通气量进行了研究 ,摇瓶发酵结果表明 ,以玉米粉和葡萄糖混合作为碳源能获得最高的不饱和脂肪酸产量 ;有机氮源有利于菌丝不饱和脂肪酸的产生 ;低温有利于菌丝中长链不饱和脂肪酸的产生 ,发酵接种量宜大 ;pH对菌丝生物量、EPA和AA的含量均有显著的影响。发酵培养 6d后菌丝中的不饱和脂肪酸含量达到最大值。在初步优化培养条件下 ,EPA、AA分别达到 2 5 3 7mg/L和 5 49 8mg/L。

影响腐霉发酵培养中菌丝形态的因素及其与EPA含量的关系

研究了发酵培养中影响腐霉菌丝形态的因素及其与EPA(二十碳五烯酸)含量的关系.结果表明,接种量、起始pH值、温度、添加物对腐霉菌丝形态影响较大,接种量3%～10%,培养温度25～30℃,起始pH4及pH6.5～9,添加植物油能使菌丝保持直径小于5mm的分散小球状态.同时,起始pH值及培养温度显著影响EPA含量.较低pH值和低温培养均有利于菌丝内EPA积累.

提取及培养条件对紫球藻AA与EPA的影响

研究了紫球藻脂肪酸提取过程中不同的预处理方法(碾磨处理、超声波处理及未预处理)及提取分析方法(KOH-甲醇法、乙醚-石油醚法、氯仿-甲醇法、乙醇法、HCl-甲醇法)对紫球藻二十碳四烯酸与二十碳五烯酸的影响,结果表明,碾磨预处理是紫球藻不饱和脂肪酸二十碳四烯酸(AA)及二十碳五烯酸(EPA)检测效果最好且简便经济的方法,而氯仿-甲醇法对紫球藻AA及EPA的气相色谱(GC)分析效果最优,在同等条件下其灵敏度高,所取得的长链不饱和脂肪酸甲酯的产物多,EPA达到1.159mg/g,AA达到2.062mg/g;其他方法依次按效果排序为:乙醚-石油醚法>乙醇法>KOH-甲醇法>HCl-甲醇法。同时研究了不同培养时间对紫球藻AA与EPA组成的影响,结果表明,对数前期第6d为收获EPA的最佳时间,含量达到10.671mg/g;对数期末第8d为收获AA的最佳时期,含量达到19.415mg/g。

β-环糊精与EPA包结物的制备及包结物热分解动力学研究

采用竞争包结法,用紫外＿可见光谱研究了在pH=10 5的缓冲液中β＿环糊精与EPA包结物的制备,结果表明,1分子EPA与2 5分子β＿环糊精依据范德华作用力和疏水作用力发生包结作用,生成稳定的包结物.包结物适宜的制备条件为:β＿环糊精与EPA的摩尔比为2 5∶1,主客体溶液的浓度比为14 0∶1,包结温度25℃,反应时间2 8h.用非等温热重法研究了β＿环糊精与EPA包结物的热分解反应动力学,实验结果显示,β＿环糊精与EPA包结物热分解过程反应级数大于1,用Ozawa(I)法和Reich法求得的热分解反应的活化能分别为183 85kJ/mol和183

DHA和EPA对高碘所致脑损伤的拮抗效应

目的观察二十二碳六烯酸(DHA)二十碳五烯酸(EPA)对高碘所致的脑蛋白质、核酸代谢和bcl-2、bax基因表达损伤的拮抗效应。方法体重10～14g的昆明种小鼠随机分为适碘组(IN)、高碘组(IE)和高碘加DHA和EPA组(IEDE)。IN组动物饮含碘量为50μg/L的去离子水,IN和IEDE组饮含碘量为3000μg/L的去离子水,IN和IE组用普通鼠饲料喂养,IEDE组动物用含DHA200mg/kg和EPA100mg/kg的鼠饲料喂养。90d后雌雄2:1合笼,仔鼠继续用亲代喂养条件喂养,30d后处死仔鼠,称全脑和海马组织重量,测大脑蛋白质、DNA、RNA含量和bcl-2、bax基因表达数量。结果IE组动物脑和海马组织重量、蛋白质、DNA、RNA数量和bcl-2基因表达均显著低于IN组,bax基因表达则高于IN组,IEDE组脑、海马重量、蛋白质、DNA、RNA含量与IN组差异无统计学意义,但bcl-2表达低于IN组,bax表达高于IN组,而与IE组比差异无统计学意义。结论高碘能干扰脑蛋白质和核酸代谢及bcl-2、bax基因表达,使脑重量下降,DHA和EPA可拮抗高碘所致的脑蛋白质和核酸代谢的紊乱,但对高碘引起的bcl-2、bax基因表达变化未见明显的调整作用。

气相色谱法测定马齿苋中的EPA和DHA

本文采用气相色谱法测定马齿苋中的EPA和DHA，用FID检测器检测定量。方法检测限：EPA为9．6×10－10g；DHA为6．8×10－9g。相对标准偏差：EPA为1．87％；DHA为3．66％。平均回收率：EPA为98．10％，DHA为96．22％。

竞争包结法研究β-CD对EPA的分子识别及对EPA稳定性的影响

以酚酞作为竞争包结的客体，采用紫外-可见光谱法研究了在pH为10．5的缓冲液中β-CD与EPA包结物的制备。结果表明，1分子EPA与2．5分子β-CD依据范德华作用力和疏水作用力发生包结作用，生成稳定的包结物。包结物适宜的制备条件为：β-CD与EPA的摩尔比为2．5：1，主客体溶液的浓度比为14．00：1；包结温度25℃；反应时间2．8h。多种弱相互作用力协同作用于β-CD的配位包结过程，主客体间的尺寸匹配决定所形成包结物的稳定性，根据竞争包结理论，用Hidebran-Benesi方程测定了25℃下包结物的稳定常数为8．17×10^(14)L/nol，说明包结物稳定。包结物中EPA的氧化稳定性得到显著改善。

二十碳五烯酸(EPA)体外诱导FRH-0201细胞凋亡机理的初步研究

目的:观察EPA体外诱导FRH-0201细胞凋亡机理的初步研究。方法:在处于指数生长期的人肝胆管癌细胞株FRH-0201培养剂中添加二十碳五烯酸(EPA),采用流式细胞仪对FRH-0201细胞线粒体跨膜电位的影响、细胞色素c免疫组化染色及Western Bolt检测Casepase-9和Casepase-3的表达。结果:FRH-0201细胞线粒体Δψm下降随EPA剂量的增大而显著增多(P<0.05),EPA处理组细胞内棕色颗粒的强弱和阳性细胞的比例明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.001),EPA不同浓度处理FRH-0201细胞48h后,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达显著提高。结论:EPA可能通过降低线粒体膜电位,释放细胞色素C,激活Caspase-9,从而引发Caspase-3的级联反应,诱导FRH-0201细胞凋亡。

从北极环境中筛选并鉴定产EPA的细菌资源

为筛选出高产二十碳五烯酸(EPA,C20∶5)野生型菌株,以采自北极地区的176株细菌为材料,通过TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)显色法和气相色谱两种方法筛选出4株疑似产EPA的细菌,并通过气质联用进一步确认其产物为EPA。其中编号6-42的菌株EPA占总脂肪酸百分比含量最高(4.9%),经16S r DNA进化分析鉴定为希瓦氏菌(Shewanella baltica),并命名为S.baltica 6-42。通过研究温度和浅蓝菌素等培养条件对其EPA含量的影响,发现加入3μg/m L的浅蓝菌素后,0℃静置培养其EPA的总脂肪酸百分比含量和单位干菌含量最高,分别为11.5%和6.7mg/g,10℃振荡培养其单位体积培养液EPA含量最高为3.6mg/L。

两株小球藻培养基的优化及其产EPA性能的研究

采用L18(37)正交法优化小球藻C95和小球藻C97的生长培养基,经15 L规模培养并收获小球藻;碱性乙醇法萃取游离脂肪酸,再经脲素包埋提取多不饱和脂肪酸,并用气相色谱检测二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)的含量。研究结果表明:小球藻C95最优培养基(微量元素母液0.8 m L/L,维生素母液2.4 mL/L,NaH2PO4·2H2O6.0 g/L,Na2SiO3·9H2O 9.0 g/L,NaNO360.0 g/L,FeC6H5O7·5H2O 3.0 g/L);小球藻C97最优培养基(微量元素母液1.6 m L/L,维生素母液2.4 m L/L,NaH2PO4·2H2O 4.0 g/L,Na2SiO3·9H2O 11.0 g/L,NaNO380.0 g/L,FeC6H5O7·5H2O 3.0 g/L);小球藻C95和小球藻C97对数末期(分别是第4天和第5天)达到的细胞密度分别为9.53×10^7个/mL和8.91×10^7个/mL,EPA含量分别占总脂肪酸的30.2%和29.5%,小球藻C95的EPA含量要高于小球藻C97。

尿素包合法富集鱼油乙酯中的EPA和DHA

采用尿素包合法富集鱼油乙酯中的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),通过单因素实验和正交实验确定最优富集工艺为:m(尿素)∶m(鱼油乙酯)为1.5∶1、V(乙醇)∶m(鱼油乙酯)为3∶1、包合时间1h、包合温度75℃、结晶温度25℃,一次包合的EPA+DHA含量可达85%以上,收率60%。

DHA与EPA合成超长链多不饱和脂肪酸的效率比较

目的比较在ELOVL4蛋白酶催化作用下,DHA和EPA合成超长链多不饱和脂肪酸VLC-PUFA的效率。方法构建携带ELOVL4基因和绿色荧光蛋白的重组腺病毒,转入培养的PC12细胞,通过qRT-PCR定量分析ELOVL4基因的表达量,WB检测ELOVL4蛋白的表达;1∶1加入DHA和EPA,孵育48 h之后进行脂肪酸提取,通过气相质谱GC-MS分析超长链脂肪酸的成分。结果 GC-MS检测到分别用DHA及EPA处理后的PC12+Ad-ELOVL4的细胞中有n3 VLC-PUFA的表达,34:5n3和36:5n3分别为0.85%和1.11%;34:6n3和36:6n3分别为0.16%和0.29%;EPA所产生的五烯酸总和是DHA所产生的六烯酸总和的4倍。结论 EPA合成VLC-PUFA的效率远远高于DHA,为患者提供更高比例的EPA,而非DHA,可能是治疗STGD3疾病的方式之一。

真菌发酵生产EPA及DHA影响因素的研究进展

对真菌发酵生产EPA及DHA的影响因素进行综述 ,介绍了菌种、碳源、氮源、C/N比、pH值、温度、发酵时间、通气量、代谢途径的调控、种龄和接种量等因素对EPA及DHA产量的影响。

水产品中EPA、DHA的氧化和保护方法

介绍了水产品中的EPA和DHA的主要功能和应用价值,对加工过程中影响EPA和DHA氧化的因素进行了分析,并对EPA和DHA在加工过程中的保护方法进行了综述。

气相色谱法测定海豹油中EPA、DPA、DHA含量的方法学研究

目的:建立气相色谱检测海豹油中EPA、DPA和DHA的方法。方法:采用氢氧化钾-甲醇酯化法将海豹油中的脂肪酸快速、有效的转化成脂肪酸甲酯,并通过方法学实验验证其可行性。结果:EPA、DPA和DHA甲酯含量在10～2000μg/mL范围内,峰面积与EPA、DPA和DHA甲酯含量呈良好线性关系;加样回收率在96.93%～103.38%之间,相对标准偏差小于2%;结论:该方法可以快速、准确地同时测定EPA、DPA和DHA含量。

DHA和EPA的生理功能及脑黄金鲜牛奶开发的技术研究

本文对DHA和EPA(脑黄金)的来源、生理功能进行了较为全面的探究,即:其来源狭窄,只能在鱼类,特别是深海冷水鱼中加以提取和集聚,是人体内不可缺少的多烯长链不饱和脂肪酸,人类必须注意摄取适量的DHA和EPA,才能达到益智保健的效果。同时,本文还较详尽地研究和介绍了脑黄金鲜牛奶的生产工艺及制造技术。