鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术的构建及致病性研究

构建了一种新的鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术 ,并对杨陵柔嫩艾美耳球虫地理株进行了分离 ,对继代增殖的纯种卵囊进行了致病性试验。结果表明 ,该单卵囊分离技术简单易行 ,单卵囊感染成功率可达4 0 % ;该虫株对雏鸡有很强的致病性 ,经口接种 1× 10 5个孢子化卵囊 ,致死率高达 80 %。

鸡艾美耳球虫单卵囊分离技术的建立

以玻璃纸做材料,用毛细吸管分离单卵囊,通过显微镜"重复"鉴定法,对柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)进行分离。单卵囊感染20只鸡,在感染后5 d～15 d,用饱和盐水漂浮集卵法进行检测。结果显示,有15只鸡粪便中检出卵囊,经鉴定均为所要分离的虫种(E.tenella),感染成功率为75%,准确率达100%。另外,应用改进后的玻璃纸单卵囊分离技术还成功分离到毒害、巨型、堆型、布氏、和缓和早熟艾美耳球虫的单一虫种。结果表明,改进后的单卵囊分离技术简单易行,感染方便,成功率和准确率都较高,而且所用材料易于获得,消毒方便。

鸡艾美耳球虫哈尔滨株的分离与鉴定

为研究鸡艾美耳球虫哈尔滨株单一虫种的生物学特性,本研究利用单卵囊分离技术分离了6种鸡艾美耳球虫哈尔滨株,用分离的单卵囊接种雏鸡,同时应用PCR方法对收集的单卵囊分离株进行球虫种类鉴定并进行同源性和系统进化分析。结果显示,分离得到的6株鸡艾美耳球虫分别为柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫和布氏艾美耳球虫,PCR结果表明单卵囊分离株确为该6种纯株。本研究表明毛细吸管单卵囊分离法简便易行,使接种难度降低,提高了接种成功率,为球虫的分子生物学研究奠定了基础。

鸡柔嫩艾美耳球虫广西株的分离与鉴定

目的建立一种简单、实用的单卵囊分离方法,并对一株广西柔嫩艾美耳球虫进行分离。方法采用电泳制胶槽来制作琼脂块进行球虫单卵囊的分离,单卵囊实验感染9只1日龄雏鸡,感染后收集粪便,用饱和盐水漂浮法进行卵囊检测。纯种卵囊经口感染10只1日龄雏鸡,观测卵囊寄生部位、最短孢子化时间,以及其潜在期和排卵高峰期。结果2只雏鸡粪便中检出卵囊,单卵囊感染成功率为22%。通过对其中一株球虫的研究,根据其卵囊的形状、大小、寄生部位、潜在期、卵囊最短孢子化时间、排卵高峰期等生物特征,鉴定该株球虫为柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)。结论本研究成功建立一种单卵囊分离技术,可作为球虫单卵囊分离的常规方法。

柔嫩艾美尔球虫的分离及病理学观察

采用单卵囊感染技术,从鸡球虫混合种中分离出1株柔嫩艾美尔球虫(E im eria tenella)。并对该株柔嫩艾美尔球虫的病理学做了进一步研究。利用柔嫩艾美尔球虫的寄生部位、肉眼病变、临床症状等生物学特性进行鉴定,并做回归动物实验,用此球虫卵囊100,000个感染雏鸡。取8天后明显病理变化的盲肠组织,采用石蜡切片技术,进行病理学观察。结果表明,在盲肠肠绒毛上皮、肠腺及肌层都有虫体寄生,并且有明显的出血病变。

堆型艾美尔球虫的分离与病理学研究

采用单卵囊感染技术,从鸡球虫混合种中分离出一株堆型艾美尔球虫(Eimeria acervulina)。并对该株堆型艾美尔球虫的病理学做了进一步研究。利用堆型艾美尔球虫的寄生部位、肉眼病变、最小潜在期等生物学特性进行鉴定,并做回归试验,用此球虫卵囊1×105个感染雏鸡。取感染5d后有明显病理变化的十二指肠组织,采用石蜡切片技术,进行病理学观察。结果表明,虫体寄生于肠绒毛上皮细胞内,大量的肠绒毛遭到破坏、断裂和脱落。

柔嫩艾美耳球虫野外分离株对4种抗球虫药的耐药性检测

该试验采集安庆、肥东及巢湖3个地区的3株盲肠球虫,进行柔嫩艾美耳球虫(E.tellena)单卵囊的分离,采用鸡体实验法对癸氧喹酯、尼卡巴嗪、球痢灵和磺胺氯吡嗪钠进行耐药性检测,以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对盲肠卵囊产量(ROP)和最适抗球虫活性百分率(POAA)4项指标综合判定。结果表明,安庆株、肥东株及巢湖株均对癸氧喹酯敏感,对尼卡巴嗪均完全产生耐药;安庆株对球痢灵中度耐药,对磺胺氯吡嗪钠重度耐药;肥东株对球痢灵轻度耐药,对磺胺氯吡嗪钠重度耐药;巢湖株对球痢灵重度耐药,对磺胺氯吡嗪钠完全耐药。

柔嫩艾美耳球虫安徽肥西(AHFX)株的分离与鉴定

目的分离并鉴定安徽肥西病鸡盲肠内的柔嫩艾美耳球虫。方法通过雏鸡进行单卵囊接种与增殖试验,对所获卵囊用形态学方法进行初步鉴定;运用PCR方法扩增该分离株的ITS-1基因序列,并与相关序列进行比对、构建系统进化树。结果该球虫分离株孢子化卵囊的平均大小为21.1μm×18.0μm,卵形指数为1.17,潜隐期为140 h;其ITS-1基因序列与柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)GQ856310相似性达98.2%,二者的亲缘关系非常接近。结论该球虫分离株为柔嫩艾美耳球虫(E.tenella),暂命名为柔嫩艾美耳球虫安徽肥西(AHFX)株。