柔嫩艾美耳球虫GZ株子孢子表面抗原基因的克隆及序列分析

利用RT -PCR方法从柔嫩艾美耳球虫 (Eimeriatenella)的孢子化 10h卵囊中扩增出了λMZ5- 7基因 ,并把该基因片段克隆到pMD18-T载体上 ,对阳性克隆进行PCR鉴定及酶切分析并进行测序。结果表明 ,该序列全长 936bp ,为一完整的开放阅读框 ,与国外报道的柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子表面抗原基因λMz5- 7的同源性为 98% ,氨基酸的同源性为 95.6 %。该基因的克隆有望用于基因工程苗的研究。

鸡柔嫩艾美耳球虫疫苗候选基因在大肠杆菌中的表达

目的 构建柔嫩艾美耳球虫子孢子表面抗原原核表达载体 ,并且在大肠杆菌中表达。 方法 将本室构建的pMD Mz5 7克隆质粒酶切回收目的片段定向亚克隆到pET 2 8b(+ )载体上 ,构建成原核表达载体pET 2 8b Mz5 7,酶切鉴定正确后 ,在EscherichiacoliBL2 1(DE3 )中用IPTG诱导表达 ,并经SDS PAGE及Westernblotting鉴定。 结果 成功构建了目的抗原基因的原核重组表达质粒pET 2 8b Mz5 7,IPTG诱导表达该融合蛋白 ,SDS PAGE电泳表明 ,其能表达一分子质量约为 3 7ku的融合蛋白 ,与预测分子质量相符 ,最佳反应条件为 1mol LIPTG诱导 4h后表达量最高。薄层扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的 18% ,Westernblotting结果显示 ,表达产物可被抗柔嫩艾美尔球虫的多克隆抗体识别 ,说明该融合蛋白具有很好的反应原性。 结论 在原核细胞融合表达Mz5 7成功 ,为鸡球虫病重组苗的研究奠定了基础。