柔嫩艾美耳球虫秦皇岛和唐山分离株对7种抗球虫药的耐药性

选择360只14日龄雏鸡,随机分成18组,其中每个分离株均设7个感染用药组,1个感染不用药组,1个不感染不用药组,每组20只,以POAA、RLS、ROP、ACI作为指标。结果显示,除唐山株柔嫩艾美耳球虫仅对氨丙啉和尼卡巴嗪敏感外,秦皇岛株和唐山株对其他药物均产生不同程度的抗药性,其中对球敌均呈现完全抗药性。结果表明,目前在唐山地区可合理地使用氨丙啉和尼卡巴嗪,对其他药物在秦皇岛和唐山两地区须减少或暂停使用。

柔嫩艾美耳球虫甘肃株抗药性的试验研究

用柔嫩艾美耳球虫甘肃株(E.tenella G S,E t G S)对15日龄雏鸡进行感染,以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标,进行综合评定,研究了该虫株对三九球痢灵、地克珠利、氯苯胍和地克珠利氯苯胍合剂等几种常用抗球虫药的敏感性。结果表明,该虫株对三九球痢灵有中度抗药性,对地克珠利和地克珠利氯苯胍合剂有轻度抗药性,对氯苯胍无抗药性。

IL-6基因启动子区单核苷酸多态对京海黄鸡柔嫩艾美尔球虫抗性指标的影响

为探究白介素6(IL-6)基因5′启动子区单核苷酸突变对鸡柔嫩艾美尔球虫抗性指标的影响,以京海黄鸡为试验材料,对IL-6基因5′调控区单核苷酸多态性(SNPs)进行检测,根据感染组与对照组血浆抗性指标酶联免疫吸附试验检测结果,分析SNPs突变形成的基因型与抗性指标的关联。结果表明:感染组与对照组间过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量差异极显著,超氧化物歧化酶(SOD)活性及IL-2、IL-16、IL-17、γ干扰素(IFN-γ)水平和体增重差异显著;通过京海黄鸡IL-6基因启动子区基因序列与GenBank上的SNPs数据库比对,发现3个新的SNPs(A-663G、C-447G和G-357A),其中A-663G位点只有1种基因型GG,C-447G和G-357A位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态且多态性丰富;C-447G突变位点各基因型间比较发现,血浆CAT、SOD、GSH-Px活性及IL-2、IL-16、IL-17水平和体增重差异极显著,MDA含量差异显著;G-357A突变位点各基因型间比较发现,血浆CAT、SOD活性及IL-16水平和体增重差异极显著,GSH-Px活性和IL-17水平差异显著。就主要抗性指标而言,C-447G和G-357A2个突变位点的CC和AA纯合型个体优于其他基因型个体,CC和AA基因型分别为2个突变位点鸡球虫抗性有利基因型,这一结果为京海黄鸡鸡球虫抗性分子标记辅助育种提供了参考。

假蒟提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标的影响

本试验旨在研究假蒟提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标的影响。270只1日龄海南文昌公鸡,随机分为6个组,每组3个重复,每重复15只,T1、T2和T3组为对照组(依次分为不感染不给药组、感染不给药组、感染给药组);T4、T5和T6组为假蒟添加组,分别在基础日粮中添加200、400、600mg/kg假蒟提取物粉剂。15日龄时,每组随机抽取30只鸡,除T1组灌服生理盐水外,其他各组鸡均经口接种柔嫩艾美耳球虫卵囊悬液,分别于接种前1d,接种后3、6、9d清晨采血测定其血液指标。结果表明,与感染球虫不给药的T2组相比,假蒟组(T4、T5、T6)可以显著降低感染球虫鸡粪便中球虫卵囊值(P<0.05)。假蒟组在感染球虫后第6天,与T1组比,RBC、HGB、HCT、Ca2+、Na+、Cl-、TP、ALB、GLB、TG、CHOL、T4等指标呈下降趋势;但在感染球虫后第9天,TP、GLB含量均显著高于T1组(P<0.05);在感染球虫后第6天,假蒟组与对照组相比,ALT、AST浓度水平均显著降低(P<0.05)。结果提示,假蒟提取物能提高感染球虫后鸡机体免疫机能,降低肝脏损伤,降低鸡感染球虫后粪便卵囊值,具有一定的抗球虫效果。

球虫感染及药物对雏鸡血清矿物质含量的影响

将160只14日龄雏鸡随机分为未感染对照组(I)、感染对照组(Ⅱ)、中药组(Ⅲ)和球敌组(Ⅳ)。除I组外,其余每只鸡口服感染8.0×104个E.tenella孢子化卵囊,对球虫感染0、3、6、9、12 d时的血清钾、磷、钙、铁含量进行了测定。结果表明:与I组比较,Ⅱ组血清钾含量在感染后3、6 d分别显著提高了44.81%(P<0.05)和130.28%(P<0.01);磷含量于感染后3、9 d分别显著降低了26.36%(P<0.01)和34.07%(P<0.01);铁含量在感染后6、9 d分别显著降低了37.12%(P<0.05)和35.07%(P<0.05)。Ⅲ、Ⅳ组血清钾、铁含量虽然与Ⅱ组差异不显著,但在感染高峰期(6 d),钾含量分别降低了26.76%和35.28%;铁含量分别提高了39.64%和38.44%;磷含量于感染后9 d分别显著增加了45.00%(P<0.05)和61.11%(P<0.05),并与I组无显著差异。球虫感染及药物对血清钙含量无明显影响(P>0.05)。结果提示,中药和球敌能抵抗球虫感染,有助于保持血清矿物质含量的相对恒定。

柔嫩艾美耳球虫杨凌株3-1E基因的克隆、表达与蛋白结构预测

应用PCR技术,从柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊子孢子cDNA表达文库中扩增得到鸡E.tenella杨凌株(YL)子孢子表面抗原3-1E基因。序列分析表明,E.tenella YL 3-1E基因的开放阅读框(ORF)为513个碱基,编码170个氨基酸,与报道的E.tenella甘肃株(GS)3-1E基因相似性为99.8%,两者推导的氨基酸序列相似性为99.4%;而与文献报道的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)美国株(US)3-1E基因序列的相似性为98.8%,推导的氨基酸序列相似性为98.8%。利用生物信息学和分子生物学软件对3-1E基因编码的蛋白进行结构预测,结果表明,该蛋白为结构松散的球状蛋白。将3-1E基因亚克隆到表达载体pGEX-4T-1,构建pGEX-3-1E重组质粒并在大肠杆菌BL21中进行表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表明成功地表达出了分子量为44.7 ku的融合蛋白。该研究为球虫基因工程疫苗的研制奠定了基础。

柔嫩艾美球虫pEtK2抗原基因的克隆表达及其表达产物的抗原性分析

应用RT-PCR技术从纯化的柔嫩艾美球虫孢子化卵囊子孢子中克隆了pEtK2抗原基因,并进行了原核表达和抗原性分析,同时用MTT法检测了重组蛋白对球虫耐过鸡淋巴细胞的刺激效果。结果显示,克隆的pEtK2基因全长1464 bp,具有一个完整的开放阅读框,编码487个氨基酸,具有多个T细胞表位。重组蛋白诱导5 h后表达量最多,分子质量约55 ku,占菌体总蛋白的32%。纯化的重组蛋白能够刺激球虫耐过鸡T淋巴细胞增殖,可作为球虫基因工程疫苗或DNA疫苗的候选基因。

表面活性素抗球虫作用的研究

目的探讨表面活性素抗鸡柔嫩艾美耳球虫的效果,并对其溶血活性进行测定。方法选取7 d龄雏鸡150只,随机分为感染不用药组、抗球虫药(氨丙啉)饮水组、灌胃表面活性素(surfatin)组、肌肉注射表面活性素组及不感染不用药组。除不感染不用药组外各组均人工感染1×105个孢子化卵囊。于感染后第7 d收集粪便、第9 d剖杀观察各组抗球虫效果。脂肽的溶血活性利用比色法测定。结果感染不用药组、抗球虫药饮水组、灌胃和肌肉注射表面活性素组抗柔嫩艾美耳球虫指数(ACI)分别为14.02、190.20、163.97和107.07。表面活性素溶血活性随浓度的增加而升高。结论口服表面活性素具有中效抗柔嫩艾美耳球虫效果,并且多次口服给药效果要好于1次肌肉注射给药,但低于已知的抗球虫药氨丙啉,表面活性素具有溶血活性。

2种鸡柔嫩艾美耳球虫DNA疫苗的构建及在鸡体内的表达

利用DNA重组技术,将柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenalla)第2代裂殖子抗原基因MZ5-7的完整 阅读框(ORF,945 bp)克隆到真核表达质粒pcDNA4．0中,构建了DNA疫苗pcDNA4．0-MZ。用同样方法,将鸡成 熟白细胞介素-17(IL-17)基因的完整阅读框(507 bp)与MZ5-7基因串连,使MZ5-7基因位于IL-17基因的上游, 将串连基因克隆到pcDNA4．0中,构建成免疫调节型DNA疫苗pcDNA4．0-MZ-IL-17。2种DNA疫苗纯化后,胸 部肌肉注射免疫1周龄雏鸡(50 μg／鸡),在免疫后3．5,7,15和20 d取注射和非注射部位肌肉组织,分别用RT- PCR和Western blot方法检测抗原基因转录和表达情况。结果表明,在2种疫苗免疫后5,7和15 d,用RT-PCR 方法在注射部位均可检测到MZ5-7基因的转录产物,大小约950 bp,但在免疫第3天和20天的肌肉组织中未检测 到表达产物。相同时间用Western blot方法进行检测,结果在免疫5和7 d的鸡肌肉组织中检测到表达产物,pcD- NA4．0-MZ表达产物大小约36 ku,与理论推测值一致,pcDNA4．0-MZ-IL-17表达产物大小约64 ku,较MZ5-7和 IL-17基因之和的理论推测值58 ku略大。但在非注射部位,两种方法均未检测到转录或表达产物。上述结果表明, 通过肌肉注射后,两种DNA疫苗均可在鸡肌肉组织中得到有效表达。

常山提取物对人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫病疗效的观察

为了探讨常山提取物对鸡球虫病的治疗效果,通过人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫后在饲料中添加一定比例的药物,试验设常山提取物组(分别为200、100、50mg/kg饲料)、鸡球虫散组(300mg/kg饲料)、地克珠利组(1mg/kg饲料)、感染对照组和健康对照组。结果显示,与感染对照组比较,所有给药组试验鸡盲肠和十二指肠肿胀明显减轻,血液性内容物明显减少,抗球虫指数分别为171.98、169.18、169.01、163.84和166.74,均达到中等抗球虫水平。结果表明,常山提取物具有良好的抗球虫效果,且作为一类中药组分,具有绿色环保、低毒低残留的特点,有望成为新型抗球虫药物。