基于e-PCR的小麦、山羊草属SSR电子指纹图谱的开发

电子指纹图谱的绘制可对电泳结果进行规范化、可视化操作,进而提高小麦分子标记的流通性,加速小麦育种进程。本研究用MicroSAtellite(MISA)软件对小麦属、山羊草属共61个叶绿体和13个线粒体的全基因组SSR标记进行搜索,发现SSR位点的出现频率与基因组类型有关,线粒体、叶绿体基因组均以2次重复的五核苷酸和六核苷酸重复基序为主,同一种类型的基序重复次数与SSR数目成反比;基于电子PCR技术(e-PCR)并结合MapChart软件共筛选出30对引物,其中来源于二倍体和四倍体山羊草属叶绿体全基因组的引物分别有16和2对,来源于四倍体和六倍体小麦属叶绿体全基因组的引物分别有5和2对,来源于六倍体小麦属线粒体全基因组的引物有5对,最后用MapChart软件绘制电子指纹图谱。本研究采用了一种新的SSR引物设计和筛选方法,完成了小麦属、山羊草属叶绿体和线粒体共74个全基因组序列SSR分子标记的初步开发和电子指纹图谱的绘制,为引物开发提供了新思路,有利于提高分子标记的流通性以及小麦种质资源亲缘关系的鉴定。

PCR技术研究进展

PCR(Polymerasechainreaction)在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。本文对PCR技术的最新进展作一简要综述 ,包括 :热循环仪的改进 ,引物的软件设计及网络设计 ,各种DNA聚合酶体系及其特性 ,多种PCR(MultiplexPCR) ,DNAshuffling ,PCR芯片 ,固相PCR和电子PCR(ElectronicPCR)

Wolbachia在我国蚊虫体内感染组织定位的透射电镜观察和PCR检测

通过透射电镜的超微形态观察和分组织的PCR检测发现 ,在我国尖音库蚊复合组和白纹伊蚊体内感染的Wolbachia株不仅局限于生殖组织内。在淡色库蚊 (Cx .pipienspallens)和骚扰库蚊 (Cx .pipiensmolestus)雌蚊卵巢、中肠和胸部肌肉组织中都有B大组Pip组Wolbachia株的感染 ,而头部没有检测到感染。在白纹伊蚊雌蚊卵巢、中肠组织中存在A大组和B大组Pip组的Wolbachia株双重感染 ,胸部肌肉组织中仅发现B大组Pip组Wolbachia株的单独感染 。

电子PCR

电子PCR (ElectronicPCR ,e PCR)现已是一种常用的核苷酸序列电子分析工具 ,它在DNA片段的染色体定位、基因组测序、基因组辅助作图、PCR引物辅助设计和基因的克隆等方面发挥着重要作用。本文介绍了电子PCR技术的原理、方法和功能及其相关的数据库和应用发展趋势。

应用电镜与PCR技术检测琯溪蜜柚黄龙病病原

福建省产区发生琯溪蜜柚叶片斑驳、果实变小及全株矮化的病树是柑桔黄龙病引起的。采用电镜技术与 PCR技术研究 ,证明其病原 BL O在形态、大小与构造上和柑桔黄龙病病原 (BL O)相同 ,其病原 DNA、PCR扩增及 Southern Blot分子杂交的结果 ,证明它与柑桔黄龙病病原 PCR的产物具有很高的同源性。本病具有传染性 ,能通过病梢嫁接传染给琯溪蜜柚的健苗。

进口大豆上菜豆荚斑驳病毒的免疫捕获巢式RT-PCR检测

利用DASELISA对进口大豆上BPMV进行检测发现,从美国进口的部分大豆样品对BPMV的多抗血清呈阳性反应;利用免疫吸附电镜观察发现,ELISA检测阳性的大豆种皮病汁液中存在直径约30nm的球状病毒粒子。根据BPMV外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计了2对嵌合引物,建立了BPMV的高灵敏的免疫捕获巢式RTPCR(ICnestedRTPCR)检测方法。该方法经免疫捕获、反转录和2轮PCR扩增,能从带毒大豆种子中扩增到预期大小的DNA条带。序列测定与分析表明此条带的序列为BPMV部分CP基因,在系统关系树上与BPMV的其它分离物形成一簇亲缘关系很近。实验表明从进境大豆上检测到了BPMV。

电子束重复曝光加工PCR微通道的工艺研究

对PCR微流控芯片通道中流体的流动特性进行了分析,发现流体在横截面为圆形的通道中流动时由摩擦引起的等效水头损失及表面张力均小于微矩形通道。以此为依据,将PCR芯片微通道优化设计成圆形通道。在JSM-5CF电子束曝光机上采用束斑尺寸80nm、能量20keV的电子束对1μm厚的聚甲基丙烯酸甲酯进行了单次曝光剂量40μC/cm2的8次重复增量扫描曝光实验,显影后得到的PCR芯片微圆通道轮廓清晰,边缘连续光滑。证明了电子束重复增量扫描曝光方式制作PCR微流控芯片微圆通道的可行性。

中药抗病毒胶囊对豚鼠生殖器疱疹模型神经节及大脑影响的电镜和定量PCR研究

目的:探讨抗病毒胶囊治疗生殖器疱疹的怍用机理。方法:用雌性豚鼠生殖道单纯疱疹病毒(HSV)2型感染的模型,采取抗病毒胶囊内服,观察豚鼠神经节和大脑组织的超微结构及HSV-DNA含量。结果:透射电镜下见生理盐水对照组神经节超微结构有明显线粒体肿胀和粗面内质网扩张,其它用药组神经节和所有各组的大脑组织超微结构无改变,没有找到完整病毒颗粒。腰骶神经节HSV—2DNA定量PCR检测各组问比较差异有显著性(P<0.0001),各组大脑定量PCR检测均为阴性。结论:中药抗病毒胶囊在动物体内有阻止HSV-2对神经节的感染和破坏作用。

电子克隆结合RT-PCR获得两条eIF4E剪接变异体的全长cDNA

本研究旨在克隆急性白血病复发相关的新EST片段全长cDNA并进行生物信息学分析。电子克隆结合RT-PCR克隆新EST片段的全长cDNA,利用生物信息学技术分析所获得的cDNA。结果获得全长序列为1904bp和3393bp的两条真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor4E,eIF4E)新的剪接变异体,命名为真核细胞翻译起始因子剪接变异体1(splicing variant1 of eIF4E)和真核细胞翻译起始因子剪接变异体2(splicing variant 2 of eIF4E)。编码的蛋白产物分别为245和132个氨基酸。二者编码的蛋白产物与eIF4E蛋白有所不同。结论:获得了两条eIF4E剪接变异体的全长cDNA,这为进一步探讨与急性白血病复发的相关性提供基础。

感染白斑综合症病毒中国对虾雄性生殖系统的PCR检测与电镜观察

通过人工投喂携带WSSV的毒饵,对性腺发育成熟的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)雄虾(♂)进行感染实验。采用nest-PCR(巢式PCR)技术,检测感染后的中国对虾雄性生殖系统受WSSV感染情况,同时选取感染严重的虾样进行电镜观察。巢式PCR检测结果表明,感染组中国对虾的精巢、输精管和精囊均被WSSV感染,其中精囊呈阳性的最多,输精管次之,精巢最少。通过电镜进一步观察发现,WSSV粒子只存在于精巢、输精管和精囊的结缔组织中,而在其他组织和生殖细胞中均未发现病毒粒子。其中,精巢中WSSV粒子存在于精巢内两个生精小管之间的结缔组织;输精管中WSSV粒子存在于管壁的结缔组织;精囊中WSSV粒子也只存在于精囊内膜的结缔组织和精荚膜的结缔组织中。PCR检测和电镜观察结果均表明,WSSV粒子能感染中国对虾的雄性生殖系统且对性腺感染存在着一定的组织特异性。

落叶松尺蛾核型多角体病毒形态特征及分子检测技术建立

【目的】落叶松尺蛾核型多角体病毒(Erannis ankeraria nucleopolyhedrovirus,EranNPV)是有效调控落叶松尺蛾种群数量和质量的重要生物因子,明确EranNPV超微形态学结构,研究并建立其精准灵敏的分子(PCR)快速检测技术,有助于深入探究该病毒的传播机制和林间流行规律,从而为利用该病毒持续控制落叶松尺蛾提供技术支撑。【方法】利用扫描电镜和透射电镜对EranNPV多角体的外部形态和内部结构特征进行观察;根据EranNPV的ac54基因设计用于PCR检测的特异性引物EaV,通过多种昆虫病毒的PCR扩增结果验证引物特异性,测试该PCR检测技术体系对EranNPV基因组DNA和病毒悬浮液的灵敏性。【结果】电镜观察结果表明,该病毒多角体多为表面光滑的不规则多面体,少数多角体表面散布孔洞凹陷,平均直径为1.43±0.20μm,多角体内的病毒粒子呈单束分布,平均长度为219.14±17.50 nm;以EaV为引物,只有EranNPV能够扩增到目的条带,利用EaV为引物建立的PCR检测技术对EranNPV基因组DNA的检测灵敏度可达10 fg/mL,对EranNPV悬浮液的检测灵敏度可达1×102 OBs/mL。【结论】EranNPV为典型的单粒包埋型核型多角体病毒,利用EaV引物建立的PCR检测技术具有高度的特异性和灵敏度,有望进一步应用于EranNPV的林间传播和流行病学研究当中。

南京地区西花蓟马发生调查及其分子检测

以西花蓟马和烟蓟马的线粒体DNA的COI基因设计特异性引物,建立了西花蓟马PCR快速检测方法,该方法可以检测1/120单头成虫,对各种虫态均可进行特异性检测。对南京54种植物花器中蓟马种类进行了调查,通过形态特征和线粒体DNA的COI基因分子检测,均证明西花蓟马已在其中25种植物上发生,西花蓟马种群数量达蓟马总量20%的有11种植物,超过30%的有5种。

人类TECTB基因的电子克隆

用小鼠和鸡的 β tectorin基因 (Tectb)的编码区序列对NCBI数据库进行Blastn比较 ,得到一个相似性很高的人的gDNA序列 (GenBank :AL15 7786 ) ,用GENSCAN、MZEF程序和Blast2sequence程序分析AL15 7786 ,推测AL15 7786中包含一个编码区由 10个外显子构成的基因———TECTB基因。人TECTB基因的开放阅读框为 990bp ,推测编码32 9个氨基酸。人TECTB基因与小鼠的Tectb基因在 990bp有 88 1%的一致性 ,在 32 9个氨基酸有 94 2 %的一致性。用Electronic PCR将人TECTB基因定位于 10q2 5。

一株新型鸭源呼肠孤病毒(TH11株)的分离与鉴定

本文从太湖流域某养鸭场分离到一株呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)TH11株,该病毒感染的病鸭主要表现软脚和拉稀等主要症状,剖检病变以肝脏出血和脾脏坏死为主要特征。电镜鉴定结果显示,该病原具有呼肠孤病毒的典型形态学特征。动物回归试验和RT-PCR扩增结果证明,该株病毒无论是在致病性方面,还是在基因序列方面都不同于以往的番鸭呼肠孤病毒,而是一株对多品种鸭具有较高致病性和病死率的新型鸭呼肠孤病毒。

柑桔黄龙病诊断法的研究进展

研究柑桔黄龙病的困难，在于它的病原无法人工培养。因此，长期以来对黄龙病的诊断，主要依据典型的黄梢和叶片斑驳症状。在柑桔园管理不良，缺乏营养或其它病虫混合为害时，便难依据症状作出正确的诊断。这是造成对黄龙病认识上种种混淆的主要原因。７０年代应用电镜观察到黄龙病病原（ＢＬＯ）之后，电镜便成为诊断黄龙病的重要手段。但因病原在病树体内的浓度较低，分布又不均匀，致电镜的检出率偏低。８０年代，应用兔丝子将黄龙病ＢＬＯ转到长春花上增殖、提纯，作为抗原，制备了多抗和单抗的血清，由于多抗血清的效价很低和单抗血清的专化性太狭，均难用于诊断。最近，在病原ＤＮＡ序列测定的基础上，合成了引物Ｐ１及Ｐ２，并在引物Ｐ１及Ｐ２之间合成另一段ＤＮＡ片段Ｐ３作为探针。使ＰＣＲ（多聚酶链式反应）及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术可能用于黄龙病的诊断。研究结果证明ＰＣＲ技术比其他方法具有更大优点，能快速而准确地检测出病原；而Ｑ－ＰＣＲ（竞争性定量多聚酶链式反应）方法则能测定病原在不同样品中的含量，进行定量分析。

猪痢疾短螺旋体病的病原分离鉴定及其病理学观察

为确诊某猪群猪痢疾短螺旋体病,本实验对疑似病例剖检采集结肠粘膜样品,涂布于TSA血平板,37℃严格厌氧培养5 d,进行细菌分离鉴定,获得β溶血的分离株。分离株通过瑞氏-吉姆萨染色、扫描电镜观察和PCR检测,鉴定为猪痢疾短螺旋体。病理组织学显示:结肠呈现严重的卡他性炎症、产生大量粘液、血管充出血和粘膜坏死。高倍镜下显示:肠上皮细胞之间粘结疏松,胶原纤维溶解、断裂。结果表明,该猪群感染猪痢疾短螺旋体,病原菌侵害结肠和盲肠粘膜组织,造成严重损伤。

红壤中微生物群落对半导体矿物日光催化作用的响应

本研究选取天然红壤作为研究对象,分析其中的含铁半导体矿物光催化作用对本源微生物群落结构的影响。采用聚合酶链式反应/变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE),研究了不同原始光照条件的红壤中微生物群落在外源电子作用下群落结构的改变。DGGE图谱的主成分分析表明,两个不同原始光照环境的土壤样品的微生物群落结构由于原始环境的差异而不同:原始环境为强光照的样品中微生物群落结构受外源电子影响较小;原始环境为弱光照的样品中微生物群落结构受外源电子影响较大。这一群落结构改变的差异可能由于原始环境为强光照时半导体矿物光催化作用产生光生电子传递到环境中持续影响周围的微生物群落,而原始弱光照环境中则缺少光生电子的作用。

Nephrin在微小病变型肾病大鼠模型中的表达

目的:观察nephrin在大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型(PAN)中的表达变化,探讨其在蛋白尿发生中的作用。方法:通过建立大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型,应用光镜、电镜观察肾脏病理改变,应用免疫组织化学技术和RT鄄PCR观察nephrin在不同时间点肾病模型大鼠蛋白水平和mRNA水平表达改变情况。结果:①PAN注射后第1天和第3天,大鼠24h尿蛋白的排泄量较对照组无显著差异;第10天达高峰,较对照组有显著差异(P<0.01);第20天,尿蛋白排泄量逐渐下降,较对照组仍有显著差异(P<0.05);②在PAN肾病模型第3和第10天,透射电镜显示足细胞足突融合;③nephrin蛋白和mRNA水平的表达在大鼠PAN肾病模型第1天即出现下降,第3天出现明显下降,第10天下降到最低点,第20天,随着蛋白尿的恢复nephrin的表达也逐渐恢复;④肾小球足细胞nephrin表达的变化与肾病模型大鼠24h尿蛋白定量的变化呈负相关。结论:①nephrin表达的改变与大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型蛋白尿的发生密切相关;②nephrin是判断肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标。

REV感染肉种鸡后动态病理学观察与抗原分布及检测

用网状内皮组织增生病病毒(REV)人工接种1日龄肉种鸡,定期剖杀,通过病理组织学观察病变特征及肿瘤的发生发展;用免疫组化、PCR检测抗原与病毒在体内各器官的分布规律;超薄切片观察肿瘤细胞、病毒的形态。结果显示,肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊较早出现明显的肿瘤增生灶,在这些器官内免疫组化阳性信号出现最早,且信号最强,在5周龄时,心肌、腺胃、肺、肾、骨髓等器官才开始出现阳性信号,但呈中度的阳性反应,9周龄后阳性信号开始减弱。肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊、骨髓扩增出REV的LTR基因片段,超薄切片显示病毒多分布在胞浆内和细胞间隙内。研究发现病变明显的组织中,阳性反应较强,肿瘤细胞增生明显,即强阳性反应的组织器官易形成肿瘤转移灶及肿瘤结节,同时,抗原最早出现在这些器官说明其中可能存在REV的靶细胞。虽然阳性信号在腺胃出现较晚,但90%以上的腺胃肿大说明腺胃也是REV的主要侵害器官。

基于电子舌的不同储藏期红鱼粉区分与新鲜度评价

文章旨在探讨将伏安型电子舌技术应用于不同储藏期红鱼粉区分与新鲜度评价,电子舌检测系统主要由电子舌激励采集模块、电子舌分析识别模块和显示模块组成。同时采用传统的化学方法对鱼粉中挥发性盐基氮(TVB-N)的含量进行检测比对。实验结果表明,采用主成分分析(PCA)算法和主成分回归(PCR)预测模型能够有效地分类识别出不同新鲜度的鱼粉,对鱼粉新鲜度进行定性定量分析。电子舌技术为不同新鲜度鱼粉快速无损检测评价提供了新的检测方法和应用方向。