硫化氢预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨硫化氢预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:健康成年SD雄性大鼠40只,随机分成4组,每组10只。假手术组(S组)仅开胸并分离冠状动脉左前降支,不阻断血流150 min;缺血再灌注组(IR组)行冠状动脉左前降支阻断30 min,再灌注120 min;硫化氢预处理组(H组)予以静脉注射硫化氢钠0.05 mg/kg,给药后24 h同IR组处理;硫化氢预处理+线粒体KATP通道阻断剂(5-羟葵酸,5-HD)组(D组)缺血前15 min静脉注射5-HD 5 mg/kg,其它同H组处理。再灌注结束后抽血测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,测心梗面积,免疫印迹法测心肌S-腺苷蛋氨酸合成酶(S-adenosylmethionine synthetase,SAM-s)的表达。结果:心肌梗死面积与IR组(38.27%±5.64%)比,H组(25.40%±3.54%)减小(P<0.05),D组(40.53%±5.24%)无明显差异(P>0.05)。心肌SAM-s表达与S组比,IR组、H组和D组均升高(P<0.05);与IR组比,H组降低(P<0.05),D组无明显差异(P>0.05)。与IR组比,H组血清SOD的活性含量增高、MDA的降低(P<0.05),D组无明显差异(P>0.05)。结论:硫化氢预处理对大鼠心肌具有保护作用,其机制可能是通过抑制心肌SAM-s表达,减少氧自由基的生成,增强心肌抗氧化能力有关。

H_2S对兔左心室心肌细胞电生理特性的影响(英文)

目的:探讨硫化氢(H2S)对兔左心室心肌细胞电生理特性的影响。方法:用标准微电极细胞内记录技术,观测硫化氢对兔左心室心肌细胞电生理特性的影响。观测指标:静息电位(resting potential,RP)、超射值(over-shoot,OS)、动作电位幅值(amplitude of action po-tential,APA)、0相最大除极速率(maxi mal rate ofdepolarization,Vmax)、复极20%、50%和90%时间(20%、50%and90%of duration of action potential,APD20、APD50and APD90)及复极化平均速度(average rate of repolarization)。结果:(1)用50μmol/L NaHS灌流时,和正常对照组相比,APD50、APD90缩短(P<0.01),复极化平均速度增快(P<0.05)。(2)100μmol/L NaHS与对照组比较,APD50、APD90缩短(P<0.01),复极化平均速度增快(P<0.05)。和50μmol/L NaHS相比APD50缩短(P<0.01)、APD90缩短(P<0.05)、复极化平均速度增快(P<0.05)。(3)200μmol/L NaHS、400μmol/L、1000μmol/L NaHS可浓度依赖性的使APA、RP、OS减小(P<0.01),APD20、APD50、APD90缩短(P<0.01),复极化平均速度增快(P<0.01)。结论:H2S可浓度依赖性的影响兔左心室心肌细胞电生理特性。

硫化氢下调TGF-β_1/Smad2/3通路对大鼠心肌细胞胶原合成的影响

目的探讨气体分子硫化氢(H2S)对大鼠心肌细胞胶原合成的调节作用及可能机制。方法将大鼠心肌细胞H9C2随机分为4组:正常对照组(加入DMEM培养基)、硫氢化钠(NaSH)组(加入终浓度为2×10–4mol/L的H2S供体NaHS培养)、TGF-β组(加入终浓度为10ng/ml TGF-β1培养)、TGF-β+NaHS组(用含2×10–4mol/L NaHS的DMEM培养基培养30min,再加入10ng/ml TGF-β1培养)。培养1h后,采用Western blotting检测心肌细胞p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平,培养72h后采用免疫荧光染色法观察心肌细胞的Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果与正常对照组比较,NaHS组心肌细胞p-Smad2和pSmad3蛋白表达水平无明显差异,而TGF-β组心肌细胞p-Smad2和p-Smad3蛋白表达明显增多,且Ⅰ型胶原蛋白表达明显增强。与TGF-β组比较,TGF-β+NaHS组心肌细胞p-Smad2和p-Smad3蛋白表达明显下降,Ⅰ型胶原蛋白表达明显减弱。结论 H2S可抑制心肌细胞胶原合成,其机制可能与阻断TGF-β1/Smad2/3信号转导通路有关。

硫化氢对过氧化氢诱导的原代乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响及其机制

目的探讨硫化氢（H2s）对过氧化氢（H2O2）诱导的原代乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响及其可能机制。方法在常规培养3d的原代乳鼠心肌细胞中加入不同浓度（10、100、1000μmol／L）的H2O2处理24h建立心肌细胞氧化损伤的模型，分别为10μmol／LH202模型组、100μmol／LH2O2模型组及1000μmol／LH2O2模型组，另以完全培养基进行常规培养作为对照组。另外，NaHS配成不同的终浓度（1、10、100μmol／L）单纯作用或分别与100μmol／LH22O共同作用于心肌细胞24h探讨NaHS对H202诱导的原代乳鼠心肌细胞的影响，分别为1μmol／LNaHS＋100μmol／LH2O2处理组、10μmol／LNaHS＋100μmol／LH202处理组、100μmol／LNaHS＋100μmol／LH2O2处理组、单纯10μmol／LNariS处理组、单纯100μmo]／LNariS处理组，另设100μmol／LH202模型组和以完全培养基进行常规培养作为对照组。应用MTT比色法检测细胞存活率，黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）的活力，硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛（MDA）含量，化学比色法测定乳酸脱氢酶（LDH）活性。流式细胞术检测细胞凋亡百分率，罗丹明123（Rh123）染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位（mitoehondrial membrane potential，MMP），2，7，-二氯荧光黄双乙酸盐染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧簇（nos）水平。结果10、100、1000μmol／LH2O2处理原代乳鼠心肌细胞24h后，心肌细胞存活率和培养基上清液SOD活力均呈剂量依赖性地下降，细胞蛋白裂解液MDA含量、细胞培养液LDH活性则呈剂量依赖性地升高。100μmol／LH2O2模型组细胞存活率显著低于对照组（P=0．001），MDA含量显著高于对照组（P=0．003），10μmol／LH2O2模型组的SOD活力及LDH活性与对照组比较差异已有统计学意义（P分别为0．013和0．028）。1、10和100txmol／L的NariS与100Ixmol／LH，0，共同作用心肌细胞24h可呈剂量依赖性地抑制H2O2诱导的细胞存活率、SOD活力的下降以及LDH活性、MDA含量的升高，其中10和100μmol／LNaHS＋100μmol／LH202处理组与100μmol／LH2O2模型组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。100μmol／LH20模型组DCF荧光强度显著高于对照组（P=0．003），而10和100ixmol／LNaHS＋100v,mol／LH202处理组DCF荧光强度均显著低于100μmol／LH2O2模型组（P分别为0．017和0．000）。此外，单纯10和100μmol／LNaHS处理组DCF荧光强度与对照组比较差异均无统计学意义。100μmol／LH20模型组MMP显著低于对照组（P=0．000），而10和100μmol／LNaHS＋100μmol／LH202处理组MMP均高于100μmol／LH2O2模型组（P均〈0．05）。此外，单纯10和100Ixmol／LNaHS处理组MMP与对照组比较差异均无统计学意义。10和100μmol／LNaHS＋100μmoL／LH202处理组心肌细胞的凋亡率分别为（36．7±4．9）％和（20．1±1．9）％均显著低于100μmoULH20：模型组[（48．9±5．6）％]，P均〈0．05。结论H2s可对抗H2O2诱导的心肌细胞氧化损伤，其机制可能与减少ROS生成、升高MMP以及降低心肌细胞凋亡率有关。