基于COⅠ序列分析东海区四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)的种群遗传结构

采用COⅠ基因片段研究了东海区象山(XS)、乐清(YQ)和宁德(ND)三个四指马鲅群体的遗传多样性和种群遗传结构。在90个四指马鲅个体中,共检出单倍型13个,包括变异位点23个,其中简约信息位点14个。在三个种群中,YQ群体具有最高的单倍型多样性和核苷酸多样性水平,但整体上,三个群体的遗传变异水平均比较低。中性检验结果表明,三个群体内部在分子水平可能存在自然选择作用。NJ系统发生分析发现,YQ部分单倍型与XS和ND群体聚在一起,而与另一部分YQ群体遗传分化较大。AMOVA分析显示,遗传差异主要来自于群体内部(79.66%)。

急性离水操作胁迫对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼组织结构和氧化应激的影响

为探究急性离水操作胁迫对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼组织结构和氧化应激的影响,本研究通过组织切片和酶活性测定来观察及检测鳃和肌肉显微结构的变化、抗氧化酶活性以及Na^+-K^+-ATP酶活性,以探究四指马鲅应激反应规律。结果显示,急性离水操作胁迫2 h后,鳃小片、扁平上皮细胞以及线粒体丰富细胞都出现不同程度的损伤;肌肉从肌纤维变性、肌纤维束之间的间隙增宽、空泡化至肌肉组织整体失去固有形态,并且呈逐渐分解的趋势;超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)有相同的变化趋势,胁迫后的2 h显著下降(P<0.05),但12 h时则升至最高值。过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)水平在处理后2 h无显著变化(P>0.05),之后升高,直到12 h达到峰值。丙二醛(MDA)含量在胁迫后的2 h无显著差异(P>0.05),直到6 h达到峰值。SOD和CAT活性在处理24 h后显著低于处理前,其他酶变化不显著。Na^+-K^+-ATP酶活性在处理后2 h显著升高(P<0.05),12 h达到峰值,24 h恢复到处理前水平。本研究表明,操作胁迫会对鳃和肌肉的组织结构造成损伤,而且随时间持续,损伤呈现加重趋势;肌肉抗氧化酶系统在受到氧化压力2 h后才启动,处理后12 h肌肉受到的氧化压力最大,抗氧化酶活性最强;在受到外界刺激时,SOD和GSH之间可能存在协同作用;MDA可以作为四指马鲅氧化损伤的快速响应生物标记物。

四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)消化系统胚后发育组织学观察

运用组织学切片技术研究四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)出膜后1–30 d(Day after hatching,DAH)仔鱼的消化系统形态和结构的变化。结果显示,在温度29–32℃、盐度25–28、溶氧4.80–5.5 mg/L、p H 8.0–8.3条件下,1 DAH仔鱼消化管尚未分化,由紧贴腹壁和卵黄囊的肠管组成。卵黄囊在3 DAH时完全吸收完毕,仔鱼开口摄食,消化管也与外界相通,此后逐渐分化出食道、胃部和肠道,一定程度上能自主消化吸收食物维持自身生长,逐渐从内源性营养期过渡为外源性营养期。15 DAH时出现幽门盲囊和胃腺,消化道结构和功能成分进一步发育完善,消化能力显著提高,30 DAH仔鱼消化道具备与成体相似的结构和功能。肝脏和胰腺分别在2 DAH和5 DAH时分化,随着仔鱼的生长而快速发育,至30 DAH时具备与成体相似的结构和功能。四指马鲅消化系统的发育表现为结构与功能密切联系且逐渐发育成熟的特点。本研究根据四指马鲅消化系统的发育特点讨论了育苗过程中的三大危险期并提出应对措施。

盐度对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼生长及其鳃丝Na^+/K^+-ATP酶的影响

采用盐度渐变的方法,研究了盐度2、10、18、26、34共5个梯度对四指马鲅幼鱼(7.82±0.43 g)生长及其鳃丝Na+/K+-ATP酶的影响。结果表明,盐度对四指马鲅幼鱼的生长和存活均有不同程度的影响。在实验盐度范围内,随着盐度的升高,四指马鲅幼鱼的最终体重、特定增长率(SGR)、日增重(DWG)、增重率(GBW)和增长率(GBL)均出现逐渐降低的趋势,且部分盐度组间差异显著(P<0.05),其中上述各项指标中,盐度2组均最高,与盐度10组差异不显著(P>0.05),而与盐度18、26、34组存在显著性差异(P<0.05),盐度34组显著低于其他盐度组(P<0.05);幼鱼的饲料系数随盐度升高逐渐增大,且部分盐度组间差异显著(P<0.05)。在成活率方面,除盐度34组的成活率为72.2%,显著低于其他盐度组外(P<0.05),其他各盐度组成活率均达到90%以上。盐度对四指马鲅幼鱼鳃丝Na+/K+-ATP酶也存在一定影响,经过3 d的盐度驯化后,实验第0天部分盐度组幼鱼鳃丝Na+/K+-ATP酶的活力有显著差异,其中盐度34组显著高于其他组(P<0.05),盐度18、26组显著低于其他组(P<0.05)。实验开始后到第10天,盐度2、10、34组幼鱼鳃丝Na+/K+-ATP酶的活力有所降低,此后,各盐度组幼鱼鳃丝Na+/K+-ATP酶的活力趋于稳定。经过30d的养殖发现,盐度34组幼鱼鳃丝Na+/K+-ATP酶的活力最高,显著高于其他组(P<0.05),而盐度2、10组幼鱼鳃丝Na+/K+-ATP酶的活力略低于盐度18、26组,但差异并不显著(P>0.05)。从以上结果可见,盐度对四指马鲅幼鱼的生长和鳃丝Na+/K+-ATP酶活力有一定影响。

四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)受精卵和仔鱼对不同盐度的耐受性

本文观察了11个盐度梯度（5、7、9、11、13、15、20、25、28、30、35、40、45，28作为对照组）下四指马鲅（Eleutheronematetradactylurn）不同发育阶段的受精卵的沉浮性质和孵化情况以及初孵仔鱼在不投饵条件下的存活情况，并测定不投饵存活系数（survivalactivityin．dex，SAI）。结果表明：第一次分裂前和原肠期两发育阶段的受精卵在盐度低于25的海水中均呈沉性，盐度为25时则悬浮在水层中部，盐度28及以上呈浮性；第一次分裂前的受精卵对盐度改变较敏感，而原肠期受精卵对盐度胁迫产生一定的耐受性；盐度的改变对初孵仔鱼的存活率和SAI值影响比较大。综合分析孵化率、仔鱼畸形率以及SAI值，推测四指马鲅受精卵孵化的适宜盐度范围为25—35，最适孵化盐度为35。

MS-222和丁香酚胁迫对四指马鲅幼鱼鳃及肝脏组织微观结构的影响

【目的】探究不同质量浓度的MS-222和丁香酚胁迫对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼鳃和肝脏组织损伤的影响。【方法】设置7个浓度的MS-222(20、30、35、40、45、50、60 mg/L)和7个浓度的丁香酚(5、10、20、25、30、40、50 mg/L),分析不同处理对平均全长4.5(±0.5)cm、平均体质量1.5(±0.5)g的四指马鲅幼鱼的静水麻醉效应。【结果】当MS-222浓度不小于35 mg/L时,麻醉467 s后幼鱼开始出现应激反应;浓度为50 mg/L时可将部分幼鱼诱导进入麻醉期,浓度为60 mg/L时可在293 s后将全部幼鱼诱导进入麻醉期。丁香酚浓度不小于25 mg/L时,麻醉291 s后幼鱼开始出现应激反应;浓度为30 mg/L时可将部分幼鱼诱导进入麻醉期;浓度为40、50 mg/L时,分别可以在194 s和102 s将全部幼鱼诱导进入麻醉期。随着MS-222和丁香酚浓度的升高,幼鱼进入同一麻醉时期的时间显著缩短(P<0.05),高浓度下四指马鲅幼鱼进入麻醉时期的时间过快,超过耐受值可能对鱼体产生一定毒害作用,导致鱼体死亡。观察幼鱼组织病理切片发现,随着MS-222和丁香酚浓度的升高,幼鱼肝细胞出现空泡,排列紊乱,核内可见核溶解,肝板结构不清;鳃小片弯曲,末端肿大,严重者可胀破、脱落。【结论】适度的麻醉剂量可以降低鱼体对外界环境的应激反应,减少耗氧,不同浓度的MS-222和丁香酚(5 mg/L除外)均可在3 min内对四指马鲅幼鱼产生镇静作用,当2种麻醉剂浓度过高、麻醉时间过长以及幼鱼长时间处于应激状态时,会出现死亡现象。

四指马鲅热休克蛋白70基因(HSP70)表达分析

四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)为名贵海产鱼类,因其对应激反应强烈,易在运输过程中受损。热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)作为一种热休克蛋白(heat shock protein,HSP),是HSP家族中最重要的一员,对细胞蛋白质折叠过程及细胞对压力的适应起着重要作用。比较四指马鲅仔鱼和幼鱼在运输胁迫下的抗氧化能力和应激反应,进行幼鱼鳃组织学观察,探究热休克蛋白HSP70基因的组织表达模式以及在仔鱼和幼鱼中的表达差异,研究验证了运输胁迫下仔鱼和幼鱼阶段四指马鲅的抗氧化能力和HSP70表达呈现显著差异,并探讨了其作为评估抗应激反应及养殖管理效果的生物指标的潜力。

基于转录组测序分析溶解氧对四指马鲅幼鱼鳃组织的影响

【目的】基于转录组测序分析溶解氧对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼鳃组织的影响,探究四指马鲅应对低氧胁迫的适应机制,为四指马鲅的抗逆性研究提供参考依据。【方法】以四指马鲅幼鱼为试验材料,设3种溶解氧含量处理,常氧组(CG)6.33±0.15mg/L、中度低氧组(OC4)3.99±0.18mg/L和重度低氧组(OC2)2.05±0.15mg/L,处理29 h,采集鳃组织进行转录组测序,利用DEGseq筛选不同比较组的差异表达基因(DEGs),使用GOseq进行GO功能注释分析,利用KOBAS进行KEGG信号通路富集分析,采用STEM对DEGs进行表达趋势分析。【结果】OC4 vs CG比较组有86个DEGs,其中28个上调表达,58个下调表达;OC2 vs CG比较组有2018个DEGs,其中740个上调表达,1278个下调表达;OC4vsOC2比较组有171个DEGs,其中68个上调表达,103个下调表达。GO功能注释分析结果显示,DEGs主要涉及代谢过程、有机物生物合成、细胞氧化还原平衡、细胞内、染色质、核糖体结构成分和催化活性等功能条目。KEGG信号通路富集分析结果显示,DEGs主要富集在蛋白酶体、DNA复制、脂肪酸降解、磷酸戊糖途径、氧化磷酸化、谷胱甘肽代谢、赖氨酸降解和核糖体生物发生等信号通路;其中pac1、lsm7、mcm6、mcm2和mdm2等基因富集在蛋白酶体、剪接体、DNA复制和细胞周期等信号通路,与四指马鲅幼鱼鳃组织蛋白合成有关,随着溶解氧含量下降,其表达量呈下降趋势;shmt2、hsd17b10、sucla2和glo1等基因富集在磷酸戊糖途径信号通路,与四指马鲅幼鱼鳃组织能量代谢有关。【结论】四指马鲅幼鱼鳃组织蛋白质合成能力和能量代谢活动均随着溶解氧含量下降而下降,溶解氧含量下降显著影响细胞周期、DNA复制、脂肪酸降解和糖代谢等信号通路。

急性低氧胁迫对四指马鲅幼鱼脾脏、心脏组织结构的影响

【目的】探究急性低氧对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼存活及其脾脏和心脏组织结构的影响,为四指马鲅养殖生产提供技术支持和理论参考。【方法】往水中充入氮气,使水中氧气快速溢出降低水体溶解氧的含量。设置常氧组(6.33±0.15 mg/L)、中度低氧组(3.99±0.18 mg/L)和重度低氧组(2.05±0.15 mg/L)不同溶氧水平处理,每个处理组设3个平行,试验过程中关闭流水,用溶氧测量仪实时监测水体溶氧水平,通过调节充气阀大小保持相应的溶氧水平。采用石蜡包埋、切片、苏木精-伊红(HE)染色的方法观察四指马鲅幼鱼心脏和脾脏的组织结构变化情况。【结果】死亡率方面,常氧组的四指马鲅幼鱼无死亡现象;中度低氧组和重度低氧组幼鱼胁迫23 h的死亡率为10.0%~13.3%,26 h为30.0%~40.0%,29 h为43.3%~53.3%。脾脏组织结构方面,与常氧组相比,中度低氧组幼鱼的白髓增多,淋巴细胞数量增多,周围红髓稀散分布,黑素巨噬细胞数量减少;重度低氧组幼鱼的红髓面积扩大,白髓面积减小,淋巴细胞数量减少,黑色素巨噬细胞极少出现;心脏组织结构方面,中度低氧组幼鱼心脏组织致密层变薄,海绵层心肌纤维变细,间距变宽,出现部分心肌纤维断裂现象;重度低氧组幼鱼致密层变薄程度加大,海绵层心肌纤维变细,间质空间相比低氧组扩张程度加重,部分心肌细胞破裂,细胞核突出,心肌纤维断裂,排列紊乱。【结论】急性低氧胁迫会影响四指马鲅幼鱼的存活率,溶氧水平越低,死亡率越高,组织结构损伤程度随低氧水平而加重。

不同温度下四指马鲅幼鱼耗氧率及其窒息点研究

为探讨四指马鲅幼鱼(Eleutheronema tetradactylum)在不同水温条件下耗氧率和窒息点的变化规律,试验比较了不同温度(22、27、32℃)对平均全长(4.5±0.5)cm、平均体质量(1.5±0.5)g四指马鲅幼鱼耗氧的影响。试验结果表明:1)在本试验条件下,水体温度越高,幼鱼全部死亡的时间越短,水体中所含溶解氧(DO)的质量浓度越高,22℃窒息点为1.39 mg/L,27℃窒息点为1.54 mg/L,32℃窒息点为1.76 mg/L;2)各温度组中幼鱼的耗氧率随试验时间的延长呈下降趋势,且温度越高,其耗氧率下降速度越快,当耗氧率从试验之初的1.418、2.346、4.243 mg/(g·h)下降到0.4~0.5 mg/(g·h)时,幼鱼全部死亡,不同温度组变化减慢,相邻观测时间点浓度差异不显著(P>0.05),对照组幼鱼存活率为100%;3)试验过程中,当22、27、32℃温度组的DO含量分别为2.53、2.90、3.10 mg/L时,幼鱼开始出现乱窜、焦躁不安、偶尔跃出水面以及咧鳃等现象,随着试验持续进行,幼鱼跃出水面的频次增加,鳃盖振动幅度随之增加;其剧烈应激后静卧于水底、咧鳃、抽搐,然后窒息死亡。

广东池塘培育四指马鲅亲鱼初次性成熟和苗种规模化繁育技术研究

于2015年6月~9月在广东珠海对人工孵化和培育的2龄四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)亲鱼的初次性成熟和产卵情况以及苗种规模化全人工繁育技术进行了系统的观察和研究。结果显示,实验期间培育亲鱼2 000余尾,成熟率93%以上。成熟亲鱼的体质量雌雄之间差异较大,雌鱼性腺指数(GSI)为1.03%~6.05%,雄鱼GSI为0.26%~1.76%。雌鱼产卵类型为一年产卵1次,分批成熟、分批产卵,初次性成熟的产卵期从2015年6月13日~9月30日。共计产卵75.0×106粒,受精率为72%~95%,胚胎发育在盐度27~28.8、温度29~31℃、p H 8.1~8.3条件下历时13 h 52 min,孵化率为58%~95%。仔鱼在室内培育,投喂小球藻和轮虫,5~7 d后转移到室外土池进行培育,7 d后投喂小球藻、轮虫、枝角类和桡足类幼体。第25天起投喂卤虫无节幼体,第30天起投喂粉状配合饲料并逐渐过渡到投喂人工颗粒饲料。从2015年7月23日开始至9月30日累计培育出子二代苗15.0×106尾,平均成活率为25.0%。综合亲鱼产卵和幼苗育成情况,认为该鱼全人工繁育的技术关键在于如何培育优质的亲鱼以及育苗过程中水质的控制和适口饵料选择及其适时更换。

运输胁迫对四指马鲅幼鱼肝脏、鳃和脾脏组织结构的影响

【目的】探究运输胁迫对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼肝脏、鳃、脾脏组织结构的影响,提高种苗运输存活率,为其规模化养殖提供技术支持。【方法】以四指马鲅幼鱼为研究对象,分别设对照组(未运输)、混合组(运输,同时添加抗应激混合物)和空白组(运输,不添加任何抗应激剂),抗应激剂为维生素C∶谷氨酰胺=1∶1。混合组和空白组幼鱼经6 h运输后分别取样(肝脏、鳃和脾脏),经石蜡切片和HE染色,显微镜下观察测定肝脏、鳃和脾脏的细胞形态、组织结构、生活及生理状态。【结果】对照组幼鱼表现正常,未出现死亡现象,混合组幼鱼的累计死亡率为12.5%,空白组的累计死亡达27.5%。对照组幼鱼的各组织均呈正常形态;混合组幼鱼的肝脏部分区域细胞排列疏松,肝小板结构不清晰;空白组幼鱼的肝脏组织整体失去固有形态,肝小板结构消失不见,大部分细胞核变性呈椭圆形或纺锤形。混合组幼鱼的鳃丝排列混乱,少数鳃小片末端或整体肿胀,血窦内红细胞出现部分堆积现象,线粒体丰富细胞体积变大;空白组的鳃小片整体肿胀,血窦加粗,部分鳃小片因红细胞过多而胀破,线粒体丰富细胞体积变大且数量增多。混合组幼鱼的脾脏白髓区域相对增大,黑色素—巨噬细胞中心数量及大小均有所增加;空白组幼鱼的脾脏组织红髓区域占据大部分,白髓区域相对较少,呈零散分布,巨噬细胞中心减小。【结论】运输胁迫导致四指马鲅幼鱼肝脏、鳃及脾脏组织损伤,抗应激剂混合物虽然在一定程度上起到缓解作用,但并不能完全消除。

急性操作胁迫对四指马鲅幼鱼肝脏组织结构和氧化应激的影响

为探究急性操作胁迫对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼肝脏组织结构以及氧化应激的影响,该研究在离水操作胁迫后不同时间取样,观察肝脏显微结构的变化,并检测相关抗氧化酶活性。结果显示,随着离水胁迫时间的延长,肝脏组织损伤程度呈现先上升后下降的趋势,胁迫第24小时肝脏基本结构与对照组相似。超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)有相同的变化趋势,胁迫后第2小时显著增加(P<0.05)并达到最高值,然后开始下降,最后其值显著低于对照组(P<0.05);丙二醛(MDA)含量在胁迫第2~第12小时呈现先升高后下降的变化趋势,第12小时后又有所上升;还原型谷胱甘肽(GSH)含量胁迫2 h没有显著变化(P>0.05),之后呈先下降后上升的趋势,但其含量仍显著低于对照组(P<0.05);总抗氧化能力(T-AOC)胁迫第2小时显著上升(P<0.05),之后下降,实验结束时显著低于对照组(P<0.05)。结果表明离水操作胁迫对四指马鲅幼鱼肝脏组织结构以及抗氧化酶产生一定的影响,但随着胁迫时间的延长,其组织结构以及抗氧化能力都有一定的恢复趋势。

一龄四指马鲅形态性状对体重的影响分析

在人工养殖的一龄四指马鲅中随机选取236尾,测量其全长、体长、体重、体高、体厚等11个表型性状,以表型性状为自变量,采用通径分析计算体重为因变量的决定系数、通径系数及复相关指数。然后比较各个表型性状对体重的影响大小,确定各表型性状中影响一龄四指马鲅体重的主要外部形态性状,为四指马鲅选育提供理论依据和测量指标。结果表明:体重与所测定的表型性状的相关系数都达到了其显著水平(P<0.01);叉长对体重的直接影响(0.696)最大和决定程度(48.44%)最高,是影响体重的主要因素。体重与实验研究中所选表型性状的复相关系数为R2=0.909,表明实验所选性状是主要影响体重的表型性状。以体高、体厚和叉长为自变量,利用逐步回归分析方法,建立估计体重的多元回归方程为:y=-96.045+6.231x3+7.636x8+9.609x7。

急性低温胁迫对四指马鲅幼鱼肝脏、肌肉以及鳃组织结构的影响

为探究急性低温胁迫对四指马鲅Eleutheronematetradactylum幼鱼肝脏、肌肉以及鳃组织结构的影响。该研究设置了常温(27±0.5℃)组、20℃组以及15℃组共三个温度梯度进行试验,以常温组作为对照,在试验进行的2 h、6 h以及12 h分别采集肝脏、肌肉以及鳃样品进行观察和测定。结果显示:随着低温处理时间的延长, 20℃组的肝脏细胞空泡结构呈增多,细胞核偏离,染色变浅趋势;肌纤维出现弯曲现象,肌纤维之间与内部均出现较大间隙;线粒体丰富细胞数目增多,鳃小片末端轻微的膨大到鳃小片整体水肿且严重弯曲,血管以及血窦内出现大量的红细胞,部分鳃小片因红细胞过多而涨破;同时,15℃组肝脏细胞排列混乱,肝板结构不清晰,细胞核溶解,肝脏整体失去固有形态。肌纤维间隙增大,部分断裂直至肌纤维之间与内部均严重开裂,部分肌纤维溶解并暴露出细胞核。鳃小片表皮出现轻微的脱落,少部分鳃小片胀大到其吸水涨破,鳃小片基本形态不可见。该研究结果为优化四指马鲅养殖生产温控管理措施,提高越冬成活率提供参考资料。

多鳞四指马鲅和四指马鲅种群遗传特征的研究

为了探明中国东海和南海多鳞四指马鲅和四指马鲅的遗传多样性及种群遗传结构特征。采用线粒体COI序列和D-loop序列作为分子标记对福州、泉州和珠海的多鳞四指马鲅及徐闻的四指马鲅进行了分析。研究结果显示徐闻的四指马鲅与NCBI数据库下载的马来西亚群体的亲缘关系近。多鳞四指马鲅COI序列的单倍型多样性和核苷酸多样性分别为0.894和0.002,D-loop序列的单倍型多样性和核苷酸多样性分别为0.994和0.041。四指马鲅COI序列的单倍型多样性和核苷酸多样性分别为0.901和0.002,D-loop序列的单倍型多样性和核苷酸多样性分别为0.998和0.012。AMOVA结果显示多鳞四指马鲅的遗传差异主要来自群体内而不是群体间。两两群体的遗传分化系数显示中国沿海的多鳞四指马鲅群体无显著遗传分化,为单一随机交配种群,但与四指马鲅有显著遗传差异。基于邻接法构建的系统发育树发现四指马鲅和多鳞四指马鲅的可被本研究的2种分子标记(COI序列和D-loop序列)区分。基于COI序列的中性检验和核苷酸错配分布发现,多鳞四指马鲅在更新世经历过种群快速扩张,群体扩张时间可能在(2.4~7.2)万年前。综上,中国东海和南海的多鳞四指马鲅为单一种群,渔业资源管理时需作为一个单元进行管理。

光周期对四指马鲅视网膜结构和视蛋白表达的影响及其生物信息学分析

本实验运用组织学方法对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)视网膜在不同光照周期下组织结构及细胞超微结构的变化进行研究,并对四指马鲅RH1(Rhodopsin)、LWS(Long wave sensitive opsin)、RH2(Rhodopsin-like)、SWS2(Short wave sensitive opsin 2)视蛋白基因序列和氨基酸序列进行生物信息学分析,同时运用荧光定量PCR研究其在不同光照周期下表达量的变化,为该鱼种苗生产和养殖技术提供参考。实验设置昼夜比0 h∶24 h及24 h∶0 h两个实验组和12 h∶12 h对照组,在光照强度为(500±100)lux、水温25℃、盐度5的条件下养殖60 d,并在第30天和第60天时摘取视网膜做组织学切片、超薄切片和荧光定量PCR。显微结构显示:在不同光周期下,四指马鲅视网膜的结构完整、无明显异常。超微结构显示:在12 h∶12 h下,视锥和视杆的外节和内节均结构完整且排列整齐。在0 h∶24 h下,视锥和视杆外节膜盘结构较为完整,但排列较混乱,内节未见明显异常。但在24 h∶0 h下,视锥和视杆的外节膜盘结构受一定程度的损伤。生物信息学分析结果显示:RH1、LWS、RH2、SWS2视蛋白的开放阅读框分别包含1059 bp、1074 bp、1059 bp、1056 bp,分别编码352、357、352、351个氨基酸,且均具有7 tm跨膜结构域,氨基酸位点分别为54~306、57~319、62~314、60~312。荧光定量PCR结果显示:在第30天时,4种视蛋白在24 h∶0h的表达量显著高于0 h∶24 h和12 h∶12 h的表达量。视蛋白表达量在持续的光照条件下显著增加,是机体对周围光环境的一种适应性变化。随着饲养时间的延长,从总体趋势看,RH1、RH2、SWS2和LWS的表达量在0 h∶24 h和12 h∶12 h条件下增加,而在连续光照条件下,其表达量反而是降低的。而表达量的降低有可能是机体为了维持正常的昼夜节律而做出的一种代偿性的减少。因此,在实际育苗生产过程中,应避免入射光对四指马鲅的长时间照射。

四指马鲅胚胎发育观察

利用人工培育的2龄四指马鲅（Eleutheronema tetradactylum）亲鱼自然产卵受精而获得的受精卵在实验室中孵化和培育，对受精卵胚胎发育到仔鱼孵出的全过程进行详细的观察记录．结果表明：四指马鲅受精卵呈圆球形，卵膜光滑，单油球．平均卵径675.78μm，油球平均直径258.46μm．在水温为31-33℃，盐度为27.50-28.00，pH值为8.2条件下，胚胎发育用时13 h 52 min，可分为卵裂、囊胚、原肠胚、胚体形成、器官分化和孵化6个阶段，初孵仔鱼全长1.46±0.25 mm，3 DAH仔鱼全长2.42±0.18 mm，口和肛门张开，仔鱼开口摄食．

不同盐度对四指马鲅幼鱼存活及鳃组织形态变化的影响

【目的】探究不同盐度对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼存活与鳃组织结构变化的影响,为四指马鲅苗种生产提供有效的技术支持和理论参考。【方法】试验设0、5‰、10‰(对照)、15‰和20‰等5个盐度组,将暂养于盐度为10‰水体中的四指马鲅幼鱼直接放入其他盐度水体中,试验第15 d时进行活体鳃组织取样,采用组织学方法对不同盐度条件下四指马鲅幼鱼的鳃组织结构进行研究。【结果】盐度为0时,四指马鲅幼鱼在12 h之内全部死亡,5‰盐度组幼鱼死亡率成为6.6%,10‰对照组幼鱼无死亡,15‰和20‰盐度组幼鱼死亡率分别为33.3%和60.0%,表明与高盐环境相比,四指马鲅幼鱼更能适应低盐环境,但不能在急性淡水胁迫条件下存活。显微结构观察结果显示,10‰盐度条件下,四指马鲅幼鱼的鳃小片排列紧密,线粒体丰富细胞主要分布在鳃小片基部。随着盐度增加,鳃小片的长度和间距减小,而鳃小片宽度增加。其中,5‰盐度条件下鳃小片的长度、宽度和间距分别为45.19±3.18μm、5.32±1.02μm和17.65±1.43μm,20‰盐度条件下鳃小片的长度、宽度和间距分别为36.67±3.81μm、8.78±2.22μm和11.56±3.81μm,差异均达显著水平(P<0.05)。20‰盐度条件下,鳃小片的远端可观察到线粒体丰富细胞,扁平上皮细胞出现一定程度的脱落或分离现象。扫描电镜观察结果显示,线粒体丰富细胞的顶膜结构分为Ⅰ型(顶膜向内凹陷)和Ⅱ型(顶膜向外凸起)2种类型。5‰盐度条件下,线粒体丰富细胞出现2种类型,主要以Ⅱ型为主,顶膜开口较大,表面有大量微绒毛,扁平上皮细胞表面有隆起的微嵴,形成指纹样回路;10‰盐度条件下,出现Ⅰ型线粒体丰富细胞,扁平上皮细胞表面微嵴形态不规则,细胞间的界限不明显;15‰和20‰盐度条件下,均以Ⅰ型结构为主,且随着盐度增加,顶膜加深,线粒体丰富细胞数量增多,扁平上皮细胞表面微嵴隆起幅度小,指纹样的回路不明显。【结论】当水体渗透压改变时,四指马鲅幼鱼存活率及鳃小片上细胞的数量分布和形态均发生显著变化,鳃组织结构的变化与其所处的环境盐度条件有关。

四指马鲅头肾和脾脏组织学研究

采用常规石蜡组织切片和HE染色方法研究四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)头肾和脾脏的组织结构。结果显示:头肾位于背部脊椎左右两侧,呈深褐色,实质柔软而表面粗糙。组织学结构特征:最外层为胶原纤维,实质无肾单位而由大量淋巴细胞、血细胞、粒细胞和巨噬细胞填充,黑色素-巨噬细胞中心(melano-macrophage centers,MC)不明显。脾脏衬贴于胃部后端与肠弯曲交界处的系膜内,棕色,体积较大,呈"三角形";组织最外层有被膜,并形成明显的脾小梁结构,实质由红髓和白髓组成,红髓占实质大部分,分布密集由血细胞连接成脾索,内部含丰富的脾血窦,MC密集分布;白髓由大量淋巴细胞填充,中央有动脉血管穿过。结论表明四指马鲅头肾和脾脏是典型的造血、免疫器官。