转染Elf5基因的人卵巢癌干细胞增殖、侵袭能力及凋亡变化

目的观察转染Elf5基因的人卵巢癌干细胞增殖、侵袭能力及凋亡变化。方法将目的基因Elf5+EGFP克隆到载体pc DNA3.1中,构建重组质粒pc DNA3.1-Elf5+EGFP,转入感受态细胞,挑选阳性克隆菌落,大量抽提质粒。培养人卵巢癌干细胞并分为重组质粒组、空质粒组、空白对照组。重组质粒组转染pc DNA3.1-Elf5+EGFP真核表达载体,空质粒组转染pc DNA3.1-EGFP空载质粒,空白对照组不进行转染。采用Western blotting法检测Elf5蛋白。分别于转染后1、2、3、4、5、6 d采用MTT法检测细胞增殖能力;转染24 h后采用侵袭小室检测细胞侵袭能力并计算穿膜细胞数;转染24 h后流式细胞术检测不同周期细胞及凋亡细胞。结果成功构建了pc DNA3.1-Elf5+EGFP真核细胞表达载体,重组质粒组细胞中Elf5蛋白稳定表达。转染后1、2、3、4、5、6 d重组质粒组细胞增殖能力低于空白对照组和空质粒组(P均<0.05)。重组质粒组穿膜细胞数少于空质粒组、空白对照组(P均<0.05)。重组质粒组G_0/G_1期细胞百分比高于空质粒组、空白对照组(P均<0.05)。重组质粒组细胞凋亡率高于空质粒组、空白对照组(P均<0.05)。结论转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖、侵袭能力受到抑制,细胞凋亡增多。

ELF5基因对人卵巢癌细胞侵袭转移和大鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的探讨ELF5基因对人卵巢癌细胞侵袭转移和大鼠移植瘤生长的抑制作用以及可能的机制。方法体外实验:人卵巢癌细胞随机分为重组质粒组、空质粒组、未经转染组,重组质粒组、空质粒组分别转染构建好的pcDNA3.1-ELF5+EGFP真核表达载体、空载质粒pcDNA3.1-EGFP,未经转染组未经任何转染。Q-PCR法检测各组ELF5 mRNA的相对表达量,Western blotting法检测基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9蛋白的相对表达量;Traswell试验评价ELF5对卵巢癌细胞侵袭转移的影响。体内试验:建立人卵巢癌NOD/SCID鼠左前肢腋下移植瘤模型,应用随机数字表法将大鼠分为3组,即重组质粒大鼠组(转染pcDNA3.1-ELF5+EGFP的人卵巢癌细胞)、空质粒大鼠组(转染空载质粒的人卵巢癌细胞)、未经转染大鼠组(未经转染的人卵巢癌细胞),将处于对数生长期的3组细胞2×104/m L接种于NOD/SCID小鼠左前肢腋下。对比3组小鼠的移植瘤质量和体积,计算各组小鼠肿瘤抑制率(首先对转移瘤行HE染色进行病理组织学检查以确定其致瘤性)。Western blotting法检测3组NOD/SCID小鼠移植瘤组织中MMP-2及MMP-9蛋白的相对表达量。结果人卵巢癌细胞转染pcDNA3.1-ELF5+EGFP真核表达载体后,可稳定表达,且于72 h后转染率较高;与空质粒组和未经转染组比较,重组质粒组MMP-2及MMP-9蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。Transell试验中,重组质粒组穿膜细胞数少于空质粒组及未经转染组(P均<0.05)。重组质粒大鼠组抑瘤率达64.4%。重组质粒大鼠组与其余两组比较,其瘤组织中MMP-2及MMP-9蛋白相对表达量降低(P<0.05),而空质粒大鼠组和未经转染大鼠组比较,P均>0.05。结论 ELF5基因可能通过抑制MMP-2及MMP-9的表达而降低卵巢癌细胞的侵袭转移能力。

转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖、周期、凋亡及成瘤能力变化

目的观察转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖、周期、凋亡及成瘤能力变化。方法将人卵巢癌干细胞(具有CD133+、CD117+特征的人卵巢癌细胞株HO8910)分为重组质粒组、空质粒组和空白对照组,重组质粒组转染真核细胞表达载体pc DNA3.1-ELF5+EGFP,空质粒组转染空载质粒pc DNA3.1-EGFP,空白对照组不做转染;分别于培养24、48、72、96 h后采用CCK-8法观察细胞增殖能力,于培养48 h后采用流式细胞仪观察细胞周期分布情况、测算细胞凋亡率,于培养48 h后采用Western blotting法检测各组细胞中的p21、Caspase-3蛋白。将重组质粒组、空质粒组和空白对照组细胞分别接种于雌性裸鼠右腋窝皮下制作卵巢癌移植瘤,每组接种5只;待移植瘤形成后取肿瘤组织,测量肿瘤最大直径及质量,测算细胞凋亡率,检测细胞中的p21、Caspase-3蛋白。结果重组质粒组培养24、48、72、96 h后细胞增殖能力较空质粒组和空白对照组明显下降(P均<0.05)。重组质粒组中阻滞于G0/G1期的细胞比例、细胞凋亡率及细胞中p21、Caspase-3蛋白相对表达量均高于空质粒组和空白对照组(P均<0.05)。重组质粒组移植瘤最大直径和肿瘤质量小于空质粒组、空白对照组(P均<0.05)。重组质粒组移植瘤组织中细胞凋亡率及p21、Caspase-3蛋白相对表达量高于空质粒组和空白对照组(P均<0.05)。结论转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖受抑制、细胞周期阻滞、细胞凋亡增多、成瘤能力减弱,机制可能与p21、Caspase-3蛋白表达上调有关。

子宫内膜癌组织中Elf5的表达变化及意义

目的探讨Elf5在子宫内膜癌组织中的表达情况及其临床意义。方法选取子宫内膜癌组织84例份、子宫内膜不典型增生组织30例份和正常子宫内膜组织30例份,用免疫组化法检测Elf5在不同内膜组织中的表达情况,分析其与子宫内膜癌患者各临床病理指标的相关性;对所有子宫内膜癌患者进行术后随访,采用KaplanMeier进行生存分析,Cox比例风险回归模型进行子宫内膜癌多因素分析。结果 (1)子宫内膜癌组织Elf5阳性表达率低于正常子宫内膜组织及不典型增生子宫内膜组织(χ2分别为5.787、1.614,P均<0.05);(2)Elf5的表达与FIGO分期、病理分级、病理类型、淋巴结转移和肌层浸润深度有关(P均<0.05);(3)Kaplan-Meier生存分析显示,Elf5阴性表达患者的平均生存时间短于阳性表达患者(P<0.05);(4)Cox回归分析显示FIGO分期、病理分级、肌层浸润深度、淋巴结转移及Elf5与子宫内膜癌患者预后有关(P均<0.05),其中Elf5是子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中Elf5表达降低,其水平降低与子宫内膜癌发生发展及预后相关。

转染ELF5mRNA对子宫内膜癌细胞凋亡及周期的影响

目的:检测人子宫内膜癌Ishikawa细胞转染pc DNA3.1-ELF5+EGFP后ELF5基因的表达,并观察其对Ishikawa细胞凋亡情况及周期变化的影响。方法:通过脂质体介导的方法将pc DNA3.1-ELF5+EGFP真核细胞表达载体体外转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,设立实验组(转染pc DNA3.1-ELF5+EGFP真核载体)、空质粒组(转染pc DNA3.1-EGFP空载体)、空白对照组(未经转染的Ishikawa细胞)。体外实验:用qRT-PCR法检测子宫内膜癌Ishikawa细胞中ELF5mRNA的表达情况,MTT法检测ELF5mRNA对Ishikawa细胞增殖的影响,流式细胞仪检测三组细胞周期及凋亡情况,Western blot法检测三组肿瘤组织的细胞周期调控蛋白P21及凋亡调控因子Caspase-3表达情况的变化。体内实验:将三组细胞分别接种于NOD/SCID雌性裸鼠,观察肿瘤生长情况及测定成瘤能力,应用TUNEL法检测三组肿瘤组织细胞凋亡的情况,采用蛋白印迹法检测三组肿瘤组织的细胞周期调控蛋白P21及凋亡调控因子Caspase-3表达情况的变化。结果:重组质粒pc DNA3.1-ELF5+EGFP成功转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞;重组质粒组细胞ELF5mRNA的表达明显高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组各时间点的细胞增殖能力较较其他两组明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组G_0/G_1期的细胞比例均高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组细胞凋亡率分别与空质粒组及空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组细胞中P21及Caspase-3的表达明显高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。重组质粒组裸鼠体内的成瘤能力(瘤组织最大直径、重量)明显低于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组裸鼠体内瘤组织细胞凋亡率分别与空质粒组及空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);(9)重组质粒组裸鼠体内瘤组织P21及Caspase-3的表达明显高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:ELF5基因可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,将细胞周期阻滞于G_0/G_1期,并诱导其凋亡,其机制可能与P21及Caspase-3有关。

Elf5mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Elf5mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR技术检测49例卵巢上皮性癌、19例卵巢交界性上皮性肿瘤、31例卵巢良性上皮性肿瘤及40例正常卵巢组织中Elf5mRNA的表达,并分析Elf5mRNA与卵巢上皮性癌组各临床病理指标的相关性。结果Elf5mRNA在卵巢上皮性癌及卵巢交界性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率(分别为18.4%、36.8%)及表达水平(分别为0.28±0.04、0.52±0.08)均显著低于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织(分别为67.7%、72.5%和0.85±0.07、0.86±0.06,P<0.05);且Elf5mRNA在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率和表达水平与病理分期和淋巴结转移有明显的相关性(P<0.05)。结论 Elf5mRNA在卵巢上皮性癌组织中呈低表达,其不同程度的表达缺失与卵巢上皮性癌的发生、发展有关。