蛙类脑膜脓毒性伊丽莎白菌多克隆抗体的制备及应用

【目的】制备蛙类脑膜脓毒性伊丽莎白菌多克隆抗体,建立间接ELISA检测方法,进行病原菌在宿主体内的示踪研究,为病原菌的致病机理研究奠定基础。【方法】将分离自患歪头病的棘胸蛙的脑膜脓毒性伊丽莎白菌(Elizabethkingia meningosepticum)RsB1151018NA甲醛灭活后,免疫新西兰大白兔制备兔抗血清。通过优化反应条件,建立脑膜脓毒性伊丽莎白菌间接ELISA的检测方法;兔抗血清多克隆抗体采用Protein A亲和层析柱分离纯化,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记,标记后的抗体与感染RsB1151018NA的棘胸蛙不同脏器组织的冷冻切片反应,荧光显微镜观察,跟踪RsB1151018NA在棘胸蛙体内的迁移。【结果】试验结果表明,制备的兔抗棘胸蛙脑膜脓毒性伊丽莎白菌多克隆抗体血清效价为1∶5.12×10^(5),纯化后的抗体效价为1∶1.6×10^(4),且建立的间接ELISA方法检测脑膜脓毒性伊丽莎白菌具有高度特异性,与其他水产常见病原菌没有交叉反应,检测灵敏度为1.0×10^(4) CFU·mL^(-1)。脑膜脓毒性伊丽莎白菌在棘胸蛙体内随血液循环而分布至全身,可侵袭肌肉、肝脏、肾脏、脾脏、肠道、心脏、眼和脑等组织器官,肾脏、眼和脑感染程度最严重,推测这三个组织器官是其靶器官;创伤感染是可能的感染途径之一。【结论】建立的检测方法能够快速、灵敏、特异地检测脑膜脓毒性伊丽莎白菌,对蛙类歪头病的防控和早期诊断可提供理论参考依据;另外利用免疫荧光检测病原菌在宿主体内的迁移,研究病原的致病机理及发病过程等,能为防治药物的研发和防治方法的确定提供理论依据。

N-糖苷酶基因在脑膜炎败血伊丽莎白金菌临床分离株中的分布

N‐糖苷酶（PNGase）是真核生物中的常见酶，但在原核生物中极为罕见，目前仅报道在脑膜炎败血伊丽莎白金菌（EM）中存在。本文旨在检测 PNGase基因在EM临床分离株中的分布，为该菌的亚型分类及快速核酸分子检测提供依据，为研究PNGase在原核生物中的生物学功能奠定基础。于2010年7月～2012年12月收集浙江省3家三级甲等医院的65株EM临床分离株，提取细菌基因组 DNA ，利用16 S rRNA细菌通用引物、PNGase F和PNGase F‐Ⅱ特异性引物，进行组合聚合酶链反应（PCR）。阳性扩增产物测序后与美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库中已知EM序列比对确认。结果显示，PNGase阳性菌64株，总阳性率为98．5％；PNGase F和PNGase F‐Ⅱ共阳性菌39株，共阳性率为60．0％。 PNGase F阳性菌41株，阳性率为63．1％；PNGase F‐Ⅱ阳性菌62株，阳性率为95．4％，PNGase F‐Ⅱ阳性率高于 PNGase F （配对χ^2检验， P＜0．01），提示 PNGase可能对EM具有重要的生物学意义。结果还表明，本研究建立的组合PCR可应用于E M菌株中 PN G ase基因分型。

脑膜炎败血伊丽莎白菌耐药性的研究进展

脑膜炎败血伊丽莎白菌(Elizabethkingia meningoseptica,EM)可引起肺部感染、新生儿脑膜炎、菌血症等疾病,医院重症监护病房检出率较高,是院内感染的重要病原体之一。随着抗菌药物的广泛使用,EM对β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等临床常用抗菌药物呈多重耐药,给临床治疗带来极大困难。目前EM的耐药机制研究主要集中于产生药物灭活酶、药物作用靶位改变、外排泵、形成生物膜等方面。EM可同时携带多个耐药基因,如GOB、BlaB、CME等,从而介导多重耐药。本文就国内外EM耐药现状、耐药机制进行综述,旨在为预防和控制EM的医院内感染提供参考。

2012-2016年脑膜脓毒性伊丽莎白金菌临床分布及药敏结果

目的了解南京医科大学第一附属医院脑膜脓毒性伊丽莎白金菌(EM)的临床分布及耐药现状。方法采用回顾性调查方法收集该医院2012-2016年EM临床分离株及有关临床资料,数据用WHONET5.6软件进行统计分析。结果2012-2016年共分离不发酵糖革兰阴性杆菌10 301株,其中EM 27株,占0.26%;菌株主要分离自综合ICU(12株,占44.4%),标本以痰液为主(占77.8%);体外药敏试验结果表明EM对美罗培南耐药率达到100%;对甲氧苄啶-磺胺甲唑敏感率达到100%。结论 EM临床分离率5年间呈上升趋势,对多种抗生素呈现高耐药率,应引起临床足够重视。

1例脑室外引流术后颅内感染脑膜败血伊丽莎白菌的治疗分析

脑膜败血伊丽莎白菌是一种条件性致病菌,临床上院内获得性颅内感染病例少见。现回顾性分析1例由我院临床药师会诊并持续监护的罕见脑膜败血伊丽莎白菌颅内感染患者的药物治疗经过。临床药师通过用药分析,确保抗菌药物正确应用,提高合理用药水平。

脑膜败血伊丽莎白菌感染特征及耐药性分析

目的分析脑膜败血伊丽莎白菌的标本来源及耐药性,以指导临床合理使用抗菌药物。方法回顾性分析2011年10月-2012年12月医院临床分离出的脑膜败血伊丽莎白菌标本来源及耐药性,采用VITEK-2全自动细菌鉴定药敏分析仪进行细菌鉴定及药敏试验,根据CLSI标准用WHONET5.6分析菌株耐药率。结果 2011年10月-2012年12月检出36株脑膜败血伊丽莎白菌的标本来源以呼吸道为主32株,占88.9%,其次为血液及尿液,分别占8.3%及2.8%;脑膜败血伊丽莎白菌对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率最低,为13.9%,对哌拉西林/他唑巴坦、左氧氟沙星的耐药率,分别为33.3%、36.1%,对美罗培南和亚胺培南的耐药率分别达到58.3%和63.9%,对其他头孢菌素和氨基糖苷类药物的耐药率也均>60.0%。结论脑膜败血伊丽莎白菌的检出与患者气管插管高度相关,其对多种抗菌药物耐药,磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、哌拉西林/他唑巴坦、左氧氟沙星是治疗脑膜败血伊丽莎白菌感染的首选。

72株脑膜败血伊丽莎白菌的临床分布与耐药状况分析

目的调查72株脑膜败血伊丽莎白菌的临床分布及耐药现状,为临床合理应用抗菌药物和预防医院感染提供依据。方法采用Phoenix 100型全自动微生物分析系统对临床分离菌株进行菌种鉴定和药物敏感试验,应用WHONET 5.6软件对数据进行统计分析。结果 72株脑膜败血伊丽莎白菌主要分离自痰液标本(占91.6%),从监护病房分离到57株,占79.1%。药敏结果显示,对米诺环素的耐药率为0,其次为复方新诺明(11.8%)和哌拉西林/他唑巴坦(23.5%)。结论脑膜败血伊丽莎白菌除对米诺环素敏感,复方新诺明和哌拉西林/他唑巴坦较敏感外,对常用抗菌药物表现为严重耐药和多重耐药,应加强监测并根据药敏结果合理选用抗菌药物。

儿童脑膜败血伊丽莎白菌临床分布与耐药性分析

目的了解儿童脑膜败血伊丽莎白菌的临床分布及耐药性,为预防院内感染及临床合理用药提供参考依据。方法通过回顾性分析方法,对某医院临床分离出的脑膜败血伊丽莎白菌感染分布及其耐药性进行分析。结果该医院在两年间共检出脑膜败血伊丽莎白菌31例,其中67. 74%菌株分离自痰液标本。31例感染患者主要分布于儿童重症监护室(8例)、外科重症监护室(6例)和新生儿重症监护室(5例)。临床分离脑膜败血伊丽莎白菌对头孢类、碳氢霉烯类和单环内酰胺类药物表现为天然耐药,氨基糖苷类药物耐药率也高于80%;仅对氟喹诺酮类药物较敏感。结论脑膜败血伊丽莎白菌主要分离自痰液,对多数抗菌药物呈现耐药,应采取严格防控措施。