Ellman's法测定鲜、冻鱼糜的巯基含量

鱼糜在冷藏过程中容易发生变性从而影响其凝胶强度。为探究鲜、冻鱼糜变性程度,本文以鲜、冻鱼糜为原料,以巯基含量作为衡量蛋白变性指标,采用Ellman’s法对鱼糜巯基含量进行测定。通过单因素条件优化试验,得到总巯基最佳测定条件为含EDTA的稀释液,DTNB的添加量为100μL,反应时间为45 min,反应温度为25℃;游离巯基最佳测定条件为含EDTA的稀释液,DTNB的添加量为200μL,反应时间为60 min,反应温度为40℃。使用最优条件对鲜、冻鱼糜进行巯基含量测定,结果显示鲜鱼糜的总巯基和游离巯基的含量均高于冻鱼糜,这也在一定程度上证明了冻藏会导致鱼糜部分蛋白变性。

重组碱性成纤维细胞生长因子游离巯基的测定分析

建立了一种紫外-可见分光光度检测法,可以快速、简便、稳定地测定重组碱性成纤维细胞生长因子的游离巯基含量。将检测试剂、标准品及待测样品一起反应后,在412 nm波长处读取OD值,以标准品浓度为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘制标准曲线,根据标准曲线计算待测样品中游离巯基含量;同时对该方法进行了方法学验证。结果表明：该方法专属性强,游离巯基含量测定范围为20-80μg/ml,线性相关系数在0.999以上,回收率范围为91.7%-107.4%;而且该法精密度较好,精密度的变异系数范围为5%-8%。测得的分子表面和总游离巯基含量与理论一致,可用于蛋白质游离巯基检测,以监测分子结构的正确性与均一性。