CCL18-PITPNM3配体受体轴在头颈鳞状细胞癌侵袭转移中的作用及分子机制研究

目的探讨CCL18-PITPNM3(CC chemokine ligand 18-phosphatidylinositol transfer protein 3,CCL18-PITPNM3)配体受体轴在头颈鳞状细胞癌侵袭转移中的作用及其分子机制。方法采用人重组蛋白CCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞,siRNA下调PITPNM3的表达,通过CCK-8(cell counting kit-8)、平板克隆实验、流式周期检测生长增殖能力的变化,划痕愈合实验、Transwell侵袭小室实验检测体外迁移侵袭能力的改变,qRT-PCR、Western blot检测EMT分子标志物的表达情况。结果①rhCCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞后,细胞划痕愈合率增加,穿过Transwell聚碳酸酯膜的细胞明显增多,rhCCL18处理siRNA下调PITPNM3的Tu686、6-10B细胞,下调组细胞的迁移和侵袭能力较亲本细胞处理组明显减弱;②rhCCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞,mRNA水平E-cadherin表达降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin表达升高;蛋白质水平E-cadherin表达降低,Vimentin表达升高。下调两株细胞的PITPNM3表达后rhCCL18再次处理,E-cadherin下调和Vimentin、N-cadherin、Fibronectin上调均未显示出亲本细胞的明显趋势;③rhCCL18处理和下调PITPNM3对Tu686、6-10B 6组细胞的生存率、增殖及细胞周期无明显变化。结论CCL18-PITPNM3配体受体轴可促进头颈鳞状细胞癌的体外侵袭转移能力,可能与EMT转化相关。

Mfn-2沉默对肝癌细胞侵袭及PITPNM3表达的影响

目的探究Mfn-2沉默对肝癌细胞侵袭的影响及其潜在的分子机制。方法用Mfn-2-siRNA和siRNA转染SMMC-7721细胞,为Mfn-2-siRNA组和siRNA组,以未经转染的细胞作为对照组。转染48 h后,采用荧光倒置显微镜检测转染效率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SMMC-7721细胞中Mfn-2的表达情况,Transwell小室检测SMMC-7721细胞侵袭能力,免疫组化和Western blot检测SMMC-7721细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和磷脂酰肌醇转移蛋白3(PITPNM3)蛋白表达情况。结果荧光倒置显微镜检测结果显示,转染效率约85%;siRNA组SMMC-7721细胞中Mfn-2 mRNA的表达水平与对照组相比无显著差异(P>0.05),Mfn-2-siRNA组SMMC-7721细胞中Mfn-2 mRNA的表达水平显著低于对照组(P<0.05);siRNA组SMMC-7721细胞侵袭能力、以及MMP-2和PITPNM3的表达水平与对照组相比无显著差异(P>0.05),Mfn-2-siRNA组SMMC-7721细胞侵袭能力、以及MMP-2和PITPNM3的表达水平显著高于对照组(P<0.05)。结论 Mfn-2沉默能够增强肝癌细胞SMMC-7721的侵袭能力,推测这一作用是通过上调MMP-2和PITPNM3的表达水平实现的,上述结果为肝癌的治疗和靶向药物的开发提供了一定理论基础。

过表达线粒体融合蛋白2对膜相关磷脂酰肌醇转移蛋白3阳性的肝癌细胞株SMMC-7721侵袭和迁移的影响

目的观察过表达线粒体融合蛋白2(Mfn2)对膜相关磷脂酰肌醇转移蛋白3(PITPNM3)表达阳性肝癌细胞株侵袭和迁移的作用。方法以PITPNM3表达阳性乳腺癌细胞株McF-7作为阳性对照组,筛选PITPNM3表达阳性的SMMC-7721肝癌细胞株用于实验,使用CC型趋化因子配体18(CCL18),以20μg/L的CCL18浓度建立PITPNM3表达阳性肝癌细胞侵袭和迁移模型;于PITPNM3表达阳性肝癌细胞转染含Mfn2腺病毒载体36 h后,检测PITPNM3表达变化以及其对肝癌细胞侵袭和迁移的影响。应用SPSS 19.0统计软件进行分析。结果肝癌细胞株SMMC-7721中PITPNM3的mRNA呈高表达,相对表达量为3.4;HepG2中PITPNM3相对表达量为1.6,McF-7中PITPNM3相对表达量为4.5,SMMC-7721与HepG2比较,差异有统计学意义(t=3.653,P<0.05);SMMC-7721与McF-7比较,差异无统计学意义(t=0.915,P>0.05);20μg/L的CCL18可有效下调肝癌细胞株SMMC-7721中E-Cadherin表达,上调Snail和Vimentin的表达,促进SMMC-7721侵袭和迁移;Mfn-2可导致肝癌细胞株SMMC-7721的PITPNM3蛋白表达显著下降,侵袭和迁移能力受到抑制,但并未下调PITPNM3的mRNA量,实验组PITPNM3的mRNA相对表达量为0.903,阳性对照组PITPNM3的mRNA相对表达量为1.128,组间比较差异无统计学意义(t=0.577,P>0.05)。结论Mfn2可有效下调PITPNM3表达,抑制肝癌细胞株SMMC-7721侵袭和迁移的能力。

线粒体融合蛋白2与膜相关磷脂酰肌醇转移蛋白3表达的关系及其在肝细胞癌肝内转移中的作用

目的探讨肝细胞癌(HCC)中线粒体融合蛋白2(Mfn2)与膜相关磷脂酰肌醇转移蛋白3(PITPNM3)表达与HCC肝内转移率的关系。方法选取149例HCC患者手术切除标本和完整临床随访资料。取得的病理石蜡组织切片应用免疫组织化学方法分别进行Mfn2和PITPNM3染色,将免疫组织化学评分结果与患者的临床病理资料进行统计学分析。结果Mfn2表达阴性组中,54.55%患者PITPNM3表达为强阳性;而Mfn2表达强阳性组中,52.17%患者PITPNM3表达为阴性,说明Mfn2的表达与PITPNM3的表达呈负相关;PITPNM3强阳性表达的HCC患者56.34%发生肝内转移,且组织学分级高,临床分期晚,预后较差;Mfn2强阳性表达的HCC患者仅14.08%发生肝内转移,且组织学分级低,临床分期早,预后较好。结论Mfn2可能是抑制HCC发生肝内转移的关键蛋白。