共培养对小鼠胚胎内部活性氧含量影响

文章旨在研究输卵管上皮细胞共培养对小鼠胚胎内部活性氧含量影响,探索共培养克服胚胎发育阻滞机理。用小鼠输卵管上皮细胞对合子进行共培养,DCFDA测定胚胎内部H2O2含量,以外源性H2O2对输卵管上皮细胞和胚胎进行阴性对照,用Hochest 33342和PI染色检测细胞凋亡情况,以MTT法测定输卵管上皮细胞活力。结果表明,共培养能显著提高2-细胞发育率、降低胚胎内部H2O2含量(P<0.05),提高4-细胞率及降低胚胎内部H2O2含量(P>0.05)。外源性H2O2能够使合子凋亡甚至死亡,导致共培养细胞活力下降(P<0.05),未能显著地促进胚胎发育(P>0.05)。结果表明共培养能够降低胚胎细胞内部活性氧,克服胚胎发育阻滞,促进胚胎发育。

单细胞转录组测序分析人类胚胎发育阻滞的潜在机制

目的探讨胚胎发育阻滞的分子机制,为提高辅助生殖成功率提供新思路。方法单细胞转录组测序技术研究发育阻滞胚胎(包括体外受精和胞质内单精子注射过程)及对照组的转录组情况,利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)等生物信息学手段分析与胚胎阻滞相关的信号通路和关键基因。结果阻滞胚胎中与细胞分裂、细胞周期等相关的信号通路表达异常。与ICSI组相比,IVF组阻滞胚胎的细胞骨架、氧化磷酸化等通路表达异常。结论通过单细胞转录组测序技术分析阻滞胚胎转录组的结果说明细胞分裂、周期、代谢等通路可能影响胚胎正常发育,ICSI过程影响了线粒体功能、结构的变化。

不育症及自然流产、胚胎发育停滞与男性精液质量参数的相关性分析

目的探讨男性精液质量参数与自然流产、胚胎发育停滞及不育症的相关性。方法筛选80例自然流产或胚胎发育停滞患者男性配偶的精液标本与60例有正常生育史继发不育的患者男性配偶的精液标本的质量参数进行比较分析。结果自然流产、胚胎发育停滞(研究组)与继发不育症组(对照组)精液质量参数比较差异无统计学意义(P>0.05)。仅a级精子率有统计学意义(P=0.04<0.05)。结论精液质量、畸形精子率的高低可能是造成不育症的主要原因,但是否是影响自然流产、胚胎发育停滞的主要因素尚不明确,还需进一步的研究。

组蛋白精氨酸甲基化酶在人体外受精发育阻滞胚胎中的功能研究

目的探究组蛋白精氨酸甲基化酶(PRMT)在体外受精的人类胚胎发育阻滞中的作用。方法收集丢弃的70枚体外受精人类胚胎,选取12枚正常发育的胚胎为正常组,12枚发育阻滞胚胎为阻滞组。蛋白印迹和免疫荧光检测2组组蛋白精氨酸甲基化酶6(PRMT6)蛋白质水平,蛋白印迹检测组蛋白H3在精氨酸2的二甲基化(H3R2me2)和组蛋白H3在赖氨酸4的三甲基化(H3K4me3)水平。敲除46枚发育阻滞胚胎中的PRMT6(PRMT6敲除组,n=46),qPCR和蛋白印迹检测阻滞组和PRMT6敲除组的PRMT6 RNA、PRMT6蛋白、H3R2me2和H3K4me3水平,多能性标记Oct4、Nanog和Sox2,观察阻滞组和PRMT6q敲除组胚胎培养7 d的情况。结果与正常组相比,阻滞组的PRMT6蛋白质水平显著增加[(1.160±0.054)比(1.530±0.13)],H3R2me2升高[(1.340±0.019)比(1.710±0.011)],H3K4me3水平下降[(1.650±0.030)比(1.220±0.015)],差异有统计学意义(P<0.05)。与阻滞组比较,PRMT6敲除组PRMT6 RNA[(1.660±0.029)比(1.230±0.017)]、PRMT6蛋白[(1.400±0.030)比(1.050±0.058)]及H3R2me2蛋白水平显著下调[(1.410±0.011)比(1.340±0.019)],而H3K4me3水平升高[(1.710±0.011)比(1.340±0.019)];多能性标记Oct4[(1.710±0.016)比(1.160±0.049)]、Nanog[(1.690±0.089)比(1.260±0.051)]和Sox2[(1.680±0.091)比(1.310±0.057)]的水平被下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论敲除PRMT6可以挽救部分发育阻滞的胚胎,甚至单个发育受阻的胚胎也可以发育成融合胚胎。敲除PRMT6可促进人体外受精发育阻滞胚胎的发育。

基于体外受精-胚胎移植助孕女性患者年龄对早期胚胎发育动力学参数及胚胎发育潜能影响的Time-lapse技术评估

目的:探讨患者年龄对早期胚胎发育动力学参数及胚胎发育潜能的影响,为研究患者年龄与胚胎质量的关系提供理论依据。方法:回顾性分析在本科行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗的不孕女性患者的临床资料,根据患者年龄分为<30岁组(48例,439枚胚胎)、30岁≤患者年龄<40岁组(129例,1019枚胚胎)和≥40岁组(48例,176枚胚胎)。所有胚胎置于时差成像系统(Time-lapse技术)中培养至第3天;观察早期胚胎发育动力学情况,比较3组患者获卵数、受精率、卵裂率、可利用胚胎数和优胚数等,同时探讨患者年龄与胚胎发育阻滞的关系。结果:与≥40岁组比较,<30岁组和30岁≤患者年龄<40岁组患者获卵数、可利用胚胎数和优质胚胎数增加(P<0.05),3组胚胎从受精到3细胞时间(t3)、从受精到4细胞时间(t4)、从受精到5细胞时间(t5)、从受精到6细胞时间(t6)和从2细胞分裂到3细胞的时间(cc2)差异有统计学意义(P<0.05),其中30岁≤患者年龄<40岁组t2和t6长于<30岁组(P<0.05),≥40岁组t3长于<30岁组和30岁≤患者年龄<40岁组(P<0.05),且30岁≤患者年龄<40岁组t3长于<30岁组(P<0.05),≥40岁组t4和t5长于<30岁组(P<0.05),≥40岁组cc2长于<30岁组和30岁≤患者年龄<40岁组(P<0.05);3组患者原核消失时间(tPNF)、从受精到7细胞时间(t7)、从受精到8细胞时间(t8)、从3细胞分裂至4细胞的时间(s2)、从5细胞分裂至8细胞的时间(s3)和从3细胞分别到5细胞的时间(cc3)比较差异无统计学意义(P>0.05)。与<30岁组和30岁≤患者年龄<40岁组比较,≥40岁组患者碎片化率升高(P<0.05),其他异常分裂事件发生率有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);与<30岁组和30岁≤患者年龄<40岁组比较,≥40岁组胚胎发育至5细胞、6细胞、7细胞和8细胞的比例降低(P<0.05)。结论:患者年龄对部分胚胎发育动力学有一定影响,随着患者年龄的增长,胚胎出现发育阻滞概率升高。

氧化应激、线粒体损伤与胚胎发育阻滞的相关性研究进展

正常情况下,体内氧化和抗氧化之间处于动态平衡,当这种平衡被打破,就会形成氧化应激。氧化应激通过影响细胞的信号转导、线粒体的功能等参与一系列生理、病理过程。哺乳动物早期胚胎发育阻滞是胚胎体外培养中的普遍现象,氧化应激及线粒体功能改变是诱导胚胎发育阻滞的主要原因之一,并且可能会降低临床妊娠率。本文简要综述氧化应激、线粒体损伤与胚胎发育阻滞间的关系以及氧化应激导致胚胎发育阻滞机制的最新进展。

绒毛中IGF2及MMP-9表达水平与早期妊娠胚胎停止发育的相关性研究

目的分析绒毛组织中IGF2及MMP-9表达水平与早期妊娠胚胎停止发育的相关性。方法选取2017年1月至2018年12月间我院收治的40例胚胎停止发育患者作为观察组,40例正常早孕而人工流产患者作为对照组;采用免疫组化法检测绒毛组织中IGF2及MMP-9表达水平与及其与早期妊娠胚胎停止发育的相关性。结果观察组患者IGF2表达阳性率及高表达率均显著低于对照组(P<0.05),MMP-9表达阳性率及高表达率显著高于对照组(P<0.05);早期妊娠胚胎停止发育与IGF2表达水平呈显著负性相关(P<0.05),与MMP-9表达水平呈显著正性相关(P<0.05)。结论绒毛组织IGF2低表达和MMP-9高表达,可能是导早期妊娠胚胎停止发育的重要因素。