鱼类囊胚细胞和卵的电融合

细胞核移植是研究细胞分化、核质关系等有效手段，已取得了较好的成绩。但由于细胞核移植是一种显微操作技术，技术难度较大，尚难以普及与推广。我们在进行鱼类细胞电融合初步成功的基础上，开展了鱼类囊胚细胞和未受精卵的电融合研究，探讨电脉冲可逆击穿能否将外源细胞核引入卵内?以及外源细胞核能否促进未受精卵分裂、发育成正常的个体?

鱼类细胞电融合的初步研究

电融合是一种细胞生物学新技术，它的融合率高、操作简便、无毒性、可在显微镜下直接观察融合过程，是细胞杂交与基因转移的有效手段之一。近几年来，这一技术已广泛用于动物、植物、微生物细胞和原生质体的融合。但是，至今未见有电场诱导鱼类细胞融合的研究报道。我们采用国产元、器件，研制出一套供试验用的电融合装置，研究了电场诱导鱼类细胞的融合效应。

用电融合结合继代移核方法构建草鱼抗病体细胞工程鱼

选择对草鱼出血病病毒（ＦＲＶ）不敏感的草鱼肝组织进行细胞培养，建立了草鱼肝细胞株，命名为ＧＬＡ．对ＧＬＡ进行攻毒，发现其对ＦＲＶ有抗性。采用电融合结合继代移核的方法，将ＧＬＡ细胞（核），移植于草鱼未受精卵内，获得开口前的幼鱼８尾和存活仔鱼１尾，说明此方法能提高细胞的发育能力。通过比较体细胞工程鱼与供体、受体亲本草鱼的形态特征，发现体细胞工程鱼可数性状与供体草鱼的基本一致，初步推断体细胞工程鱼的遗传信息，是由供体细胞核提供的。

鱼类细胞融合

人工诱导鱼类细胞融合是细胞工程中的一项重要技术 .鱼类细胞是一种比较理想的融合材料 .概述了鱼类细胞融合研究的发展和主要成果 ,鱼类细胞融合技术主要包括病毒法、PEG法、电融合法、激光微束法 .

不同属泥鳅受精卵的激光融合及鱼类嵌合体

激光诱导细胞融合是细胞工程中的新方法,无毒性和融合点的可选性是该方法的突出优点。Schierenberg(1984)曾在线虫卵裂期用激光微束融合分裂球以研究细胞的节律性。

超远缘鱼类—斑马鱼和泥鳅—受精卵的激光融合

利用激光诱导方法对不同科鱼类,鲤科(Cyprinidae)的斑马鱼(Brachydanio Rerio)和鳅科(Cobitidae)的大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus Sauvage)受精卵进行的融合实验结果表明:不同科间的鱼类受精卵可以融合并继续存活发育,有的可发育至初孵仔鱼。但是,其融合、发育表现出与亲缘关系较近的鱼卵的融合、发育有较大的差异。

蓝猪耳离体受精初试

用体内-体外方法分离了蓝猪耳精细胞。用酶解和解剖方法分离了其成熟卵细胞。分离的精、卵细胞用电融合介导尝试了体外诱导融合。在合适的渗透压(6%甘露醇)和合适的氯化钙(0.04%CaCl2·2H2O)溶液中,用交流电场为30～35V,10～25s使精、卵细胞排队;用直流电场400～600V,45～50μs的脉冲穿孔条件可诱导30%的精、卵细胞融合和70%以上的卵细胞之间的融合。尝试了人工合子的单细胞培养但未获成功。诱导蓝猪耳精、卵细胞融合的条件与玉米和水稻不同。