Emdogain^@促进牙周组织再生及口腔临床应用的研究

Emdogain@为釉基质衍生物(enamei matrix derivative,EMD)与其相应载体的结合物,是商品化的EMD.由于可以诱导牙周组织再生及防止牙根的替代性吸收,国外己将Emdogain@逐步应用于临床牙周病和牙创伤的治疗.近年来,随着分子生物学、细胞学、基因工程的发展以及研究手段、实验仪器的改进,对EMD的研究达到了较深的层次,因而成为众多学者关注的热点问题之一.

Emdogain对人牙周膜细胞增殖、分化及合成Ⅰ型胶原能力的影响

目的:观察Emdogain对人牙周膜细胞(HPLC)增殖、分化及合成Ⅰ型胶原能力的影响,进一步探讨Emdogain促进牙周组织再生的机制。方法:体外培养人牙周膜细胞,在培养液中加入不同浓度的Emdogain,然后用MTT法、碱性磷酸酶试剂盒、羟脯氨酸试剂盒检测人牙周膜细胞的增殖、分化及合成Ⅰ型胶原能力。结果:EMD在100、50、25 mg/L各浓度时对HPLC细胞有明显的促增殖作用,且50 mg/L作用最强;25、50、100 mg/L浓度可增加HPLC细胞的ALP活性,且以50 mg/L浓度作用效果最佳,而200 mg/L浓度组在实验期间不能提高HPLC细胞的ALP的活性;25、50、100、200 mg/L4个浓度梯度EMD可增强HPLC形成Ⅰ型胶原的能力。结论:Emdogain对人牙周膜细胞的生物学活性有明显的促进作用,提示这可能是Emdogain促进牙周组织再生的重要机制。

釉基质蛋白在牙髓细胞增殖中的作用

目的探讨釉基质蛋白对牙髓细胞增殖的作用及其机理。方法分离培养人的牙髓细胞,加入不同浓度的Emdogain,采用化学发光免疫测定方法比较牙髓细胞的生长情况,采用Superarray方法研究加入Emdogain对细胞周期相关因子的影响。结果牙髓细胞在不同浓度的Emdogain作用下呈现不同的生长速率。Emdogain促进牙髓细胞生长的最佳浓度为300μg/ml。细胞周期相关因子的Superarray分析显示,Emdogain通过上调cyclin D1,p21,E6-AP,SUMO-1基因达到对细胞生长的促进作用。结论适宜浓度的Emdogain(45～600μg/ml)能够促进牙髓细胞的增殖。

Emdogain作用下人牙周膜细胞的差异表达基因

目的:筛选猪釉基质蛋白(EMD,Emdogain)作用于人牙周膜细胞后的差异表达基因。方法:培养第4代牙周膜细胞,实验组加入终浓度为100μg/mlEMD的无血清DMEM培养液,对照组为不含EMD的无血清DMEM培养液,培养3d,采用基因芯片技术检测相关的差异表达基因。结果:共得到112条差异表达基因,上调基因101条,下调基因11条。结论:EMD作用于人牙周膜细胞后,与细胞的生长、增殖,细胞外基质的合成,新生血管的形成,骨形成等功能相关的基因表达都显著提高,而脂蛋白代谢相关基因和角化细胞生长相关基因的表达下调。

Emdogain诱导人牙周膜细胞群向成牙骨质细胞分化的研究

目的探讨人牙周膜细胞群(human periodontal ligament cell populations,hPDLPs)在Emdogain(EMD,商品化的猪釉基质蛋白)诱导下生物学特性的改变。方法组织块法分离培养牙周膜细胞,用含100 mg/L EMD的培养液诱导6 d,光镜下观察细胞形态改变,扫描电镜观察细胞在牙骨质片上的形态变化。免疫细胞化学检测成牙骨质细胞相关矿化蛋白:骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COLⅠ)的表达。结果EMD诱导后细胞由长梭形向多角形的类成牙骨质细胞分化。免疫组织化学检测结果显示诱导后BSP、COLⅠ的表达增强。结论EMD可以诱导人牙周膜细胞群向类成牙骨质细胞方向分化。

釉基质蛋白对人牙周膜细胞群骨钙素的影响

目的研究人牙周膜细胞群(human periodontal ligament cell populations,hPDLPs)在釉基质蛋白(em-dogain,EMD)诱导下骨钙素(osteocalcin,OCN)表达的改变。方法组织块法分离培养人牙周膜细胞,实验组用含100 mg/L EMD的培养液诱导6 d,对照组不经EMD诱导培养。免疫细胞化学和实时定量聚合酶链反应(polymer-ase chain reaction,PCR)检测成牙骨质细胞矿化相关蛋白OCN的表达。结果免疫细胞化学结果显示,实验组和对照组hPDLPs细胞胞浆均可见黄色或棕黄色颗粒,OCN表达呈阳性;实验组hPDLPs的OCN检测平均光密度值为0.172 43±0.014 85,对照组为0.167 01±0.017 03,组间差异无统计学意义(t=0.757,P=0.459);实时定量PCR检测结果显示,实验组骨钙素相对表达量是对照组的1.13倍。结论 EMD对hPDLPs的OCN表达无明显影响。

Emdogain对共培养成骨样细胞及内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响

目的:评价emdogain对直接与间接共培养条件下成骨样细胞和内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响以及其间的相关性。方法:将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和成骨样细胞(MG63)按2∶1比例于12孔板内进行直接及间接共培养,并使用不同浓度(0、0.1、1、10、50μg/mL)的emdogain共培养细胞72 h。采用细胞计数仪结合流式细胞仪评价细胞增殖情况,并通过荧光激活流式细胞分选技术分选共培养细胞。对分选后的成骨样细胞及内皮细胞采用实时荧光定量PCR分别检测成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、I型胶原蛋白(Col-1)及成血管相关基因血管内皮细胞生长因子(VEGF)、VEGF酪氨酸激酶受体1(Flt-1)、VEGF酪氨酸激酶受体2(KDR)、von Willebrand因子(vWF)、内皮细胞C蛋白受体(EPCR)、E选择素(E-Selectin)、促血管生成素2(Ang-2)的表达水平。采用SPSS24.0软件包对数据进行统计学处理。结果:在直接与间接共培养条件下,Emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖的作用具有浓度依赖性。随着emdogain浓度增加,细胞增殖率逐渐下降。50μg/mL浓度的emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖抑制作用最为明显。随着emdogain浓度增加,MG63表面ALP和Col-1表达水平逐渐增加;50μg/mL浓度条件下,表达水平最高且与其他组基因表达水平差异显著(P<0.01)。同一emdogain浓度条件下,直接共培养MG63表面ALP及Col-1表达水平均显著高于间接共培养(P<0.01)。除10μg/mL组外,直接共培养条件下,VEGF表达水平均显著高于间接共培养(P<0.01)。50μg/mL组直接共培养的HUVEC表面Flt-1、KDR、vWF、E-selectin基因表达水平显著高于间接共培养及直接共培养的其他各组(P<0.01)。间接共培养条件下,HUVEC表面EPCR及Ang-2基因表达水平显著高于直接共培养(P<0.05)。结论:Emdogain对共培养MG63和HUVEC增殖的作用具有浓度依赖性,50μg/mL可能是emdogain作用的关键浓度。在直接共培养条件下,50μg/mL emdogain抑制MG63及HUVEC细胞增殖,但能同时促进MG63及HUVEC细胞相关基因表达;且该条件下emdogain的作用显著强于其他实验条件,细胞间直接交联可能在其中发挥重要作用。

Emdogain和辛伐他汀联合应用对人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的观察Emdogain、辛伐他汀联合应用对人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法取培养至第五代的人牙周膜细胞,分别用含50μg/mL Emdogain、含0.125μmol/L辛伐他汀、同时含50μg/mL Emdogain和0.125μmol/L辛伐他汀以及不含上述药物的4组无血清DMEM培养液培养,3 d后酶标仪检测各组细胞的碱性磷酸酶活性。结果仅含Emdogain、仅含辛伐他汀以及不含上述药物的培养液培养的人牙周膜细胞碱性磷酸酶光密度值分别为0.193±0.002、0.197±0.003及0.166±0.002。同时含Emdogain和辛伐他汀的培养液培养的细胞碱性磷酸酶光密度值为0.325±0.002,与其他3组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Emdogain和辛伐他汀联合应用对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性有促进作用,提示可能有利于牙周组织的再生。

釉基质蛋白衍生物治疗牙周组织再生进展的研究

Emdogain的主要成分是釉基质蛋白衍生物(enamel matrix derivative,EMD),是通过乙酸法、纯化层析法从猪恒牙胚提取获得。EMD不仅能促进无细胞性牙骨质再生,还能促进牙周膜细胞的增殖及分化,其用于牙周组织再生治疗已成为近年来牙周病领域研究的热点。文中就EMD促进牙周组织再生方面的研究及其口腔临床应用概况进行综述。

釉基质蛋白在口腔医学领域中的研究进展

釉基质蛋白为釉基质衍生物与其相应载体的结合物,具有促进牙周组织的再生、生物矿化和骨诱导等生物特性。研究者们已从体外培养、动物和临床试验对其进行研究并初具成果,笔者就釉基质蛋白及其与牙周疾病、颌面部骨缺损和牙种植以及其他口腔疾病的关系作一综述。